7/23/2019 Apostila Protocolos Bioqumica Experimental
1/24
1
D B
I
A
BIICA EEIEA
B 0316
2013
C H
G A
E :
B B.
I , C
A
J.
.
7/23/2019 Apostila Protocolos Bioqumica Experimental
2/24
2
1
.
A
( )
(EOH)100 M
(PMSF) EOH
20 / ()
100 M H 7,0 5M EDTA ( )
0,5
F
A F ATENO! MANTENHA OS TUBOS DE ENSAIO EM GELO
1. E 1 ( )
2. A 4 3. R 4. A 40 L PMSF (100 M) 5. H 6. A 8 7. A 1 ( )8. R 1 9. R 7 8 4 10. C + 850 2 11. R
F LISADO
12. M LISADO 13. R + 4 14. A 40 L PMSF (100 M) 15. H 16. R 10 15 2 , LISADO17. U , LISADO18. D 3 F19. I 20C
B ( )1. T
2. A 3. A 15 4. D (2)5. A 6. L 7. D 8. R 6 8 5 9. A 10. C
7/23/2019 Apostila Protocolos Bioqumica Experimental
3/24
3
2 D
.
A
0,2 / (P1)
B ( 85%, C B G, )
A C 1.A T 1
2.A B
3.H
4.A 5 5.U ()
6.L 595
7.C T 2
8.C B
T 1
A0,2 / ()
()
R B
()
B 0 100 1,0
1 10 90 1,02 20 80 1,03 30 70 1,04 40 60 1,05 50 50 1,06 60 40 1,07 70 30 1,08 80 20 1,0
T 2
M ()
A595
12345678
7/23/2019 Apostila Protocolos Bioqumica Experimental
4/24
4
B D
OBSERVAO: . P 100:
1.T 0,1 L1002.A 9,9 .3.H .
1.A T 32.A B3.H 4.A 5 5.U () 6.L 595 7.C T 4
OBSERVAO: C , .
T 3
L100()
()
R B ()
B 0 100 1,0A1 100 0 1,0A2 50 50 1,0A3 30 70 1,0A4 20 80 1,0
T 4
A595
A1A2A3A4
7/23/2019 Apostila Protocolos Bioqumica Experimental
5/24
5
3 D
.
A
(P1)
8 M (NPG)
200 M (H 7,0)
250 M(H 11,0)
96
30C
A ATENO! MANTENHA OS TUBOS DE ENSAIO EM GELO
A .
1.T 0,2 L102.A 1,8 3.T 0,4 L10X L504.A 1,6 5.T 0,2 L50X L5006.A 1,8 7.M
B ATENO! E .
T , .
S .
1.P 2.A NPG T 13.A 4.T 30C5.I T 16.A , 2 H 11,07.A 8.C 100 96 , 9.U , 420 10.C T 2 4
7/23/2019 Apostila Protocolos Bioqumica Experimental
6/24
6
T 1
8 MNPG ()
H 7,0
()
()
30 C ()
1 0,1 0,1 0,2 52 0,1 0,1 0,2 103 0,1 0,1 0,2 154 0,1 0,1 0,2 20B 0,4 20
B * 0,2 0,2 *
T 2 L10
1(A420)
2(A420)
3(A420)
(A420)
1234B B
T 3 L50
1(A420)
2(A420)
3(A420)
(A420)
1234B B
T 4 L500
1(A420)
2(A420)
3(A420)
(A420)
1234B B
y = 0.0049x + 0.014R = 0.9974
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
0 50 100 150 200 250 300
Abs420
nm
NPGlc (nmol)
Curva padro do NPGlc
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7/24
7
4 C H
D H .
A
(P1)
8 M (NPG)
200 M (H 8,0)
200 M (H 9,0)
200 M (H 4,0) 200 M (H 5,0)
200 M (H 6,0) 250 M
(H 11,0)
96
30C
A D .C , 1.T 0,2 L102.A 1,8 3.T 0,1 L10X L1004.A 4,9 5.M
B E
1.R (NP G) 6 H
2.P , ,
T 1
3.M
4.A ( )
5.A
6.T 30 C
7.I T 1
8.A , 2
9.A
10.C 100 96 , 11.U , 420 12.C T 2, 3 4
13.D H
7/23/2019 Apostila Protocolos Bioqumica Experimental
8/24
8
H =
T 1
8 M NPG()
T H
()
()
()
1 0,1 0,1 0,2 52 0,1 0,1 0,2 10
3 0,1 0,1 0,2 154 0,1 0,1 0,2 20
T 2
H = 4,0 H = 5,0
T 1(A420)
2(A420)
3(A420)
M(A420)
T 1(A420)
2(A420)
3(A420)
M(A420)
1 12 23 3
4 4
T 3
H = 6,0 H = 8,0
T 1(A420)
2(A420)
3(A420)
M(A420)
T 1(A420)
2(A420)
3(A420)
M(A420)
1 12 23 34 4
T 4
H = 9,0
T 1(A420)
2(A420)
3(A420)
M(A420)
1234
7/23/2019 Apostila Protocolos Bioqumica Experimental
9/24
9
1P 1 L P 2 D P 3 D P 4 C H
O :
1.A (/) (). P :
) P A595) C ) A (/) L100) A (/)
2.
