Universidade Estadual Paulista Instituto de Biociências

Departamento de Morfologia

EMBRIOLOGIA

ROTEIROS PARA AULAS PRÁTICAS

Profa. Dra. Maria Dalva Cesario Responsável

2008

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ÍNDICE

ESPERMATOGÊNESE

OVOGÊNESE

CLIVAGEM

GASTRULAÇÃO NAS AVES

ORGANOGÊNESE RUDIMENTAR

SISTEMA NERVOSO I

SISTEMA NERVOSO II

SISTEMA NERVOSO III

APARELHO DA VISÃO

SISTEMA MUSCULAR ESQUELÉTICO

DESENVOLVIMENTO DO CORAÇÃO

SISTEMA UROGENITAL

SISTEMA DIGESTÓRIO

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A GAMETOGÊNESE

Em todos os organismos de reprodução sexuada ocorre o processo de gametogênese em órgãos especiais denominados GÔNADAS. Neste processo, as células sexuais primitivas sofrem determinadas modificações para a produção dos gametas. Esta evolução se faz diferentemente de acordo com o sexo do indivíduo, porém possuem algumas características comuns. Em ambos os sexos, o processo de gametogênese compreende quatro etapas:

A) Etapa de Origem e Migração dos Gonócitos - as células germinativas primordiais, os gonócitos se originam na parede do Saco vitelino e em seguida migram para dentro do corpo do Embrião em desenvolvimento.

B) Etapa de Multiplicação Os Gonócitos começam a se multiplicar por mitose, a partir do momento em que a gônada se diferencia, aumentando com isso o número de células na gônada ainda em desenvolvimento. Estes elementos são diplóides (2 n).

C) Etapa de Redução do Lote cromossômico 2n - n - As células germinativas sofrem sucessivamente duas divisões especiais, ditas de maturação, ou meiose. Esta divisão meiótica tem por efeito, não somente a redução dos números de cromossomos pela metade como também fornecer enfim, o gameta, a célula germinativa sexuada.

D) Etapa de Maturação Estrutural e Funcional dos

Gametas. As células passam por mudanças especiais e peculiares de cada sexo para se tornarem os gametas maduros e funcionais

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A ESPERMATOGÊNESE

O processo nos indivíduos de sexo masculino é denominado espermatogênese. Ocorre nos testículos, no interior dos túbulos seminíferos. É o processo através do qual a célula germinativa primordial sofre modificações para originar a célula sexuada masculina, chamada espermatozóide. ANÁLISE AO MICROSCÓPIO ÓPTICO Lâmina nº.______ - Corte transversal de testículo de rato. Orientação: 1. Com a objetiva de menor aumento, observe o corte histológico. A coloração realizada foi H.E., hematoxilina-eosina. Observe os diferentes túbulos seminíferos. Estes estão contidos em um tecido que reveste o órgão externamente, a túnica albugínea a qual é uma cápsula de tecido conjuntivo fibromuscular. Observe que os túbulos seminíferos estão circundados por um tecido conjuntivo também chamado de tecido intersticial. Ele contém, além dos elementos conjuntivos, neurais e vasculares pequenos grupos de células endócrinas chamadas Células de Leydig. Estas células produzem o hormônio sexual masculino, a testosterona. 2. Mude de objetiva para ampliar as estruturas. Focalize um túbulo seminífero para analisar as células que compõem seu epitélio. A luz de cada túbulo seminífero é revestida por um epitélio seminífero com várias camadas celulares. Este epitélio seminífero localiza-se sobre uma membrana basal que é circundada por uma túnica própria fibromuscular. Passaremos a analisar o epitélio seminífero: A) A camada basal deste epitélio é constituída pelas espermatogônias. As espermatogônias dividem-se por mitose e produzem um maior número de espermatogônias. São denominadas de “stem cells”. Esta atividade caracteriza a Fase de Multiplicação. As espermatogônias se encontram junto à parede do túbulo seminífero e são visíveis através dos seus núcleos que se apresentam ovalados ou arredondados, com cromatina densa, portanto são bem corados.

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B) Após a puberdade, as espermatogônias, por aumento do volume, originam os Espermatócitos Primários, os quais se preparam para sofrer a meiose. Estas células se localizam um pouco mais central no túbulo e se apresentam com um núcleo volumoso e a cromatina já está se condensando. Podemos observar espermatócitos I nos diferentes estágios da 1a. prófase da meiose. Nesta primeira etapa, estas células se encontram em Fase de Crescimento. C) No final desta divisão reducional, resultam os Espermatócitos Secundários (n). Estas células estão em direção mais central e poderão ser vistas em alguns túbulos seminíferos apenas. O núcleo do espermatócito II é menor e está bem denso, com uma grande área citoplasmática eosinófila ao redor. Esta célula está na Fase de Maturação. D) Observe próximo à luz tubular, muitas células pouco coradas com núcleos esféricos, cromatina frouxa e nucléolo evidente. São as espermátides. Elas se encontram na maioria dos túbulos seminíferos e são as mais numerosas. Como estas células estão em processo de citodiferenciação denominado de Espermiogênese, para se transformar em espermatozóides, poderão ser observadas ainda espermátides com formato ovalado, alongado ou fusiforme. E) Finalmente os espermatozóides são encontrados dispersos neste epitélio seminífero e o seu flagelo está no centro do túbulo seminífero. A cabeça do espermatozóide contém os cromossomos bem compactados, portanto ela se cora intensamente. F) Além das células germinativas, existe um outro tipo celular, neste epitélio, que é da linhagem somática. É a célula de Sertoli. Esta célula se apresenta com um núcleo pálido localizado na base do epitélio germinativo, ou seja, entre as espermatogônias. Estas células emitem prolongamentos citoplasmáticos para o centro do túbulo, nos quais as células germinativas estão sustentadas. Possuem a cromatina pouco visível e nucléolo bem evidente. Assim, pode-se notar que o processo de espermatogênese, no interior do túbulo seminífero tem direção centrípeta. Esquematize as estruturas observadas.

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Lâmina nº. _______ Esfregaço de sêmen Focalize primeiramente, na objetiva de menor aumento e em seguida mude para a objetiva de maior aumento. Observe a morfologia das células germinativas masculinas - os espermatozóides. Toda célula, independente da espécie animal é constituída das seguintes porções: A) Cabeça - geralmente é alongada e aplanada. Nela estão o núcleo da célula e uma organela denominada ACROSSOMO - é uma estrutura membranosa rica em enzimas as quais têm importância para a penetração no óvulo. B) Colo - é uma região de constrição onde estão os centríolos. C) Peça intermediária - é a região seguinte, onde estão as mitocôndrias, organizadas em forma de espiral em torno do filamento central. D) Flagelo - é constituído de uma sucessão de microfibrilas circulares. Todas estas porções estão envoltas por uma membrana citoplasmática.

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A OVOGÊNESE����

O processo de gametogênese nos indivíduos do sexo feminino é denominado de Ovogênese. Ocorre no interior do Ovário, na região cortical. É o processo através do qual a célula germinativa primitiva sofre modificações para originar a célula sexual feminina chamada óvulo. Nos mamíferos a produção de óvulos obedece a um ciclo denominado Ciclo Sexual.

ANÁLISE AO MICROSCÓPIO ÓPTICO |

Lâmina nº. Corte longitudinal de ovário de cadela. Orientação: 1. Observe o corte com a objetiva de menor aumento. Foi corado com HE (Hematoxilina-eosina). O órgão possui duas porções bem diferenciadas pela coloração; uma porção externa, que circunda todo o órgão, onde predomina a coloração violeta. É a região cortical ou simplesmente córtex. Possui ainda outra região central onde predomina a coloração rosa - é a região medular ou medula. A região cortical é recoberta por um epitélio germinativo. Abaixo deste epitélio encontra-se a túnica albugínea, cápsula de tecido conjuntivo fibroso do ovário. O restante do tecido conjuntivo ovariano é denominado estroma. O córtex contém os folículos ovarianos em diferentes estágios de desenvolvimento. A medula do ovário é constituída por tecido conjuntivo fibroelástico relativamente frouxo com vasos sanguíneos. 2. Focalize, portanto, apenas a região cortical para começar a classificar os folículos. Todo folículo ovariano é formado pela célula germinativa envolta por uma ou mais camadas de células foliculares. São os seguintes, os folículos ovarianos: A) Folículo Primordial; Encontre uma célula germinativa pequena, envolta por uma camada de poucas células foliculares aplanadas ou ovaladas. A célula germinativa é o Ovócito Primário em Fase de Crescimento. O ovócito primário iniciou a fase de crescimento ainda na vida intra-uterina, parando antes do nascimento em Prófase I, no diploteno.

