RESULTADOS E DISCUSSÃO
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Aspectos morfológicos e bioquímicos dos efeitos do cádmio em embriões de Gallus gallus Gisleine Jarenko Steil Iniciação científica/Fundação Araucária Orientadora: Claudia Feijó Ortolani-Machado; Co-orientador Francisco Filipak Neto INTRODUÇÃO - Embriões de aves são utilizados para estudos de agentes tóxicos, por serem sensíveis à ação de contaminantes. O cádmio (Cd) é um metal tóxico com efeitos adversos em vários modelos animais. Trabalhos anteriores demonstraram malformações induzidas por Cd em embriões de ave. Um mecanismo possivelmente envolvido com essa toxicidade é a geração de espécies reativas de oxigênio e consequentemente o estresse oxidativo. Portanto, o objetivo deste trabalho foi analisar um provável estresse oxidativo induzido pelo Cd em embriões de aves através de ensaios bioquímicos. MÉTODOS - Ovos embrionados de Gallus gallus foram divididos em 3 grupos: controle com tampão PBS, contaminados com 5μM e 50μM de cloreto de cádmio (CdCl2). Foram injetados 100μl de cada solução do grupo, na câmara de ar. Após a exposição, os ovos foram incubados por 3 e 7 dias. Os embriões foram então coletados, lavados em PBS, armazenados em frezzer -80°C. Após isso foram homogeneizados e aliquotados. Foi realizado as análises da da glutationa (GSH), peroxidação lipídica (LPO), carbonilação de proteínas (PCO) e catalase (CAT), os dados foram analisados estatisticamente. RESULTADOS E DISCUSSÃO • Glutationa: não houve diferença significativa entre os grupos analisados de embriões com 7 dias, indicando que não é um sistema relacionado com a toxicidade do Cd. • Peroxidação lipídica: 3 dias: diferença significativa entre controle e contaminados, sendo mais alta no grupo controle, podendo indicar um aumento das defesas celulares induzida por Cd, ou uma falha em processos geradores de peroxidação dos lipídios. 7 dias: diferença significativa entre grupo Cd 5µM e Cd 50 µM sendo maior na menor concentração. Comparação 3 e 7 dias: LPO aumenta significativamente em função do tempo, ou seja, é maior em embriões com 7 dias do que com 3 dias, para todos os grupos. • Carbonilação de proteínas: Diferença significativa entre o grupo controle PBS e Cd 5 µM, sendo maior no contaminado, demonstrando que o Cd promove efeitos tóxicos e danos a proteínas, mas não nos lipídios • Catalase (teste): 3 dias: Não foi possível mensurar, apresentou baixa atividade em embriões neste tempo. 7 dias: detectável; maior atividade. A análise demonstra que esse sistema antioxidante está em processo de desenvolvimento e embriões mais jovens são mais sensíveis. • Correlação entre os dados: LPO x GSH: 86%; PCO x LPO: 77%. Outras análises não apresentaram correlações. CONCLUSÃO - A análise da catalase demonstra que embriões com 3 dias apresentam um sistema de defesa menos robusto que aqueles com 7 dias. A GSH não se alterou. A LPO aumenta de acordo com o tempo incubação, mas não explica a toxicidade do cádmio neste trabalho. A PCO induzida por Cd pode ter relação com os efeitos morfológicos observados. Ainda, a correlação entre os valores de LPO x GSH e PCO x LPO demonstra que esses sistemas estão inter- REFERÊNCIAS – AEBI, H. Catalase in vitro. Methods Enzymol., v. 105, p. 121–126, 1984; BRADFORD, M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of proteindye binding. Analytical bio; LEVINE, B. R. L.; WILLIAMS, J. O. Y. A.; STADTMAN, E. R. Carbonyl assays for determination of oxidatively modified proteins. v. 186, 1991; SEDLAK, J.; LINDSAY, H. Estimation of total, protein-bound, and nonprotein sulfhydryl groups in tissue with Ellman’s reagent. v. 205, p. 192–205, 1968; STEIL, G. J. Análise anátomo-morfológica dos efeitos do cádmio em embriões de Gallus gallus. 20° Evento de Iniciação Científica, UFPR, 2012; YAMAMOTO, F. Y. et al. Cadmium effects on early development of chick embryos. Environmental toxicology
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Aspectos morfológicos e bioquímicos dos efeitos do cádmio em embriões de Gallus gallusGisleine Jarenko SteilIniciação científica/Fundação AraucáriaOrientadora: Claudia Feijó Ortolani-Machado; Co-orientador Francisco Filipak Neto
INTRODUÇÃO - Embriões de aves são utilizados para estudos de agentes tóxicos, por serem sensíveis à ação de contaminantes. O cádmio (Cd) é um metal tóxico com efeitos adversos em vários modelos animais. Trabalhos anteriores demonstraram malformações induzidas por Cd em embriões de ave. Um mecanismo possivelmente envolvido com essa toxicidade é a geração de espécies reativas de oxigênio e consequentemente o estresse oxidativo. Portanto, o objetivo deste trabalho foi analisar um provável estresse oxidativo induzido pelo Cd em embriões de aves através de ensaios bioquímicos.
