Primeira aula

• Apresentação da Disciplina

• Características do sangue

• Coleta de sangue

• Extensão sanguínea e coloração

• Hemograma

Profa Elvira Shinohara

Características do sangue

• Tecido líquido e renovável • Plasma Células sanguíneas • Eritrócitos • Leucócitos • Plaquetas

Tipos de leucócitos • Neutrófilos • Eosinófilos • Basófilos • Linfócitos • Monócitos

Função do sangue

• Transporte (O2, CO2, nutrientes, metabólitos, etc)

• Defesa (fagocitose)

• Homeostase (temperatura, controle eletrolítico, etc)

Dis

cip

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Fis

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Células sanguíneas

• Eritrócitos ou Hemácias ou Glóbulos vermelhos

• Leucócitos

Neutrófilos

Eosinofilos

Basófilos

Linfocitos

Monócitos

• Plaquetas

Granulócitos

Agranulócitos

Como visualizamos estas células?

• Extensão sanguínea

• Coloração da extensão sanguínea

Células sanguíneas

Células sanguíneas

Eosinófilo Neutrófilo Segmentado Linfócito

Plaquetas

Hemácias

Células sanguíneas

Monócito Linfócito

Plaquetas Hemácias

Células sanguíneas

Basófilos

Fonte: Hoffbrand & Pettit, 1991

Células sanguíneas

Células sanguíneas

Volume sanguíneo nas mulheres

Volume de sangue nas mulheres 61,9 mL/kg

Exemplo:

Mulher de 55 kg (peso corpóreo)

Logo:

• Volume de sangue 3.404 mL

• O volume total de eritrócitos corresponde a 24,8 ml/kg de peso, ou 1.362 mL

(usou o Ht=40% para este cálculo)

Volume sanguíneo nos homens

Volume de sangue nos homens = 62,4 mL/kg

Exemplo:

Homem de 75 kg (peso corpóreo)

Logo:

• Volume de sangue 4.680 mL

• O volume total de eritrócitos corresponde a 28,1 ml/kg de peso, ou 2.106 mL

(usou o Ht=45% para este cálculo)

Coleta do sangue

Locais de coleta de sangue

Punção venosa

Tubos à vacuo para coleta

A cor da tampa indica qual anticoagulante está sendo utilizado

Cor roxa = EDTA

Cor cinza = fluoreto de sódio

Cor azul = citrato de sódio

Cor verde = heparina

Cor vermelha/marrom = sem anticoagulante

Anticoagulantes utilizados em hematologia

EDTA

• K3EDTA e K2EDTA são os anticoagulantes mais adequados para a rotina hematológica (hemograma)

• EDTA quela o cálcio do sangue

• É utilizado na seguinte proporção: 10 µL de anticoagulante/1mL de sangue.

Vantagens:

• não altera a morfologia das células (desde que a proporção anticoagulante/sangue seja mantida)

• não dilui o sangue e impede a agregação plaquetária

Anticoagulantes utilizados em hematologia

CITRATO DE SÓDIO

• É o anticoagulante de escolha para os testes de coagulação e prova de agregação plaquetária.

O citrato de sódio reage com o cálcio formando um composto insolúvel.

• É utilizado na seguinte proporção:

1 mL de anticoagulante/ 9 mL de sangue.

ou

0,5 mL de anticoagulante/ 4,5 mL de sangue

• Desvantagem: altera a morfologia das células e dilui o sangue (uma parte de anticoagulante para 9 partes de sangue).

Anticoagulantes utilizados em hematologia

HEPARINA

• A heparina age pela formação de um complexo com a antitrombina III plasmática, que inibe a trombina e outros estágios dos fatores de coagulação

Vantagens

• não altera a morfologia das células e não dilui o sangue

• Desvantagem: o preço do anticoagulante é maior do que o EDTA

EXTENSÃO SANGUÍNEA análise da morfologia é essencial para o diagnóstico

Plasma

Células sanguíneas

Células sanguíneas

Extensão Sanguínea

COLORAÇÃO SANGUÍNEA

Corantes do Tipo Romanovsky

• São misturas que contem eosina e azul de metileno dissolvidos em metanol

• Na solução envelhecida (após dias do preparo do corante), o azul de metileno se oxida em gradações diferentes, originando os azures de metileno

Coloração do tipo Romanowsky

• O corante de Romanowsky (neutros) é uma solução alcoólica de um complexo de eosinato de azul e azures de metileno