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B) Folículo Primário: É quando a célula germinativa estiver envolta por uma camada mais numerosa de células foliculares cúbicas de núcleo arredondado. Este folículo começa a surgir após a puberdade, por ação dos hormônios, quando se inicia o ciclo sexual. C) Folículo em crescimento: É o Ovócito Primário envolto por duas ou mais camadas de células foliculares. Estas camadas de células foliculares constituem a Granulosa. Entre a granulosa e o ovócito, surge a Zona Pelúcida, uma camada de glicoproteínas secretadas pelas células foliculares. Esta camada se apresenta com uma coloração avermelhada e quanto maior o folículo, mais espessa ela fica. A teca folicular também se organiza. Assim, os eventos que caracterizam esta fase são:

a. aumento do numero de células foliculares (granulosa) b. aumento do diâmetro (volume) do ovócito I c. formação da Zona Pelúcida d. Formação da Teca Folicular

D) Folículo de De Graaf: Este folículo é bastante grande e se caracteriza pelo aparecimento de um espaço intercelular denominado de ANTRO, que está preenchido por líquido folicular. A camada de células foliculares que circunda o ovócito é a corona radiata. O ovócito se torna secundário momentos antes da ovulação. Ele é também chamado de Folículo Maduro ou Folículo Antral. As tecas interna e externa estão bem desenvolvidas, a primeira apresentando numerosas células e capilares, enquanto que a outra é menos celularizada e mais fibrosa. Nesta fase da meiose ocorre a liberação do 1º. corpúsculo polar. Este folículo é um folículo pronto para a ovulação. F) Folículos Atrésicos; Estes folículos estão em degeneração e caracterizam-se pela presença de fibroblastos, núcleos picnóticos e um ovócito degenerado. G) Corpo Lúteo: Após a ovulação do ovócito secundário com a zona pelúcida e a corona radiata, o restante do folículo, ou seja, a granulosa juntamente com a teca interna, se transforma em células luteínicas, formando no conjunto, o Corpo Lúteo. Esta estrutura pode ser observada no corte histológico, entre as regiões cortical e medular, como uma área amarelo-esbranquiçada. Esquematize os folículos observados para melhor memorização:

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A CLIVAGEM É um processo biológico desencadeado pela fecundação que se manifesta através de sucessivas mitoses dividindo o ovo, uma única célula em células menores ou blastômeros, formando uma estrutura pluricelular. A clivagem varia com o tipo de ovo e o ovo se caracteriza pela quantidade de vitelo presente. Utilizaremos um modelo de estudo de clivagem: o ouriço do mar. O DESENVOLVIMENTO INICIAL DO OURIÇO DO MAR Material de estudo: estruturas de ouriço do mar (Echinodermata) Tipo de ovo - Oligolecito Tipo de clivagem: holoblástica igual Observação da preparação histológica: Lâmina n.______ Use a objetiva de menor aumento para encontrar o campo a ser observado, local onde há uma concentração maior das estruturas. Mude para a objetiva de aumento médio e passe a identificar: 1. Os ovos ou zigotos, os quais possuem uma constituição homogênea. 2. Os estadios de 2 células, 4 células, 8 células. Compare o zigoto com outro estadio mais adiantado e verifique como o tamanho total da célula ovo manteve-se quase idêntico ao do estágio segmentado. A segmentação não interferiu no tamanho total da estrutura. Os blastômeros resultantes da clivagem nos diferentes estadios guardam proporções iguais. 3. Com esta mesma objetiva, procure uma estrutura constituída de várias células compactadas em uma esfera. A partir de 16 blastômeros o embrião é considerado MÓRULA. Este aspecto deve-se às sucessivas divisões, as quais diminuíram progressivamente o tamanho dos blastômeros. A estrutura se assemelha a uma amora, daí a denominação deste estágio.

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4. Identifique agora, uma estrutura que possua uma borda mais escura. O centro desta estrutura apresenta-se mais claro, indicando que ela é constituída de uma camada celular externa que encerra uma cavidade. A camada celular chama-se Blastoderme e a cavidade, Blastocele. A estrutura é a BLÁSTULA. 5. Observe agora, estruturas que possuem uma formação tubular no centro da esfera. Aconteceu uma invaginação num dos polos da blástula, em direção ao polo oposto. Formou-se assim, uma nova cavidade no interior da blastocele, limitada pela parede epitelial que invaginou. Esta nova cavidade é o Arquênteron, o qual se comunica com o meio externo por uma abertura denominada Blastóporo. Esta estrutura é a GÁSTRULA. 6. Poderá ser observada, ainda, a larva PLUTEUS, a qual tem um formato triangular. Assim, a gastrulação é um processo caracterizado por movimentos morfogenéticos que originaram três folhetos germinativos; ectoderme, mesoderme e endoderme. Os movimentos morfogenéticos variam com o tipo de animal, mas o resultado final é o mesmo. No ouriço do mar, foram dois os movimentos; invaginação e migração celular. O processo de gastrulação envolve a Ectodermogênese, a Endodermogênese e Mesodermogênese. Esquematize as diferentes fases observadas:

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A GASTRULAÇÃO NAS AVES O estudo do desenvolvimento das aves, tendo como modelo o embrião de galinha, tem como finalidade facilitar a compreensão da embriogênese dos mamíferos dadas as semelhanças existentes durante o desenvolvimento inicial. As observações dos embriões das aves começam com estágio de gástrula devido ao fato das fases anteriores se desenvolverem no interior do oviduto da fêmea. O desenvolvimento do ovo estaciona, após a postura e somente prossegue se posteriormente incubado a uma temperatura entre 37 e 38o C. A gastrulação tem seu início de 5 - 6 horas de incubação, atingindo o ponto culminante dentro de 16 a 18 horas. ESTUDO AO MICROSCÓPIO ÓPTICO Lâmina nº_________ Embrião de galinha com 18 horas de incubação - Montagem Total Coloração - Hematoxilina Use o microscópio com a objetiva de menor aumento para ter uma visão de aspecto morfológico geral. 1. Observe no blastoderme: a) sua forma em "pera" b) uma região interna mais transparente. É a Área Pelúcida. c) Uma região externa de aspecto turvo e manchado. É a Área Opaca. d) No centro está a Linha Primitiva. Esta formação é resultado de um deslizamento superficial de células que convergem para a linha média. É por esta linha medial que células superficiais passam para o interior. 2. Identifique os seguintes pormenores na Linha Primitiva: a) Região alongada mais clara entre duas bordas escuras. A região clara denomina-se de Sulco Primitivo: as bordas são as Bordas Primitivas. b) Uma região mais compacta na extremidade do Sulco é o Nó de

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Hensen. Esta região indica a futura posição cefálica. No centro do Nó, há uma área mais clara arredondada. É a fosseta primitiva. 3. Observe acima do Nó de Hensen um espessamento celular, sob a camada superficial em direção cefálica. É o processo cefálico ou notocordal, o esboço do Notocorda. É a formação do eixo de sustentação do embrião ou corda dorsal embrionária. 4. Localize manchas mais coradas na Zona Opaca, são as Ilhotas sanguíneas ou Wolf Pander. Desenhe este estágio de desenvolvimento. Para melhor compreensão dos fatos observados anteriormente, um estudo cuidadoso de cortes seriados transversais se torna indispensável. Esquema para a observação dos cortes seriados transversais Os cortes seriados de todos os estágios embrionários são realizados desde a região cefálica até a região caudal do embrião e são colocados na lâmina histológica numa seqüência ordenada da seguinte maneira: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 .................19 20 ETIQUETA 21 22 23......................................30 Deste modo, a observação deverá ser feita, obedecendo esta sequência: 1a. fileira - da esquerda para a direita; 2a. fileira - da esquerda para a direita, e assim por diante. Quanto maior o embrião mais lâminas serão necessárias para ele.

