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Métodos de detecção dos protozoários Giardia
spp. e Cryptosporidium spp. em águas
Romeu Cantusio Neto
V Fórum de Discussão da Sociedade Paulista de
Parasitologia:
Protozoários Patogênicos em Amostras Ambientais:
Ocorrência e Métodos de Detecção .
www.sanasa.com.br
Pedreira
Campinas
Dados Gerais
Campinas
Paulínia
Jaguariúna
Morungaba
Valinhos
Sumaré
Hortolândia
Monte Mor
Indaiatuba
• 1,04 milhões de habitantes
• 796 km2
• 568 industrias
• 25.833 estabelecimentos comerciais
• Universidades
Captação do rio Atibaia
Captação do rio Capivari
Sociedade de Abastecimento de Água e
Saneamento S/A – Campinas – São Paulo
• Captação, adução, tratamento, reservação e distribuição de
água potável;
• Coleta, afastamento e tratamento dos esgotos domésticos;
• Volume médio mensal água potável produzido: 10 milhões m3;
• Adutoras e redes de distribuição: 3200 Km;
• Volume reservado: 60 reservatórios dispersos pela cidade (28
elevados e 32 semi-enterrados) com capacidade total de 120
milhões de litros.
•Estações de tratamento de água da Sanasa (tipo convencional):
=>Clarificação (floculadores, decantadores e filtros);
=>Desinfecção (cloradores e amoniadores);
=>Polimento (caiação e fluoretação)
Estações de Tratamento de
Água
Capacidade Início de Operação
ETA 1 500 L/s 1936
ETA 2 700 L/s 1961
ETA 3 e 4 2900 L/s 1972 (ETA 3) 1991 (ETA
4)
ETA Capivarí 360 L/s 1988
Portaria 51825 de Março de 2004
Norma de Qualidade de Água para
Consumo Humano no Brasil
No Brasil, a Portaria nº 518/MS
Recomenda a investigação dos protozoários em amostras de
água de abastecimento.
Problemas para a implantação:
-disparidade econômica em todo território nacional
-dificuldade de aquisição dos equipamentos necessários
-falta de recursos humanos
Brasil
Metodologias de detecção de
protozoários em amostras
hídricas- Método de Filtração em Cartuchos
- Filtração em Membranas
- Floculação em Carbonato de Cálcio
- Método 1623
Considerações:
- Grande variabilidade
Baixa eficiência de recuperação frente a fatores interferentes
- Altos custosUSEPA; Connel et al., 2001
Captação
Purificação
Detecção
Volumes
variados
• baixo custo
• Captura eficiente
• baixo volumes filtrados
• efeito da turbidez
Vantagens
Desvantagens
Membranas
• Captura eficiente
• Eluição simples
• alto custo
• disponibilidade
Vantagens
Desvantagens
Gelman Envirochek and
Envirochek HV
• IDEXX Filta-Max System
Espumas
Filtração
da
amostra
tubo de eluição
Liberação das espumas
e ciclos sucessivos de
lavagem
MÉTODO DE FILTRAÇÃO EM MEMBRANAS
I – COLETA E FILTRAÇÃO (4L/min)
II – ELUIÇÃO
III – IMUNOFLUORESCÊNCIA
1 L
ÁGUA
RASPAGEM DA
SUPERFÍCIE LAVAGEM DA
SUPERFÍCIE650 x g
(15 min.)
2 x
SOBRENADANTE
SEDIMENTO
SEDIMENTO1,0 mL
Controles
+ - Am.
Giardia
Cryptosporidium
Membrana de ésteres mistos de celulose
antes da filtração
Membrana
pós filtração por água bruta
Equipamento utilizado na metodologia de Filtração
em Membrana
Método de Filtração
10 L
ÁGUA
CaCl2 NaHCO3
Cryptosporidium
Giardia
pH 10Ác. Sulfâmico
MÉTODO DE FLOCULAÇÃO EM
CARBONATO DE CÁLCIO
3.000 RPM
(10 min.)
Material floculado
Sedimento em tubo cônico Sedimento final
Floculação em Carbonato
de Cálcio
AMOSTRAANTICORPO
MAGNÉTICO
SEPARAÇÃO IMUNOMAGNÉTICA
Princípio da Separação Imunomagnética
Debris + organismos
Debris
Principais etapas da IMS –Separação Imunomagnética
Mixer Dynal MX-1 Concentrador Magnético MPC1
Tubo Dynal L10 Concentrador Magnético MPC-S
• Reação de Imunoflorescência Direta:
• grau de fluorescência
• formato e tamanho
• caracteres morfológicos
EnumeraçãoCryptosporidium spp. e Giardia spp.