MÉTODOS - Ovos embrionados de Gallus gallus foram divididos em 3 grupos: controle com tampão PBS, contaminados com 5μM e 50μM de cloreto de cádmio (CdCl2). Foram injetados 100μl de cada solução do grupo, na câmara de ar. Após a exposição, os ovos foram incubados por 3 e 7 dias. Os embriões foram então coletados, lavados em PBS, armazenados em frezzer -80°C. Após isso foram homogeneizados e aliquotados. Foi realizado as análises da da glutationa (GSH), peroxidação lipídica (LPO), carbonilação de proteínas (PCO) e catalase (CAT), os dados foram analisados estatisticamente.
RESULTADOS E DISCUSSÃO• Glutationa: não houve diferença significativa entre os grupos analisados de embriões com 7 dias, indicando que não é um sistema relacionado com a toxicidade do Cd.• Peroxidação lipídica: 3 dias: diferença significativa entre controle e contaminados, sendo mais alta no grupo controle, podendo indicar um aumento das defesas celulares induzida por Cd, ou uma falha em processos geradores de peroxidação dos lipídios. 7 dias: diferença significativa entre grupo Cd 5µM e Cd 50 µM sendo maior na menor concentração. Comparação 3 e 7 dias: LPO aumenta significativamente em função do tempo, ou seja, é maior em embriões com 7 dias do que com 3 dias, para todos os grupos.• Carbonilação de proteínas: Diferença significativa entre o grupo controle PBS e Cd 5 µM, sendo maior no contaminado, demonstrando que o Cd promove efeitos tóxicos e danos a proteínas, mas não nos lipídios• Catalase (teste): 3 dias: Não foi possível mensurar, apresentou baixa atividade em embriões neste tempo. 7 dias: detectável; maior atividade. A análise demonstra que esse sistema antioxidante está em processo de desenvolvimento e embriões mais jovens são mais sensíveis.• Correlação entre os dados: LPO x GSH: 86%; PCO x LPO: 77%. Outras análises não apresentaram correlações.
CONCLUSÃO - A análise da catalase demonstra que embriões com 3 dias apresentam um sistema de defesa menos robusto que aqueles com 7 dias. A GSH não se alterou. A LPO aumenta de acordo com o tempo incubação, mas não explica a toxicidade do cádmio neste trabalho. A PCO induzida por Cd pode ter relação com os efeitos morfológicos observados. Ainda, a correlação entre os valores de LPO x GSH e PCO x LPO demonstra que esses sistemas estão inter-relacionados.
REFERÊNCIAS – AEBI, H. Catalase in vitro. Methods Enzymol., v. 105, p. 121–126, 1984; BRADFORD, M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of proteindye binding. Analytical bio; LEVINE, B. R. L.; WILLIAMS, J. O. Y. A.; STADTMAN, E. R. Carbonyl assays for determination of oxidatively modified proteins. v. 186, 1991; SEDLAK, J.; LINDSAY, H. Estimation of total, protein-bound, and nonprotein sulfhydryl groups in tissue with Ellman’s reagent. v. 205, p. 192–205, 1968; STEIL, G. J. Análise anátomo-morfológica dos efeitos do cádmio em embriões de Gallus gallus. 20° Evento de Iniciação Científica, UFPR, 2012; YAMAMOTO, F. Y. et al. Cadmium effects on early development of chick embryos. Environmental toxicology and pharmacology, v. 34, n. 2, p. 548–55, set. 2012.