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CORTES SERIADOS TRANSVERSAIS Lâmina nº _______ 1. Repasse corte por corte para ter uma idéia geral da morfologia interna do embrião, neste estádio. Os cortes foram realizados no sentido céfalo-caudal. Os primeiros cortes correspondem à região cefálica do disco trilaminar onde está situado o processo notocordal. 2. Na seqüência dos cortes você observará o aparecimento do Nó de Hensen - um aglomerado maior de células no centro do corte transversal. 3. Observe nos próximos cortes a Linha Primitiva que aparece como uma depressão no meio de saliências laterais: são o Sulco Primitivo e as Bordas Primitivas respectivamente. Por este sulco invaginaram células formando o endoderme primeiramente e depois, uma camada intermediária. As células invaginadas pela Linha Primitiva se dirigiram lateral e caudalmente, formando o mesoderma indiferenciado - Mesodermogênese. 4. Identifique os três folhetos embrionários que caracterizam o processo de gastrulação. Desenho: escolha os cortes em que se encontram os itens acima observados.

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PERÍODO DE ORGANOGÊNESE RUDIMENTAR

Com a definição dos três folhetos embrionários: Ectoderme, Mesoderme e Endoderme, resultantes do processo de gastrulação, o desenvolvimento do embrião entra numa fase de maior complexidade que vai se acentuando cada vez mais. O início da especialização destes folhetos é o que se denomina de “Organogênese Rudimentar”. Os primeiros fenômenos da organogênese são: a) Neurulação para o Ectoderma b) Metamerização para o Mesoderma c) Formação do intestino primitivo para o Endoderme Estes fatos levam à Morfogênese Primária do Embrião. MATERIAL DE ESTUDO Embrião de galinha - 24 horas de incubação Coloração - hematoxilina ESTUDO MICROSCÓPICO I- MONTAGEM TOTAL Lâmina n. __________ Use a objetiva de menor aumento para ter uma visão geral do embrião. As estruturas a serem observadas estarão em três planos distintos: 1. Em primeiro plano, na região adiante do Nó de Hensen, pode-se observar a diferenciação do ectoderme. É o processo de Neurulação. 2. Por transparência, em segundo plano, estão os somitos, diferenciações metaméricas do mesoderme. 3. Em terceiro plano, pode-se observar as paredes do intestino primitivo, na região cefálica - endoderme.

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A) ESTRUTURA EM PRIMEIRO PLANO 1.Observe como, na região à frente do Nó de Hensen, aparecem duas estrias escuras paralelas. São as bordas neurais que tendem a se aproximar numa posição média do seu eixo longitudinal para a formação do Tubo Neural. É o início do Eixo Nervoso: Cérebro - medula. É o processo de Neurulação. O ectoderme que não se neuraliza denomina-se de Ectoderme Epidermal e tem continuidade com o ectoderme neural. 2. Note como a Linha primitiva e o Nó de Hensen regridem na parte caudal. Esta regressão é devido ao avanço do Notocorda. B) ESTRUTURAS EM SEGUNDO PLANO (vistas por transparência do ectoderme neural) 1. Identifique a metamerização do mesoderme, nos lados da região que será a futura medula. São formações cúbicas que correspondem à segmentação do Mesoderme Paraxial = Somitos. 2. Conte o número de somitos que caracteriza seu embrião. 3. Perifericamente, na Zona Opaca, note como as Ilhotas sanguíneas aumentaram em número. C) ESTRUTURAS EM TERCEIRO PLANO Procure a região cefálica para identificar as seguintes estruturas: 1. De ambos os lados da extremidade cefálica do tubo neural pode ser notada uma estrutura com formato de “asa”. Essas estruturas constituem as paredes do Intestino Anterior. 2. Tente entender como, por baixo do tubo neural, essa estrutura se dobrou, formando uma “bolsa”. É o esboço do intestino denominado de Intestino Primitivo ou Anterior que se formou através da Dobra Cefálica. Esta região, futuramente formará a Faringe. II. CORTES SERIADOS TRANSVERSAIS Lâminas n. __________ 1. Repasse os cortes procurando superpô-los mentalmente ao embrião total estudado, para se acostumar à idéia da cinética do desenvolvimento.

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2. Procure observar como a parte anterior do cérebro se apresenta como se estivesse solta do restante. É devido a projeção desta região anterior sobre a membrana bucofaringeal pela Dobra Cefálica. 3. Observe como o tubo neural não se fechou na extremidade anterior - Sulco Neural. 4. Siga através de vários cortes a morfologia desta região anterior do tubo verificando: a) como o tubo neural se apresenta fechado no seu segmento médio. b) Como o tubo neural começa a se abrir novamente, na região da futura medula espinhal. c) Note, sob o tubo neural, a formação do Notocorda que corre céfalo-caudamente em forma de eixo maciço. d) Na região anterior, observe o intestino primitivo cujo revestimento é endoderme. e) Na região medular, observe os somitos e as outras divisões do mesoderme: intermediário, e os laterais somático e esplâncnico. Estes cortes têm como finalidade mostrar como se processa o fechamento da placa neural para formar o tubo neural. A seqüência dos cortes seriados mostra que o fechamento começa na região medial e corre deste ponto para as duas extremidades, cefálica e caudal. Como conseqüência, temos a origem dos Neuroporos Anterior (região cefálica) e posterior (região caudal). III. CORTE SAGITAL Lâmina n. __________ 1. Observe como numa extremidade, há uma dobra. É a projeção da parte anterior do tubo neural sobre a membrana bucofaringeal. 2. À frente e em plano inferior à dobra, observe as camadas de células que correm juntas, formando a membrana bucofaringeal. A camada ventral é o Endoderme e a dorsal, o Ectoderme. 3. Veja neste corte: a) A posição do intestino anterior, formada pela dobra cefálica. b) A entrada do intestino anterior. c) O interior do intestino primitivo em forma de “bolsa”. Esquematize as estruturas observadas para uma melhor memorização.

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SISTEMA NERVOSO I

Para o estudo do desenvolvimento do sistema nervoso central, um derivado do ectoderme, é necessário comparar os embriões em suas diferentes faixas etárias, tendo-se em vista que cada estadio é um momento de desenvolvimento e que todos juntos nos darão uma idéia da cinética embrionária. O material empregado será embriões de galinha com 33, 48 e 72 horas de desenvolvimento. A diferenciação do Ectoderme Geral em Ectoderme Neural é devido a ação indutora do Notocorda que se localiza sob o ectoderme. Esta indução inicia o processo da neurulação estudado no embrião de 24 hs. A neurulação dura cerca de l2 horas em embriões de galinha. Pode ser assim resumido:

a. Ectoderme neural b. Placa neural c. Tubo neural

Este capítulo estuda a subseqüente modificação do tubo neural, dando prosseguimento ao processo de organogênese do sistema nervoso. Esse processo se caracteriza pelo aparecimento do Prosencéfalo, Mesencéfalo e Rombencéfalo, ou seja, as Vesículas Encefálicas Primárias e da Medula Espinhal. MATERIAL DE ESTUDO Embrião de galinha com 33 horas de incubação Coloração: Hematoxilina ESTUDO MICROSCÓPICO I - MONTAGEM TOTAL Use a objetiva de pequeno aumento e observe: 1. A morfologia externa do cérebro que apresenta 3 divisões bem nítidas.

a) cérebro anterior ou Prosencéfalo b) cérebro médio ou Mesencéfalo

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c) cérebro posterior ou Rombencéfalo d) segue a Medula Espinhal

O conjunto Prosencéfalo, Mesencéfalo e Rombencéfalo formará o futuro Encéfalo: 2. Note o Prosencéfalo ou cérebro anterior com suas duas dilatações laterais, são as vesículas ópticas, região indutora das lentes oculares. Aqui aparecerão os futuros elementos do globo ocular. 3. Logo abaixo, existe uma segunda dilatação do tubo neural, é o Mesencéfalo. 4. A porção que segue é o Rombencéfalo. Observe:

a. É contínuo com Medula Espinhal b. Internamente, há pequenas ondulações, são os Neurômeros c. Ventralmente à ele pode-se observar o esboço cardíaco d. Nas proximidades do Rombencéfalo, externamente, procure observar com atenção duas suaves reentrâncias ou depressões no ectoderma epidermal. São as placas auditivas ou óticas, de onde se diferenciará o epitélio sensorial do ouvido interno.