A (U/) H 7,0. P :
) C A420 NPG (M)) P NPG (M)
) C
) U (U) ) C (U/) ,
) C (U/)
3.O (U/) H. P :
) C A420 NPG H) P NPG H) C ) U H) C H. A
H ( P3 H 7,0 )
) P H
A , :)Q ?)P 100 M PMSF ?)Q ?)P NPG ?)Q ?)E H ? C H
?
7/23/2019 Apostila Protocolos Bioqumica Experimental
10/24
10
5
I .
A H DEAE ( )
P 0,5 DEAES
1.A 100 10 M H 6,8
2.M
3.D
B ( )
M
1.U (20 )
2.P
3.C
4.C
5.L
6.A 6
7.F
P
8.F
9.H (P A)
10.A 1,0
11.D
12.R 1,0
13.C , 20 10 M NC
14.A ,
15.D 3
16.
NUNCA DEIAR A RESINA SECAR
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11/24
11
C C
P
1.D , 1,0
10.000 13 . C .
2.P (0,4 ) , (0,6 )
() .
P
3.D 0,4 ( ) 0,6 10
M NC.
.
4.V .
5.U ( )
.
6.C 1 .
7.D 3 .
8.F 1 .
E
9.A NC (2 )
10.C 2
11.C 1
12.T 1
13.F 8
14.A 1,0 . A, 2,0
15.C ,
16.A 10, 3
E
17.A NC (2,0 )
18.A
19.C 1,0
20.T 1 21.F 18
22.A 1,0 . A, 2,0
23.C ,
24.F 20. N
7/23/2019 Apostila Protocolos Bioqumica Experimental
12/24
12
D I ATENO! MANTENHA OS TUBOS DE ENSAIO EM GELO
1.P 1 20. A 0,2 4M NPG
2.T
3.A 0,2
4.T 30 C
5.I 10
6.A , 2 H 11,07.A 8.C 100 96 9.U , 420 7.C T 1
8.C A
9.U , (
) F MATERIAL DEAE
T 1
A420 A420
1 112 123 134 145 156 167 178 189 1910 20
E D
ATENO! MANTENHA OS TUBOS DE ENSAIO EM GELO
T ,
. S
.
1.D ( P3)2.A NPG T 23.A
4.T 30
C5.I T 26.A , 2 H 11,07.A 8.C 100 96 9.U , 420 10.C T 311.C (U/) .
7/23/2019 Apostila Protocolos Bioqumica Experimental
13/24
13
T 2
4 M NPG()
()
()
30 C ()
1 0,2 0,2 52 0,2 0,2 103 0,2 0,2 154 0,2 0,2 20B 0,2 0,2 20
B 0,2 0,2
T 3
1(A420)
2(A420)
3(A420)
(A420)
1234B
F D DEAEE E
1.D DEAE, 0,2 DEAE 1,8 DEAE10. H 2.A NPG DEAE ( 10) T 43.T 30C T 44.A , 2 H 11,0
5.A 6.C 100 96 7.U , 420 T 58.C M DEAE.
T 4
4 M NPG()
M DEAE( 10)
()
30 C ()
1 0,2 0,2 52 0,2 0,2 103 0,2 0,2 15
4 0,2 0,2 20T 5
1(A420)
2(A420)
3(A420)
(A420)
1234
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14/24
14
G D DEAEATENO! O DEAE
1.A DEAE T 62.A B3.H 5 4.U () 5.L 595 6.C T 7
T 6
T M DEAE()
()
R B()
B 0,1 1,01 0,1 1,02 0,1 1,03 0,1 1,0
T 7
T A595 M ()
V ()
C (/)
123
H D DEAEATENO! O DEAE
E G
1.D 20 . T 0,1 1,9
2.A T 83.H 5 4.U () 5.L 595 6.C T 9
T 8
T M DEAE()
()
R B()
1 0,1 1,02 0,1 1,03 0,1 1,0
T 9
T A595 M ()
V ()
C (/)
123
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15/24
15
2P 5 P
O :
1.
U .I NC.2.A (U) . P ,
:) (U/)
3.
A (U/) . P , :
) (/) 4.A (U) . P , :
) (U/) DEAE5.
