7/28/2019 Resoluo do Exame Normal de 2013.pdf

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estudar o efeito do splicing do mRNA, uma vez que a maior parte das tcnicasrecombinantes recorrem a sistemas procariotas (no ocorre splicing) e portanto ter-se-de usar cDNA e no o gene que codifica para a protena.

4. O sistema SDS-Page recorre ao detergente dodecilsulfato de sdio que um poderosotensioactivo que faz com que a protena fica na forma estendida, totalmente

desnaturada, ou seja, perde a sua conformao tridimensional (estrutura terciria) peloque o SDS se arranja em torno da protena, transofrmando-a numa estrutura cilindrica.Muitas das vezes usa-se beta-mercapoetanol para reduzir as pontos dissulfureto eportanto fazer com que a protena fique totalmente desnaturada. Desta forma possvel separar as protenas em gel de poliacrilamida pelo seu peso molecular.

5.a) e b) O immunoblotting serve para identificar determinadas bandas de um gel de

poliacrilamida, por reao especfica de um anticorpo com as protenas do gel.Contudo, para o uso desta tcnica tem de se usar uma transferncia as protenas dogel para uma membrana de nitrocelulose que acontece por aco de um campoelctrico. Posteriomente mergulha-se a membrana de nitrocelulose numa soluo comos anticorpos marcados radiativamente, por exemplo, e faz-se a revelao de modo aidentificar a que banda corresponde a protena em causa. A ELISA um mtodo quetambm recorre a anticorpos mas com a finalidade de determinar a concentrao deum determinado antignio. Por exemplo, temos um antignio ao qual se liga umanticorpo especfico, e depois fazemos ligar um outro anticorpo a este primeiro. Estesegundo anticorpo possu uma enzima acoplada de modo a provocar degradao deum substracto, cujo produto corada. Assim a absorvncia ser uma medida daconcentrao, e portanto o uso de padres possvel para o traado de uma reta decalibrao e que pode ser usada para determinar a concentrao de antignio na

soluo amostra.

2 Parte6.a) O mtodo da gosta suspensa baseia-se na colocao de uma gota da soluo que

contm a protena a cristalizar numa lamela e invert-la sobre um recipiente com umasoluo de elevada concentrao salina. Assim a presso de vapor do lquido da gota superior, sendo que a gua vai mover-se da soluo da gota para a soluo. Assim, apouco e pouco, a soluo da gota fica mais concentrada na protena, por perda degua, at que se atinge o limite de solubilidade a partir do qual se comeam a formarcristais de protena. O sistema fechado evita que a humidade atmosfrica seja

absorvida pela soluo salina e portanto que a gua da gota no seja removida eportanto, dada a maior concentrao da gota, a gota iria absorver parte da humidadedo ar, dando-se o fenmeno contrrio ao pretendido.

b) No se conhecendo as propriedades da protena necessrio saber qual aconcentrao de NaCl que possibilita uma perda de gua, por parte da gota, velocidade adequada, evitando a formao rpida de cristais com aspecto amorfo e dereduzidas dimenses, ou ento que leve formao de poucos cristais muitodeformados. Existe, portanto, uma concentrao salina ptima para ocorrer a formaodos cristais de cada protena.

7. O PDB um repositrio de documentos com as coordenadas atmicas das maisdiversas protenas e que foram determinadas ou por NMR ou cristalografia de raios X.Assim podemos descarregar e modelar as estruturas das protenas em softwares

Proposta de Resoluo de Henrique Fernandes

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