Desenhe o embrião total de 33 horas com todas as estruturas observadas. N.B. Neste momento, somente as estruturas referentes ao Sistema Nervoso devem ser observadas. Após o exame microscópico do embrião pode-se observar: 1. Que a região anterior cefálica sofreu profundas modificações, apresentando-se subdividida nas Vesículas cerebrais ou encefálicas. 2. Que o tubo neural se encontra quase completamente fechado. O neuroporo anterior está fechado mas a porção extrema posterior permanece ainda aberta - seio romboidal. 3. O mesmo processo de desenvolvimento estudado aqui se pode aplicar aos embriões dos animais domésticos e aos do Ser Humano, somente variando o tempo em que este processo ocorre. II - CORTES SERIADOS TRANSVERSAIS

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l. Começando pelo primeiro corte, examine-os em sequência, prestando a atenção para a morfologia interna das três divisões cerebrais. 2. Veja como, gradativamente, o Prosencéfalo se dilata lateralmente. Examine o seu interior. As dilatações laterais existentes são as Vesículas Ópticas que se encontram com o revestimento externo, o Ectoderma Epidermal. Examine com cuidado o ponto de contacto das vesículas ópticas com o ectoderma epidermal. 3. Repare como o Prosencéfalo está mergulhado numa massa celular irregular. É a massa Mesenquimal ou simplesmente Mesênquima Cefálico. 4. Observe como o Prosencéfalo não se apoia sobre a membrana bucofaringeal indicando que o crescimento da região anterior do tubo neural se projeta sobre o ectoderma subjacente. 5. Na seqüência dos cortes, observe o diâmetro do tubo neural diminuindo. Na região ventral ao tubo neural surge uma estrutura central que corresponde ao intestino primitivo. Aos lados, observam-se duas aberturas que correspondem aos arcos aórticos. Esta parte do tubo neural corresponde, portanto, ao Mesencéfalo. 6. Observe que, na região ventral, o intestino primitivo se expande lateralmente, na seqüência dos cortes e os arcos aórticos agora se dividem em 2 pares de vasos: as artérias aortas dorsais e as aortas ventrais ao intestino primitivo. O tubo neural, neste trecho continua sendo o Mesencéfalo. 7. Continue percorrendo os cortes em série, observando agora, as 2 aortas ventrais. Num dado trecho, estes dois vasos se fundem em um vaso apenas, designado de tubo endocárdico único. Neste corte, o tubo neural corresponde agora ao Rombencéfalo. Na seqüência dos cortes observe como este tubo endocárdico único se amplia - é o esboço cardíaco. 8. Continuando a seqüência dos cortes, ao nível do Rombencéfalo, identifique um corte em que o Ectoderme epidermal que reveste o rombencéfalo se apresenta espessado - é a Placa Auditiva ou Ótica. 9. No momento em que o tubo endocárdico se bifurcar nas veias vitelínicas, o tubo neural agora corresponde à Medula Espinhal. Neste nível podemos identificar os somitos aos lados da medula.

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SISTEMA NERVOSO II Após as primeiras modificações morfológicas estudadas no embrião de 33 hs, o sistema nervoso se apresenta mais complexo num embrião de 48 hs de incubação em aves. MATERIAL DE ESTUDO Embrião de galinha com 48 horas de incubação Coloração: Hematoxilina Estádio de 26 - 27 somitos ESTUDO MICROSCÓPICO I - MONTAGEM TOTAL Usando o aumento menor procure observar a morfologia geral do embrião, dando ênfase às modificações que ocorrem no cérebro ou encéfalo. 1. Observe como o embrião de 48 horas modificou sua morfologia inicial. Identifique os movimentos que alteraram a posição inicial: a) Movimentos de rotação ou torção da parte anterior da região cefálica sobre a porção caudal que se mantém firme. No embrião total esta torção se manifesta pelo desvio da posição dos somitos e notocorda, ao longo do eixo maior do embrião. b) Dois movimentos de flexuras: • Cefálica, na região do mesencéfalo, inclina o prosencéfalo em direção

caudal (próximo ao coração). Esta flexura dá início a formação dos arcos branquiais. • - Cervical, na região final do rombencéfalo, aprofundará e ampliará a

curvatura do encéfalo. Neste estadio, esta flexura é apenas esboçada. As flexuras se originam devido ao aumento do volume da região anterior cefálica.

2. Note como as três vesículas cerebrais primitivas do embrião de 33 horas se subdividiram, tornando mais complexa a morfologia do encéfalo. 3. Procure identificar constrições externas na parte inicial do tubo neural, que atuam como verdadeiros pontos de limite subdividindo esta região cerebral em:

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a - Telencéfalo - região bem anterior, dará o córtex cerebral e o estriado. A cavidade dele formará os Ventrículos Laterais. b - Diencéfalo - região onde se encontram os esboços dos olhos. Originará o Tálamo, Hipotálamo, Epitálamo e Pálido. A cavidade será o 3º Ventrículo. c - Mesencéfalo - neste estadio, é o ponto mais alto do embrião. Não há modificações notáveis, mas originará os Pendúculos Cerebrais e os Tubérculos Quadrigêmeos. d - Metencéfalo - na região dorsal, é a porção seguinte ao mesencéfalo seguindo em direção caudal. Possui a parede dorsal fina. Originará Cerebelo e a Ponte. e - Mielencéfalo - caracterizado pela presença da Vesícula Auditiva e por ter parede dorsal fina também. Originará o Bulbo. A luz do Metencéfalo e Mielencéfalo formarão o 4º Ventrículo. CONCLUSÕES: 1. Houve uma notável modificação no embrião de 48 hs em relação ao embrião de 33 horas. 2. A região cerebral se tornou mais complexa dando um outro arranjo morfológico ao embrião. 3. Devido às flexuras a região anterior à faringe origina os arcos branquiais. Desenhe o embrião total de 48 horas, procurando atentar aos itens observados. II - CORTES SERIADOS TRANSVERSAIS 1. Repasse com cuidado a série de cortes, procurando situá-los em posição correta, no embrião total. Note as modificações internas. Devido à posição anatômica desse embrião os primeiros cortes serão, obviamente feitos no mesencéfalo.

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2. Veja na seqüência dos cortes, como a cavidade interna cerebral, a princípio se apresenta pequena, quase circular depois se torna longa com ondulações internas. Identifique nesta única cavidade longa se ela possui duas ou apenas uma constricção interna. Se apresentar apenas uma, significa que o corte está passando por duas porções do encéfalo. Uma delas é o Mesencéfalo. A outra você deverá analisar se se trata do Metencefalo ( parede dorsal fina) ou do Diencéfalo. Se apresentar duas constricções, então a situação do corte é outra. Neste caso observe: a) numa das extremidades, a cavidade é mais ampla, com paredes espessas. É a região correspondente ao Diencéfalo. b) em seguida, uma constricção e depois uma outra cavidade. É a região do Mesencéfalo (central). c) Na outra extremidade, separada por outra constricção uma região mais estreita. É o metencéfalo. Note nesta extremidade, a parede fina. 3. Note a parede bem corada das porções cerebrais que acaba de observar. Note ainda, o mesênquima que envolve as três porções identificadas. As falhas encontradas no mesênquima são vasos e neste corte são ramificações da Veia Cardinal Anterior. Externamente o Ectoderme está bem colado ao Mesênquima. 4. Procure observar, na seqüência posterior dos cortes que essa cavidade cerebral se divide em duas porções:

a) uma larga, é o Diencéfalo, em posição ventral. b) Outra menor, como paredes grossas e finas. É o Metencéfalo, em posição dorsal. A sintopia destas cavidades varia com o grau das flexuras e do corte realizado.

