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UFMA UNIVERSIDADE FEDERAL DO MARANHO.CCET CENTRO DE CINCIAS EXATAS E TECNOLOGIA.CURSO: ENGENHARIA QUMICADISCIPLINA: BIOQUMICA DE ALIMENTOSMINISTRANTE: PROF. ALEXANDRA M.S. SOARESANA BEATRIZ DA PAIXO RIBEIRO E BIANCA SILVA CORDEIRO

Relatrio Referente Aula Prtica Ensaio Peroxidase

So Lus26-04-2015Ana Beatriz da Paixo RibeiroBianca Silva Cordeiro

Relatrio:ENSAIO PEROXIDASE

Relatrio tcnico apresentado como requisito parcial para obteno de aprovao na disciplina de Bioqumica de Alimentos, no Curso de Engenharia Qumica, na Universidade Federal do Maranho.

Prof. Dr. Alexandra M. S. Soares

So Lus26-04-2015SUMRIO

INTRODUO3OBJETIVO4MATERIAIS E REAGENTES4PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL4RESULTADOS E DISCUSSES5CONCLUSO8REFERENCIAS9

1. INTRODUO

Enzimas so polmeros biolgicos, geralmente protenas, catalisadores de reaes bioqumicas pouco espontneas e muito lentas, que tornam a vida possvel. Alm disso, muitas reaes bioqumicas comuns envolvem eventos qumicos que so desfavorveis ou improvveis no ambiente celular, tais como a formao de intermedirios carregados ou a coliso de duas ou mais molculas com a orientao precisa necessria para que ocorra a reao. Logo, a presena e manuteno de um conjunto completo e balanceado de enzimas fundamental para o metabolismo.As peroxidases so uma famlia de protenas que incluem enzimas com origem em mamferos, fungos e plantas. A peroxidase catalisa a oxidao provocada pelo perxido de hidrognio, esta apresenta uma alta resistncia trmica. Devido a este fato, a peroxidase um indicador apropriado para o controle da inativao total de todas as enzimas. A atividade da peroxidase pode ser determinada atravs do teste do guaiacol. Neste a peroxidase reage com o perxido de hidrognio, liberando O2, que por sua vez oxida o guaiacol. Este adquire uma cor castanha acusando a presena de enzimas ativas.A enzima peroxidase converte o guaiacol e perxido de hidrognio em tetraguaiacol e gua. O tetraguaiacol um composto colorido.

Figura 1 Reao Cataltica do Guaiacol e Perxido de Hidrognio com formao do Tetraguiacol em presena de Peroxidase

2. OBJETIVODeterminar qualitativamente e quantitativamente a atividade da enzima peroxidase numa amostra de extrato de buriti atravs da formao de produto da reao cataltica entre perxido de hidrognio e guaiacol, que gera o tetraguaiacol, um composto colorido.

3. MATERIAIS E REAGENTESMateriais Tubos de ensaio; Pipetas, ponteiras, estantes; Cubeta plstica;

Reagentes Tampo Acetato de sdio 50mM, pH 5,2; gua destilada; Perxido de Hidrognio 50mM, 30%, preparado momentos antes do ensaio; Guaiacol; Amostra contendo extrato de buriti

4. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL Identificou-se os tubos de ensaio; Aos tubos de ensaio adicionou-se em ordem, 800L do tampo, 500L de guaiacol e por fim 500L de perxido. Ao primeiro tubo de ensaio, adicionou-se 100L de gua, e a este denominou-se branco, pois sua finalidade de zerar, calibrar, o espectrofotmetro. Adicionou-se a primeira soluo contendo o branco Cubeta e colocou-se o mesmo no espectrofotmetro com transmitncia de 100% para que este fosse zerado. Aps zerar, colocou-se a soluo dos tubos adicionando-se 100L da amostra na cubeta plstica a fim de realizar a leitura. Leitura feita na faixa de absorbncia de 480nm. O procedimento acima contendo a amostra foi realizado em triplicata, afim de que se pudesse ter maior preciso nos resultados a serem discutidos. Com as amostras, em triplicata, faz-se o seguinte: faz-se a primeira leitura aps 10 segundos de adio de perxido. Em seguida, acompanha-se o decrscimo da absorbncia ao longo do tempo em intervalo de 20 segundos. Fazendo-se anotaes das mesmas.Comment by Bianca Cordeiro: Entender e explicar pra que serve a primeira contagem de 10s.

5. RESULTADOS E DISCUSSESA seguinte tabela foi obtida como resultado da triplicata feita com as amostras de extrato de buriti onde tm-se a absorbncia observada em cada tempo:TEMPOABSORBNCIA

100,1720,2160,170

200,2150,2580,215

400,2900,3210,287

600,3550,3820,350

800,4120,4390,408

1000,4600,4920,461

1200,5220,5470,514

A mdia das absorbncias das amostras feitas em triplicata teve como resultado os valores na tabela abaixo:

TEMPOMDIA

100.186

200.229

400.299

600.362

800.420

1000.471

1200.528

Afim de que se determinasse a atividade da peroxidase, o grfico abaixo foi traado:

O grfico acima mostra a relao da absorbncia com o tempo. A linha de tendncia traada at o zero corrige o valor da absorbncia encontrada no experimento, resultando no valor de inclinao igual a 0,005 que tem unidades de absorbncia por segundo (UA/s). Pode-se notar que os primeiros 10 segundos no so identificados no grfico, visto que estes so considerados apenas como zeros, o incio da absorbncia. Alm disso, verifica-se que o R2 apresenta um valor muito baixo, o que indica algum erro no experimento.

Para determinar a atividade da peroxidase em unidades de UA/mgP, primeiramente transformamos de segundo para minuto a inclinao da reta:

Transformamos ento as unidades da amostra de microlitro para mililitro:

Com a quantidade de protena determinada na amostra de extrato de buriti atravs do experimento anterior (Quantificao de Protenas - Mtodo de Bradford) temos que em 1 mL de amostra temos 0,4229 mg de Protena, logo em 0,10 mL temos ento 0,04229 mg de Protena. Logo, a atividade da peroxidase na amostra de extrato de buriti durante o tempo de experimento de 2 minutos igual a:

6. CONCLUSES

Com o presente relatrio pde-se determinar a presena da enzima peroxidase na amostra de extrato de buriti. No entanto, quando foi traada a linha de tendncia correspondente aos dados coletados encontrou-se um erro inesperado, uma vez que o R da equao apresentou um valor muito baixo. Desta forma concluiu-se que o experimento realizado acima deve ser repetido, e em caso de resultados semelhantes deve ser descartado para a determinao de peroxidase em extrato de buriti.

7. REFERENCIAS

LEHNINGER, Albert Lester, 1917-1986.L princpios de bioqumica/David L. Nelson, Michael M. Cox; traduzido por Arnaldo Antnio Simes, Wilson Roberto Navega Lodi. 3. Ed. So Paulo 2002.