TESTE DE SUSCEPTIBILIDADE AOS ANTIMICROBIANOS (TSA) OU ANTIBIOGRAMA Thiago C. Nascimento.

TESTE DE SUSCEPTIBILIDADE AOS ANTIMICROBIANOS (TSA)

OU ANTIBIOGRAMA

Thiago C. Nascimento

Conceito: Teste para verificar o comportamento dos microrganismos (sensibilidade ou resistência) “in vitro”, frente a diversos antimicrobianos, para a escolha do antimicrobiano ideal.

Indicações: • Para microrganismos isolados e identificados como agentes causadores de infecção;

• Quando o microrganismo causador da infecção apresenta, estatisticamente, grande variabilidade no espectro de resistência ou tendência à mesma.Ex: Staphylococcus aureus, Pseudomonas sp.

Dispensado: Para microrganismos cuja sensibilidade não apresenta variação ao longo do tempo.Ex: Neisseria meningitidis, Streptococcus pyogenes (sensíveis à penicilina G)

Os resultados servem de base para:

1. Nortear a escolha do agente antimicrobiano mais adequado;

2. Predizer a chance de sucesso de um esquema terapêutico.

Cultura + Antibiograma

O diagnóstico laboratorial das doenças infecciosas começa com a indicação clínica adequada do exame microbiológico, o que requer conhecimento da epidemiologia e da fisiopatologia do processo infeccioso

Laboratórios brasileiros

CLSI

Rede Brasileira de Monitoramento da

Resistência Microbiana (ANVISA)

Tipos de Teste:

2. Quantitativo: determinação da concentração inibitória mínima (CIM).

A. Diluição: em tubo ou em placa;

B. Teste E (Teste epsilométrico).

1. Qualitativo: método de difusão de discos em ágar

1. Qualitativo: método de difusão de discos em ágar (Kirby-Bauer)

16 a 24h, 35ºC

Suspensão bacteriana (0,5 McFarland)

Ágar Mueller- Hinton

Disposiç ão dos discos impregnados com antimicrobianos

16 a 24h, 35ºC




16 a 24h, 35ºC




16 a 24h, 35ºC




Princípio: medida do halo de inibição (mm)


A. Diluição: em tubo;

Inoculo padronizado da amostra teste

Aerobiose ~24 H - 37ºC

Caldo

Ágar

Caldo + droga em concentrações crescentes

Controle

0,0625µg/mL -1024,0 µg/mL

CIM

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12


A. Diluição: em placa;

Aerobiose 24h - 35ºC

Suspensão bacteriana (0,5

McFarland)

Controle Concentração Inibitória Mínima

Replicador de Steers Ágar + Droga

0,0 µg/mL 0,0625 µg/mL 0,125µg/mL

0,25µg/mL 0,5µg/mL 1,0µg/mL

2,0µg/mL 4,0µg/mL 8,0µg/mL

?



Vários estudos demonstram que a CIM determinada pelo Etest® apresenta concordância com os métodos de diluição em ágar ou tubo, para dierentes antimicrobianos, em geral, com uma variação permitida de +/- 1 diluição.

DEMONSTRAÇÃOE

INTERPRETAÇÃO


Halo de

leitura em mm

Leitura• Ausência de halo: resistência• Presença de halo: sensibilidade ou resistência


Medir os halos de cada placa distribuída

Anotar os resultados

Consultar o CLSI

Resultado

• Sensível• Resistente• Resistência Intermediária

Correlação entre tamanho do halo e CIMQuando os halos de inibição são correlacionados aos valores logarítmicos da CIM, pela análise de regressão linear, encontra-se uma relação linear consistente demonstrando que o halo de inibição é inversamente proporcional à CIM daquele antimicrobiano

Do ponto de vista clínico, o que significa dizer que uma bactéria é sensível, resistente, ou apresenta resistência intermediária?• Resistente: significa que a bactéria não é inibida pelas concentrações de antimicrobiano alcançadas pelas doses habituais e há grande chance de falha terapêutica; a bactéria cresce na concentração sérica máxima do antimcrobiano no paciente;

• Resistência intermediária: isolados cujas CIMs são próximas à concentração sérica máxima obtida por aquele antimicrobiano;

• Sensível: a categoria sensível implica que a infecção causada pela bactéria isolada pode ser adequadamente tratada com a dosagem recomendada para aquele tipo de infecção e para aquela espécie bacteriana, portanto o antimicrobiano pode ser utilizado para o tratamento;

Os resultados dos TSA devem ser muito bem interpretados pela equipe do laboratório de microbiologia, antes que o relatório final seja emitido ao médico.

Fatores que influenciam o resultado do TSA:

1. Composição química do meio de cultura: ágar Muller-Hinton, com 4 a 6 mm de espessura ;

2. Densidade do inóculo: 108 células/mL;

3. Temperatura: 35ºC a 37ºC;

4. Concentração dos antimicrobianos nos discos;

5. Validade e conservação dos discos;

6. Ação e estabilidade da droga:

7. Tempo de incubação : 18 a 24h

6.1 . Algumas drogas podem sofrer hidrólise nas primeiras horas de incubação

6.2 . Velocidade de crescimento maior que velocidade de difusão da droga

Antimicrobianos de escolha x

Antimicrobianos de reserva

Antimicrobianos de espectro estreito

x Antimicrobianos

de amplo espectro

Triste Realidade

Obrigado

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