5. Identifique nos cortes posteriores, o surgimento do Aparelho Ocular no diencéfalo. 6. Analise os cortes posteriores e identifique as outras vesículas cerebrais: Telencefalo na seqüência do Diencéfalo e Mielencéfalo, na seqüência do Metencéfalo. 7. Enquanto estiver seccionando o Mielencefao deverá aparecer nos cortes, a Vesícula Auditiva. 8. Identifique a medula espinhal, após o Mielencéfalo. É uma formação com uma cavidade bem menor e estreita, com os somitos aos lados. Desenhe: Escolha cortes que exemplifiquem os itens observados

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SISTEMA NERVOSO III No embrião de ave com 72 horas pode-se notar que o corpo do embrião apresenta agora nítidas divisões: cabeça com as Vesículas Encefálicas Secundárias, o tronco com esboços dos apêndices superiores e a cauda com os esboços dos apêndices inferiores. MATERIAL DE ESTUDO Embrião de galinha com 72 horas de incubação Coloração: Hematoxilina ESTUDO MICROSCÓPIO Montagem Total Use o microscópio no menor aumento para estudar a morfologia geral. 1. Localize com cuidado a parte anterior do cérebro. Note como neste estadio as divisões externas se apresentam bem diferenciadas e nítidas. 2. Observe como a flexura cervical está bem mais pronunciada curvando o embrião. 3. Examine a região mais anterior do cérebro, o Telencéfalo e observe:

a) como há um limite nítido entre esta região e a imediatamente superior, o diencéfalo. b) como o telencefalo parece encostar-se no coração, devido a flexura cervical. c) como na porção bem anterior do telencefalo, pode ser vista uma depressão do ectoderme epidermal. É a Placa Olfativa.

4. Observe agora o Diencéfalo com as suas características:

a) formação dos olhos: a lente envolta pelo cálice óptico.

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b) procure encontrar na região externa (parede dorsal), uma pequena saliência. É a Epífise.

5. Veja como o Mesencefalo mudou de posição projetando-se em direção horizontal, para a nossa direita. Na sua anterior posição apical encontra-se agora, o Mielencefalo e o Metencefalo. Este deslocamento deve-se à flexura Cervical que cada vez mais encurva o embrião sobre si mesmo. 6) Note uma acentuada constricção entre o Mesencefalo e Metencefalo, é o limite entre as duas porções, formando o Ístmo Rombencefálico. Observe a parede dorsal do Metencefalo até o Mielencefalo apresentando-se extremamente delgada. Neste local, futuramente aparecerá a Flexura Pontina.

7. O Mielencefalo caracteriza-se pela formação auditiva (Vesícula Auditiva)

CONCLUSÕES

1)As cinco regiões cerebrais já se encontram definidas. 2 ) As flexuras apenas esboçadas no embrião de 48 horas se aprofundam mais, dando ao embrião de 72 horas uma curvatura característica. 3) Esta curvatura influenciou as estruturas que se desenvolvem na região ventral. NB: O estudo do embrião em corte sagital auxiliará a compreensão dos ítens acima. Corte Sagital: Examine o interior das formações cerebrais Internamente encontre a evaginação da parede ventral do Diencéfalo. É o esboço da porção nervosa da Hipófise - O Infundíbulo. Procure encontrar nessa região onde a parede do diencéfalo se cola ao ectoderme externo do estomodeu. Observe aí uma invaginação do ectoderme epidermal. É o esboço da porção glandular da hipófise - a Bolsa de Rathke. A parede dorsal do cérebro posterior é bem fina. Talvez devido a isto, por falta de sustentação, esta região sofre uma profunda inflexão, contribuindo na formação da flexura pontina. As paredes da medula espinhal parecem grossas.

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CORTES SERIADOS TRANSVERSAIS 1) Repasse os cortes procurando entendê-los colocando-os em posição correta. 2) Observe, como seguindo a seqüência dos cortes iniciais, a cavidade cerebral, inicialmente pequena, torna-se longa. Pare neste corte e identifique:

a) A parede neural é fortemente corada e mergulhada no mesênquima. b) Como numa das extremidades, a cavidade é mais ampla comparativamente ao resto. È a cavidade do Mesencefalo. c) Na primeira metade a cavidade que segue ao mesencefalo é denominada de Metencéfalo, onde se pode observar, lateralmente os neurômeros (as ondulações do tecido neural). d) Na outra extremidade, a cavidade se apresenta mais estreita, e cujas paredes neurais vão se adelgaçando. È o Mielencefalo. Este corte apresenta internamente uma longa cavidade que une as três diferentes porções cerebrais.

3) Observe neste corte ainda, no mesênquima, estão mergulhadas várias estruturas: a) Vesícula Ótica ou Otocisto em formato circular apresentando uma coloração semelhante ao tecido neural e no nível do Mielencefalo. As manchas escuras são os gânglios semilunar, acústico-facial e o superior. 4) Procure traçar uma linha no desenho do embrião total que posicione corretamente este corte observado. 5) Tente encontrar em seus cortes, a porção cerebral de onde emergem ventralmente duas ramificações nervosas que parecem penetrar no mesênquima. Esta região é do Mesencefalo e as ramificações são os Nervos Oculomotores. 6) Focalize a extremidade oposta à esta estrutura e identifique a Medula Espinhal. As estruturas que sempre acompanham a medula são os somitos, a aorta dorsal e a Notocorda.

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7) Seguindo os cortes, tente encontrar uma região onde a parede cerebral do Diencéfalo se cola ao ectoderme externo, do Estomodeu. É o esboço da Hipófise sendo que do tecido neural, se originará a Parte Nervosa e do Ectoderme se formará a Parte Glandular. 9) Identifique a parte cerebral do Diencéfalo onde se encontra a Epífise, uma saliência na região anterior do corte. Neste mesmo corte, em oposição à epífise, no ectoderme externo, se encontram duas espessas depressões: são os esboços das Placas Nasais no nível do Telencefalo.

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APARELHO DA VISÃO O desenvolvimento do olho, pela diversidade de elementos formadores e pela reciprocidade nas interações existentes entre esses elementos, constitui um exemplo ilustrativo do complexo processo de organogênese. O crescimento ectodérmico a partir do encéfalo transforma-se em Retina, Íris, Nervo Óptico. A partir do ectoderme epidermal forma-se o Cristalino. Os elementos formadores do olho são: a) Ectoderme Neural do Prosencéfalo Vesículas Ópticas Cálice Óptico Retina b) Ectoderme Epidermal da Cabeça Placa do cristalino Vesícula do cristalino Cristalino c) Mesênquima cefálico Coróide Esclerótica

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Esta seqüência de interações dos elementos formadores do olho desencadeada por uma ação indutora primária da Placa Precordal, transforma um campo potencialmente existente no Ectoderme Neural numa expressão histológica funcionalmente diferenciada. MATERIAL DE ESTUDO Embriões de galinha com 33 - 48 e 72 horas de incubação. Coloração: Hematoxilina - Eosina ESTUDO MICROSCÓPICO II - CORTES SERIADOS TRANSVERSAIS EMBRIÃO DE 33 HORAS 1. Procure o corte transversal do Prosencefalo que contem as duas dilatações laterais: são as Vesículas Ópticas. A formação da vesícula óptica teve como indutor a Placa precordal que somente age depois que houve a delimitação longitudinal. 2. Observe a histologia:

a) O Prosencéfalo (Ectoderme Neural) está mergulhado no Mesênquima Cefálico.

b) Externamente pode-se notar uma camada celular, é o Ectoderme Epidermal. Esses são os elementos formadores do olho.