Cisto 400x e Oocisto 600x (Color Seed®) Cisto e Oocisto 600x (RID)
Cistos 400x e 200x (RID) Cisto e Oocisto 600x (Contraste de Fase)
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
0
200
400
600
800
1000
1200
1400
1600
1800
Meses/Anos
CAPTAÇÃO DO RIO ATIBAIA
* Captação do Rio Capivari
Médias - Eficiência de Recuperação em amostras de
água bruta (rio Atibaia)
• Filtração em Membranas:
- Sem IMS:
- Giardia spp. 15,6 – 52,5
- Cryptosporidium spp. 25,5 – 35,0
- Com IMS:
- Giardia spp. 19,3 – 57,0
- Cryptosporidium spp. 10,0 – 52,0
• Floculação em Carbonato de Cálcio:
- Sem IMS:
- Giardia spp. 14,3 – 60,5
- Cryptosporidium spp. 26,8 – 39,5
- Com IMS:
- Giardia spp. 40,5 – 58,0
- Cryptosporidium spp. 12,5 – 33,0
Publicações
• CANTUSIO NETO, R. ; LUCIANA URBANO SANTOS; MARIA INÊS ZANOLI SATO;
FRANCO, RMB. Detection of Cryptosporidium spp. and Giardia spp. in samples of
natural water from the Atibaia River, city of Campinas, São Paulo, Brazil,
concentrated using Membrane Filtration and Calcium Carbonate Flocculation
Methods, followed or not by Immunomagnetic Separation. In: 15th Health Related
Water Microbiology Symposium, 2009, Naxos. 15th Health Related Water
Microbiology Symposium, 2009. v. 1. p. 330-B21.
• Luciana Urbano Santos; Franco, Rmb; A. Guaraldo; CANTUSIO NETO, R.; D. Alves.
Infectivity of Giardia spp. in BALB/c Nude Mice Inoculated with Cysts of Effluent
Watewater after UV Light Disinfection. In: 59 AALAS National Meeting, 2008,
Indianapolis. Abstracts of scientific papers 2008 AALAS National Meeting, 2008. v. 1.
p. 12-12.
• Leal, D. A. G.; Pereira, M. A.; Franco, R. M. B ; Branco, N.; CANTUSIO NETO, R. .
First report of Cryptosporidium spp. oocysts in oysters (Crassostrea rhizophorae)
and cockles (Tivela mactroides) in Brazil. Journal of Water and Health, v. 130208, p. 1-
7, 2008.
Publicações
• Luciana Urbano Santos ; CANTUSIO NETO, R. ; Franco, Rmb . Protozoários
patogênicos de veiculação hídrica: as metodologias de detecção em amostras de
esgoto e a eficiência dos tratamentos de remoção e desinfecção. Higiene Alimentar, v.
22, p. 22-28, 2008.
• Tais Rondelo Bonnatti ; Franco, Rmb ; CANTUSIO NETO, R. . Comparison of two
methodologies for detection of Giardia spp. cysts and Cryptosporidium spp. oocysts
in activated sludge from a sewage treatment plant in the city of Campinas, São Paulo,
Brazil.. Journal of Water and Health, v. 05, p. 1-7, 2007.
• CANTUSIO NETO, R. ; Luciana Urbano Santos ; Franco, Rmb . Evaluation of
activated sludge treatment and the efficiency of the disinfection of Giardia species
cysts and Cryptosporidium oocysts by UV at a sludge treatment plant in Campinas,
south-east Brazil. Water Science and Technology, v. 54, p. 89-94, 2006.
• CANTUSIO NETO, R.; Luciana Urbano Santos; Franco, RMB . Evaluation of
activated sludge treatment and the efficiency of the disinfection of Giardia species
cysts and Cryptosporidium oocysts by UV at a sludge treatment plant in Campinas,
south-east Brazil. In: WATER MICRO 05, 2005, SWANSEA. 13 INTERNATIONAL
SYMPOSIUM ON HEALTH-RELATED WATER MICROBIOLOGY. v. 1. p. 42-42.
Publicações
• CANTUSIO NETO, R. ; Franco, RMB . Ocorrência de oocistos de Cryptosporidium spp. e cistos de Giardia, spp. em diferentes pontos do processo de tratamento de água, em Campinas, São Paulo, Brasil. Higiene Alimentar, v. 18, p. 52-59, 2004.
• Luciana Urbano Santos ; Tais Rondelo Bonnatti ; CANTUSIO NETO, R. ; Rocha-eberhardt, R . Occurrence of Giardia cysts and Cryptosporidium oocysts in activated sludge samples in Campinas, SP, Brazil. Revista do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo, v. 46, p. 309-313, 2004.
• Franco, RMB ; CANTUSIO NETO, R. Occurrence of Cryptosporidial oocysts and Giardia cysts in bottled mineral water commercialized in the city of Campinas, State São Paulo, Brazi. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz, v. 97, p. 205-207, 2002.
• Franco, RMB ; CANTUSIO NETO, R. ; Rocha-Eberhardt, R . Occurrence of Cryptosporidium oocysts and Giardia cysts in raw water from Atibaia River, Campinas, Brazi. Revista do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo, v. 43, p. 109-111, 2001.