• A diferença entre os vários corantes derivados do corante primitivo de Romanowsky acha-se na proporção que se emprega de azul-de-metileno e de eosina, ou no método de tratamento do azul-de-metileno, antes de sua combinação com a eosina

Princípio da coloração

• Os componentes Azures em sua forma de dímeros ligam-se a moléculas aniônicas, exemplo os grupos fosfato do DNA

• Os grupamentos ácidos dos ácidos nucleicos e proteínas do núcleo celular e do citoplasma tem afinidade pelo corante básico Azul- de -Metileno

Princípio da coloração

• A eosina na forma de monômero se liga aos sítios catiônicos das proteínas

• A presença de grupamentos básicos na molécula de Hb resulta na afinidade por corantes ácidos, corando-se pela eosina

Principio da coloração

CORANTE CÉLULA

Azul de Metileno cora Núcleo (DNA)

(básico) (ácido)

Eosina cora Hb

(ácido) (básico)

Nomenclatura usual

• Coloração Ortocromática: a célula cora-se com a mesma cor do corante

• Coloração Metacromática: a célula toma uma cor diferente daquela do corante

Nomenclatura usual

• Estruturas celulares que se coram em pelo Azul de Metileno são chamadas de basófilas (corando-se de azul)

• Estruturas celulares que se coram pela Eosina são chamadas de acidófilas (corando-se em rosa)

Tipos de corantes de Romanovsky

• May-Grunwald ou Jenner,

• Giemsa

• Leishman

• Wright

(Podem ser encontrados, no comércio, na forma de reagentes ou em soluções já preparadas pelo fornecedor)

Células sanguíneas

Contagem relativa dos leucócitos • É realizada através da análise morfológica dos leucócitos, contando no

mínimo 100 leucócitos, diferenciando célula a célula.

Campo muito grosso Campo adequado Campo muito fino

Contagem relativa dos leucócitos • É realizada através da análise morfológica dos leucócitos, contando no

mínimo 100 leucócitos, diferenciando célula a célula.

Campo muito

grosso Campo adequado Campo muito fino

Campos de leitura na extensão sanguínea

Corpo da extensão sanguínea

Região grossa da extensão (cabeça)

Não deve ser feito contagem das células

nesta região da extensão sanguínea

Região da cauda (muito fina)

Não deve ser feito contagem das células nesta região da extensão sanguínea

Campos que NÃO devem ser analisados na extensão sanguínea

Região muito fina Cauda da extensão

Região muito grossa

Cabeça da extensão sanguínea

Contagem relativa dos leucócitos

• É realizada através da análise morfológica dos leucócitos, contando no mínimo 100 leucócitos, diferenciando célula a célula.

A

A

B

A – Cerca de 25 células

B- Cerca de 50 células

Contagem relativa dos leucócitos

As células não tem distribuição uniforme na extensão sanguínea

Cabeça Corpo Cauda

Os linfócitos predominam no meio da extensão

Neutrófilos e monócitos predominam nas margens e na cauda

Problemas na coloração • Presença de precipitados do corante na extensão sanguínea

corada

• Uso de lâminas sujas com gordura

• Secagem durante o período de coloração

• Lavagem inadequada ao término da coloração

• Filtração inadequada dos corantes (vai aparecer os precipitados de corante)

Precipitados de corante

Coloração inapropriada

HEMOGRAMA

Plasma

células

HEMOGRAMA

Exame hematológico mais solicitado

Consiste na análise qualitativa e quantitativa das

células sanguíneas

Fornece parâmetros para controle e auxílio no

diagnóstico das anemias, de vários processos

infecciosos e de alterações no número das plaquetas

Hemograma

• Eritrograma (avalia série vermelha)

• Leucograma (avalia série branca)

• Contagem de plaquetas

Exemplo de um laudo de hemograma

eritrograma

leucograma

Contagem de plaquetas

Bibliografia recomendada

. Dacie & Lewis. Practical Haematology. 8a Edition. Churchill Livingstone.

• Stiene-Martin EA, Lotspeich-Steininger, Koepke JA – Clinical Hematology- Principles, Procedures, Correlations. Editora Lippincott, 2edição, 1998.

• Lorenzi TF, D’Amico E, Daniel MM, Silveira PAA, Buccheri V – Manual de Hematologia – Propedêutica e Clínica. Editora Medsi 3 edição, 2003.