3. No ponto mais próximo de contacto das vesículas ópticas com o ectoderme epidermal, haverá a indução que resultará num espessamento ectodérmico, a Placa do Cristalino. Desenhe os itens observados

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EMBRIÃO DE 48 HORAS 1. Procure, na região cefálica, o Diencefalo com os Cálices Ópticos e identifique as duas camadas que constituem os Cálices Ópticos em formação. a) a camada próxima da placa do cristalino, ou seja, voltada para a

concavidade do Cálice denomina-se camada Nervosa ou Sensorial. b) a camada mais próxima do diencéfalo, ou seja, a mais externa, é a

camada Pigmentar. 2. Observe como toda a região cefálica está rodeada de Mesênquima. 3. Observe a Vesícula do Cristalino, que é o resultado da invaginação da Placa do Cristalino quando a mesma induziu a formação do Cálice Óptico. EMBRIÃO DE 72 HORAS 1. Procure na região cefálica, o corte transversal do Diencéfalo contendo os Aparelhos Ópticos. a) Observe o Cálice Óptico notando sua parede dupla: a camada externa e mais fina transforma-se no epitélio pigmentar da retina - portanto chama-se Camada Pigmentar. A camada interna, mais espessa diferencia-se na retina neural - portanto chama-se camada nervosa ou sensitiva. b) Observe que neste estadio, as vesículas do cristalino já perderam sua conexão com o ectoderma epidermal e penetram na cavidade do cálice óptico. A parede posterior das vesículas do cristalino sofrerá mais tarde uma transformação: suas células alongam-se para constituírem células epiteliais altamente especializadas chamadas fibras cristalínicas. Seus núcleos sofrem dissolução e estas fibras, ao crescerem obliterarão gradualmente a cavidade da vesícula do cristalino. Aí então a vesícula se transformará em Cristalino ou Lente.

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c) Note ainda, entre a parede dupla do Cálice Óptico há um espaço: é

o espaço intra-retiniano. 2. Procure encontrar entre os cortes seriados, um onde se pode observar a ligação do Cálice Óptico com o Diencefalo - é o Pedúnculo Óptico, por onde passará mais tarde, o Nervo Óptico com os Vasos Hialóides. Desenhe os itens observados FETO HUMANO COM CERCA DE 8 SEMANAS - Corte Sagital Lâminas nº Procure, no menor aumento, localizar a região cefálica. Lá, procure o olho. 1. Observe a Retina com suas duas camadas. A camada nervosa da retina pode ser bem observada nos seus três extratos: marginal, do manto e ependimário. O extrato marginal ficou localizado agora no interior do cálice óptico. A camada pigmentar da retina se apresenta escura, devido aos pigmentos sintetizados por suas células e está firmemente fixada à coróide. Entre essas duas camadas há o espaço interretiniano. 2- Esta camada, a coróide, derivada do mesênquima adjacente, é uma camada vascularizada. Desta forma você a localizará através das hemácias bem próximo à camada pigmentar da retina. Externamente à coróide temos a esclera ou esclerótica, uma camada fibrosa, a qual é contínua com a lâmina própria da córnea. 3. Observe a córnea formada de 2 fontes: mesênquima e o ectoderme epidermal, que se transforma no epitélio da córnea. 4. Observe o cristalino com suas fibras e com o epitélio do cristalino, formado pela parede anterior da vesícula do cristalino. (Nem todas as lâminas possuem o cristalino) 5. Observe as dobras palpebrais que se desenvolveram a partir de pregas ectodérmicas com uma porção central de mesênquima. 6. Observe ainda entre o cristalino e a córnea, a Câmara Anterior e entre o cristalino e o Cálice Óptico, a Câmara Posterior por onde entrará parte do mesênquima que contribuirá para formação do Humor Vítreo.

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SISTEMA MUSCULAR ESQUELÉTICO

O mesoderme e o mesênquima local são as duas fontes embrionárias primordiais, responsáveis cada uma a seu modo, pela formação da Musculatura Esquelética. MATERIAL DE ESTUDO Embriões de Galinha com 33, 48, 72 horas e 6 dias de incubação. Coloração: Hematoxilina ESTUDO MICROSCÓPICO I. CORTES SERIADOS TRANSVERSAIS 1.Embrião de 33 horas: Corte em nível de Medula Espinhal. Observe nesse estadio, como o mesoderme na região dorsal média apresenta-se segmentado. É o Mesoderme Paraxial metamerizado em Somitos. Veja como os somitos são formados:

a. Um conjunto de células centrais. b. Um envoltório de células epiteliais.

2. Repare no leve estrangulamento existente logo após os somitos. É o Mesoderme Intermediário. 3. Note como o Mesoderme Lateral se bifurca formando duas folhas, separadas pelo Celoma:

a. Uma folha mesodérmica que se aproxima do ectoderme formando o somatopleura, responsável pela origem da parede parietal do pericárdio e cavidade peritoneal.

b. A outra se junta ao endoderme originando o Esplancnopleura -

responsável pela musculatura lisa do tubo digestivo, vasos sanguíneos linfáticos, das vias aéreas e ductos do aparelho urogenital. Origina também o Epimiocárdio, pleura visceral e mesentérios.

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Desenhe os itens observados. Embrião de 48 horas. Corte em nível de Medula Espinhal 1. Observe, que nesse estadio, o somito se encontra em diferenciação. Podemos identificar, nítidamente, o Esclerótomo que aparece como células esparsas migrando em direção ao notocorda e em direção ao tubo neural. 2. Mais externamente observe uma faixa de células bem nítidas é o Dermomiótomo, que ainda não se diferenciou. Embrião de 72 horas: Corte em nível de Medula Espinal 1. Observe como entre o Somatopleura e Esplancnopleura, aparece um espaço vazio. É o Celoma. 2. Note com atenção como no estadio de 72 horas, o embrião apresenta uma notável modificação na morfologia dos somitos. Os somitos se apresentam alongados. Esta modificação é devido ao processo de Delimitação Transversal, para o fechamento do corpo embrionário. 3. Examine esta nova morfologia e veja como os somitos apresentam as 3 regiões bem nítidas:

a -Esclerótomo, na região interna, envolvendo o notocorda e semelhante a células mesenquimais, dará origem às Vértebras e Costelas.

b - Miótomo, na parte média, dará origem ao Sistema Muscular. c- Dermátomo, mais externamente, dará origem à Derme e Hipoderme

4) Observe o esboço inicial dos membros, que consiste em um espessamento do mesoderme lateral somático. Observe também o ectoderme espesso que recobre a extremidade distal dos membros formando a crista ectodérmica apical.

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Desenhe os itens observados. Embrião com 6 dias - Corte transversal Neste corte pode-se observar, em torno do Notocorda, o esboço de uma vértebra, em tecido cartilaginoso, ou seja, o Corpo vertebral. Em algumas lâminas pode-se observar em torno do Tubo Neural (Medula) o Arco Vertebral. Feto Humano - Corte Sagital - Lâm.......... Em uma destas duas Lâminas procure localizar a região dorsal do feto e observe a coluna vertebral. As vértebras estão posicionadas umas sobre as outras intercaladas pelo disco intervertebral, o qual foi originado pelo mesênquima denso que migrou para essa região, preenchendo esses espaços. Dependendo da lâmina pode-se observar o núcleo pulposo (não são em todas as lâminas que se pode observar esse ítem).

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DESENVOLVIMENTO DO CORAÇÃO Estes movimentos morfogenéticos podem ser estudados em embriões de galinha com 33 a 72 horas de incubação. Coloração: Hematoxilina ESTUDO MICROSCÓPICO

I - MONTAGEM TOTAL EMBRIÃO DE 33 HORAS Lâmina no._______ l. Note como o tubo endocárdico pende para o lado direito em forma de U. Esta primeira mudança externa morfológica, é devido ao desaparecimento do Mesocárdio Ventral e ao Crescimento do Tubo Cardíaco Único. 2. Procure identificar a morfologia desse tubo neste estadio Num processo simultâneo, os vasos sanguíneos externos na zona opaca, se desenvolvem em direção centrípeta, ao passo que, os vasos anexos ao coração são direcionalmente centrífugos. Provavelmente da confluência dessas duas correntes sanguíneas opostas e a formação da região denominada “marcador de passo” (pacemaker) nascem os primeiros batimentos cardíacos lentos. No homem, o batimento cardíaco se inicia na 4ª semana. Nos embriões de galinha este fato se percebe no estadio de 33 horas de incubação. Desenhe o embrião de 33 horas, ressaltando a região cardíaca.

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EMBRIÃO DE 48 HORAS Lâmina no._______

l. Veja como a forma em U do tubo cardíaco se modificou em α Esta transformação deve-se aos seguintes fatores:

a) grande crescimento dentro da cavidade pericárdica b) o desaparecimento completo do Mesocárdio Ventral c) Flexuras e Rotação de 90 graus da extremidade cefálica para a

direita. 2. Compare a morfologia externa cardíaca do embrião de 48 horas, com o embrião de 33 horas. Observe como as divisões regionais do coração se apresentam mais nítidas agora. Neste estadio o coração apresenta as quatro regiões bem distintas.

a) A região cardíaca mais próxima do telencéfalo é o Bulbo de onde saem as Aortas ventrais ramificadas em Arcos aórticos da faringe.

b) A posição mais saliente do αααα é a região do Ventrículo. Esta forma em αααα é devido a uma torção o que leva a porção caudal do tubo cardíaco para uma posição mais cefálica.

c) Em posição posterior ao Ventrículo encontra-se o Átrio. d) Na região mais caudal do tubo ou na base do αααα está o Seio Venoso

de onde saem o Ducto de Curvier - confluência das veias cardinais anterior e posterior, cuja estrutura não podemos observar.

Desenhe o Embrião de 48 horas com indicação dos itens observados. EMBRIÃO DE 72 HORAS Lâmina no._______ 1. Observe como a torção do tubo cardíaco aprofundou-se aproximando as duas extremidades do tubo. 2. Note como o Bulbo devido a torção se coloca sobre o Seio Venoso, situado mais próximo a região ventral interna. 3. Veja como o Ventrículo, neste estádio, aparece na região mais caudal. O átrio não se pode observar em primeiro plano. Desenhe o embrião de 72 horas identificando os itens observados.

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III. CORTES SERIADOS TRANSVERSAIS

EMBRIÃO DE 24 HORAS Nestes cortes seriados pode-se observar a origem dos primórdios dos tubos pareados do coração. 1. Procure nos cortes, a região onde o embrião apresenta-se com o intestino anterior ventralmente aberto e revestido pelo esplancnopleura . É a Entrada do Intestino Anterior, onde se encontram os Primórdios Endoteliais Cardíacos ou tubos cardíacos pares. Observe nas porções laterais da entrada intestinal primitiva como o esplancnopleura (região externa da abertura) se apresenta mais espesso. É a diferenciação do mesoderme esplâncnico em células endoteliais com capacidade angiogênica. Desenhe: EMBRIÃO DE 33 HORAS Veja, na sequência dos cortes do Mesencéfalo, começando por aquele onde se pode observar o arco aortico, dois vasos ventrais ao mesencefalo. Na seqüência, observe esses vasos se dividirem em aortas ventrais e dorsais com o intestino anterior entre elas. Observe como as aortas ventrais se aproximam e se fundem. Quando esses vasos se juntam forma-se um único tubo: É o Tubo Endocárdico Único que está na Cavidade Pericárdica. Na seqüência, observe como o tubo cardíaco único se amplia no diâmetro. Identifique, então, neste mesmo corte:

a. a finíssima camada celular interna desse tubo. É o Endocárdio. b. como o mesoderme esplâncnico espesso recobre exteriormente o endocárdio. O revestimento denomina-se de Epimiocárdio, a cavidade interna é a Cavidade Cardíaca. c. O Tubo endocárdico está preso ao chão da faringe por um ligamento. É o Mesocardio Dorsal.

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EMBRIÃO DE 48 E 72 HORAS 1. Nesses cortes do embrião, o coração se apresenta como uma grande cavidade, onde sempre se pode observar um envoltório externo denominado de Epimiocárdio, uma membrana fina interna chamada de Endocárdio. No interior há células soltas: são os hemocitoblastos. 2. Procure interpretar os cortes transversais do coração embrionário e identificar as diferentes câmaras cardíacas: Bulbo Aórtico, Ventrículo, Átrio, Seio Venoso. • No embrião de 48 horas, o seu referencial será o Mesocárdio Dorsal. • No embrião de 72 horas, os referenciais serão o Diencéfalo com o

Cálice Óptico e o Telencéfalo com a Placa Olfativa. 3. Identifique ainda os vasos sanguíneos: Aorta descendente, Arcos Aórticos e Veias Vitelínicas.

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SISTEMA UROGENITAL Entre os vertebrados, os sistemas excretor e reprodutor, embora realizem funções bem diferentes, são estudados em conjunto, porque estão intimamente associados. Esta interrelação se prende aos seguintes pontos: a) A origem embrionária comum, isto é, ao Mesoderme Intermediário, que participa da formação dos Esboços Renais e das Gônadas, diferenciando-se na Saliência Urogenital e posteriormente na Crista Genital. b) Participação dos Mesonefros (rim secundário) e do Ducto de Wolff, no nível da região caudal, que persistem como determinados ductos do testículo e Canal Deferente dos órgãos sexuais masculinos, respectivamente. c) A influência indutora do Ducto de Wolff sobre o desenvolvimento do Ducto de Muller em condutos genitais femininos. MATERIAL DE ESTUDO Embriões de galinha: 33, 48, 72, 96 horas e 6 dias Coloração: Hematoxilina ESTUDO MICROSCÓPICO I. CORTES SERIADOS TRANSVERSAIS EMBRIÃO DE 33 HORAS Corte transversal em nível de Medula Espinhal l. Procure um corte em que o mesoderme já se encontra diferenciado em suas três regiões: a) Mesoderme paraxial: somitos b) Mesoderme intermediário c) Mesoderme lateral 2. Com aumento maior, focalize o Mesoderme Intermediário, procurando identificar em sua parte dorsal uma pequena saliência denominada Cordão Nefrogênico. A partir desse cordão se desenvolverão as Vesículas Nefrotomiais. Essas vesículas se desenvolverão em direção céfalo-caudal, unindo-se uma à outra seguinte, para formar o Ducto pronéfrico. Faça um desenho ilustrando os itens observados.

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EMBRIÃO DE 48 HORAS Corte transversal em nível de Medula Espinhal l. Focalize a região caudal, junto às aortas dorsais, que se situam abaixo do notocorda e observe: O Ducto Mesonéfrico, um orifício situado mais na periferia, circundado por um epitélio cúbico simples. Desenho da região observada ressaltando os itens. EMBRIÃO DE 72 HORAS Corte transversal em nível de Medula Espinhal l. Na região junto a aorta dorsal, nas proximidades do celoma, observe que no Mesonefros há dois pequenos orifícios: o orifício mais interno é o Túbulo Mesonéfrico e o mais externo, voltado para o celoma, é o Ducto Mesonéfrico. 2. Procure observar atentamente, logo abaixo da aorta dorsal um espessamento bem corado na parede epitelial que limita o celoma. É a Crista ou Eminência Genital, formada pelo Epitélio Celomático ou Peritoneal. Nesta região, os gonócitos se diferenciarão. Desenhe o corte observado identificando esses itens. EMBRIÃO DE 6 DIAS Lâmina no._______ Corte transversal em nível de Medula Espinhal: No embrião de 6 dias pode-se observar claramente o conjunto urogenital. l. Localize, abaixo do notocorda, as seguintes estruturas: a) O sistema excretor de ambos os lados representado pela estrutura maior, formado por um emaranhado de tubos seccionados. São os Mesonefros.

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b) Entre as duas porções do sistema excretor, internamente, observe duas formações condensadas, mais fortemente coradas: são os Esboços das Gônadas ou as Gônadas Indiferenciadas. II - CORTES SAGITAIS EMBRIÃO DE 96 HORAS Lâmina no._______ l. Note na região dorsal do embrião um emaranhado de túbulos, são os mesonefros, localizados na região lombar e abdominal do embrião. Desenhe o corte sagital identificando os itens observados. EMBRIÃO DE 6 DIAS Lâmina no._______ Na região dorsal do embrião há um emaranhado de túbulos: é o MESONEFRO. FETO HUMANO Lâmina nº _______ Em uma dessas duas lâminas, em posição sacral, você poderá observar os METANEFROS ou os rins definitivos.

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SISTEMA DIGESTÓRIO Para se estudar o desenvolvimento do Sistema Digestório os embriões de galinha em montagem total contribuem muito pouco. Os mais importantes esclarecimentos são dados pelo estudo dos cortes seriados desses embriões. O Sistema Digestório é uma contribuição embrionária da Endoderme e do Mesoderme Esplâncnico. MATERIAL DE ESTUDO:

• Embriões de galinha de 24, 33, 48 e 72 horas de incubação. Coloração: Hematoxilina ESTUDO MICROSCÓPICO I - MONTAGEM TOTAL 1) EMBRIÕES DE 24 HORAS E DE 33 HORAS DE INCUBAÇÃO Lâminas no._______ Usando o aumento menor do microscópio procure identificar: a) Uma estrutura em forma de “asa” próxima aos somitos. É a Entrada do

Intestino Anterior. Nestes estadíos já se pode notar o processo da Delimitação que transforma o endoderme em Tubo Digestório.

b) Por transparência, na região cefálica, junto as dilatações laterais do prosencéfalo, a sombra do endoderme formando a parede do intestino anterior.

c) No embrião de 33 horas esta estrutura aparece mais nítida e mais longa ainda.

2) EMBRIÃO DE 48 E 72 HORAS Lâminas no._______ Durante estes estadios , o canal primitivo do intestino sofre notáveis transformações morfológicas. Na região anterior, o canal intestinal (faringe), enruga-se por causa das flexuras, originando os arcos faringeais.

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• Observe nos embriões de 48 e 72 horas, como próximo ao tubo cardíaco

exatamente sob a curvatura cefálica, aparecem pequenos mamilos ou ondulações. São os Arcos Faringeais ou Branquiais.

• Veja como o número de arcos branquiais varia entre os embriões

observados. Este fato depende do aprofundamento das flexuras e idade do embrião.

II. CORTES SERIADOS TRANSVERSAIS 1- EMBRIÃO DE 24 HORAS E DE 33 HORAS Siga a seqüência dos cortes, da parte mais cefálica para a caudal. 1. Procure identificar, sob o tubo neural e notocorda mergulhado no

mesênquima cefálico, uma estrutura tubular aplanada de paredes finas com prolongamentos laterais. É o Intestino Anterior ou Faringe.

2. Observe como ao longo dos cortes seriados, a Faringe parece um canal achatado. Veja se pode identificar entre o tubo neural e a faringe, dois vasos. São as Artérias Aortas Dorsais.

3. Note como o corte todo da região cefálica que você acaba de observar, parece estar solto sobre uma membrana. A membrana dupla que aparece é a membrana bucofaríngea, formada pelo Ectoderme e o Endoderme.

4. Acompanhando a seqüência de cortes que apresentam a faringe, você chegará em um corte no qual o chão da faringe se abre (o esplancnopleura se abre juntamente com as veias vitelinas). Então se chega em um nível do embrião correspondente ao Intestino Médio o qual se comunica com o saco Vitelino.

2 - EMBRIÃO DE 48 HORAS 1. Procure um corte onde se pode observar Metencéfalo com Diencéfalo

num nível que passe cranealmente ao aparelho óptico. Entre essas Vesículas cerebrais você deverá observar a luz do trato digestório. Neste nível, observa-se a Faringe ladeada pelos Arcos Faringeais. Observe que cada arco contém um arco aórtico no seu interior.

2. Procure um corte onde se pode observar as formações oculares no

Diencéfalo. Observe bem no centro do corte a luz da Faringe, ladeada

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pelas aortas dorsais junto ao notocorda e as aortas ventrais próximas ao diencéfalo. Estes Vasos estão dentro dos arcos faringeais ou branquiais.

3. Identifique os Arcos Branquiais como formações arredondadas com

vasos sangüíneos no centro: são os Arcos Aórticos. O número dos arcos branquiais varia conforme a idade do embrião o que significa maior aprofundamento das flexuras.

4. A medida que você aprofundar nos cortes transversais, você observará

que o formato desse tubo se modifica, mudando para arredondado e os arcos faringeais não são mais visíveis. Este é um outro nível: o do Esôfago agora.

5. Na seqüência esse esôfago também perde o chão, abrindo-se

ventralmente para o saco vitelino. É o nível do Intestino Médio. 3 - EMBRIÃO DE 72 HORAS 1. Procure nos primeiros cortes transversais, um corte no nível do

mesencéfalo e da Medula Espinal e entre essas vesículas encefálicas, observe os Arcos Branquiais em maior número cercando uma grande cavidade. É a região de Faringe.

2. Procure identificar os três folhetos embrionários no arco branquial: a. Externamente está o Ectoderme. b. A massa interna contendo os arcos aórticos é o Mesênquima. c. O revestimento interno da faringe é o Endoderme.

3. Note nesses arcos branquiais constrições por estrangulamento. As

constrições internas no endoderme são as Bolsas Faríngeais. No embrião humano existem 4 Bolsas. As constrições externas no ectoderme, são os Sulcos ou Fendas Faringeais. As bolsas contribuem na formação da tuba, ouvido médio, revestimento da amígdala, timo, paratireóide inferior, paratireóide superior. A primeira fenda contribui na formação do epitélio do ouvido externo, as demais fazem parte da região cervical.

4. A medida que você aprofundar nos cortes transversais, você observará

que o formato desse trato se modifica, mudando para arredondado e os arcos faringeais não são visíveis. Você vai encontrar uma região em que o contorno da luz desse trato se torna triangular. É o Divertículo traqueo-brônquico. Em seguida essa luz se separa em três. São: o

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esôfago, dorsalmente e os esboços dos brônquios, ventralmente. Deste segmento em diante é o nível do Esôfago agora.

5. Na seqüência essa luz se torna mais dilatada pois estaremos no nível do

Estômago. Logo a seguir começa o duodeno, na sua parte cranial. Nesta altura, ele também perde o chão como no estágio de 48 horas, abrindo-se ventralmente para o saco vitelino. É o nível do Intestino Médio, novamente.

6. Ainda poderá ser observado nos cortes finais da série, secções do

intestino posterior e da cloaca. III. CORTE SAGITAL 1. EMBRIÃO DE 24 HORAS Lâmina no._______ Esta observação já foi efetuada quando estudamos a Organogênese Rudimentar, portanto trata-se de uma recordação. Observe no corte a região da dobra cefálica onde se observa o intestino primitivo anterior cujo revestimento é endoderme. 2. EMBRIÃO DE 72 HORAS Lâmina no._______ 1. Observe passando abaixo do Tubo Neural correspondente aos

Metencéfalo e Mielencéfalo, a luz do Trato Digestório, que corresponde à faringe. Siga esse tubo em direção cefálica e você encontrará a região do Estomodeo que se flete como o Tubo Neural e ao passar paralelo ao Diencéfalo observe a Bolsa de Rathke: uma invaginação do epitélio do Estomodeo. Ela originará a Adenohipófise no indivíduo adulto.

2. Seguindo para o lado dorsal, estaremos indo na direção ao esôfago. 3. Na seqüência tem-se o estomago, duodeno e intestino médio. 4. FETO DE 8 SEMANAS Pode-se identificar neste corte, o fígado, estômago, pulmão.