A (U/) DEAE. P , :
) (/) DEAE6.O
) A DEAE
) O ( DEAE ).
7/23/2019 Apostila Protocolos Bioqumica Experimental
16/24
16
6 DAGE
A .
C100 / SDS5 /
3,55 1,25 2,50 2,00 0,20 0,05
ANN
29,2 0,80 100
C R
0,1 40 10
50
B1,5 M T( H HC)
H 8,8
40 10 50
C0,5 M T( H HC)
H 6,8
100 / SDS
3,03 14,4 1,0 1 L
O.: N H
A 1.A SDSPAGE:
. (30 ). ,
M DEAE ( 1 )
D
2.T .3.I :
. N .. N .
4.A , , 600 5.C 6.P 7.T 8.C 9.M 16
7/23/2019 Apostila Protocolos Bioqumica Experimental
17/24
17
S ( )10.A , 11.S
D 12.T 20 13.T 14.I 5 15.A
B DAGE ( )P 1.A T 12.H 3.T , P, 4.A 60 5.C
P 6.A , T 2
7.H 8.T , P, ( ) 9.A 40 10.A , 11.A
T 1
4,02 100 / SDS 100 L A 3,33
B 2,5 TEMED 5 L 50 L
T 2
3,05 100 / SDS 50 L A 0,65 C 1,25 TEMED 5 L 25 L
7/23/2019 Apostila Protocolos Bioqumica Experimental
18/24
18
C , 1.C 100V, 40 2.D 3.D 4.R 5.C 6.C 40 7.R 8.C
9.D 10.V
D ()1.C 2.T 3.R 4.C 50 /5.M 6.D 7.C
8.C , .9.R 10.E 11.D
F
7/23/2019 Apostila Protocolos Bioqumica Experimental
19/24
19
7 C :
C (K) () (V) .
A
1,0 M (NPG) 100 M (H 7,0)
2,0 M NPG 100M (H 7,0)
8,0 M NPG 100M (H 7,0) 250 M(H 11,0)
100 M (H 7,0)
96
30
C
A D ATENO! MANTENHA OS TUBOS DE ENSAIO EM GELO
U P 3. O 5,0
1.T 0,1 L10
2.A 0,9
3.H SUAVEMENTE
4.T 0,5 L10 L100
5.A 4,5
6.H SUAVEMENTE
B ATENO! MANTENHA OS TUBOS DE ENSAIO EM GELO
1.A NPG T 1. ATENO:
2.P
3.A ( ) T 1.
A
4.T 30 C
5.I 40 (OU PELO DOBRO DO MAIOR TEMPO USADO NA PRTICA 3)6.R
7.A 2
8.A 9.C 100 96 10.U , 420 T 2 311.C K V
7/23/2019 Apostila Protocolos Bioqumica Experimental
20/24
20
T 1
1 M NPG()
2 M NPG()
8 M NPG()
T 100 M H 7
()
L ()
1 0,02 0,28 0,102 0,04 0,26 0,106 0,08 0,22 0,104 0,12 0,18 0,10
5 0,16 0,14 0,106 0,20 0,10 0,107 0,16 0,14 0,108 0,20 0,10 0,109 0,10 0,20 0,1010 0,13 0,17 0,1011 0,15 0,15 0,10
T 2
1
(A420)
2
(A420)
3
(A420)
(A420)1264567891011
T 3
S (M)
(A420)
P()
T ()
V(/)
12645
67891011
7/23/2019 Apostila Protocolos Bioqumica Experimental
21/24
21
8 C :
D (NPG)
A
1,0 M (NPG) 100 M (H 7,0)
2,0 M NPG 100M (H 7,0)8,0 M NPG 100M (H 7,0)0,4 M 100 M(H 7,0)
1,2 M 100 M(H 7,0)
1,6 M 100 M(H 7,0)
250 M(H 11,0) 100 M (H7,0)
100 M (H 7,0)
96
30C
A ATENO! MANTENHA OS TUBOS DE ENSAIO EM GELO
1.A NPG T 1. ATENO:
2.A ( ) T 1
( ) 2 ( ).
3.. A .
4.T 30 C
5.I 7
6.R .7.A 2 .
8.A 9.C 100 96 10.U , 420 T 3 411.C
.
7/23/2019 Apostila Protocolos Bioqumica Experimental
22/24
22
T 1 ( )
1 MNPG
()
2 MNPG
()
8 MNPG
()
0,4 M
()
1,2 M
()
T
100 MH 7 ()
L
()
1A 0,08 0,10 0,12 0,101B 0,08 0,10 0,12 0,102A 0,20 0,10 0,10
2B 0,20 0,10 0,103A 0,16 0,10 0,04 0,103B 0,16 0,10 0,04 0,104A 0,20 0,10 0,104B 0,20 0,10 0,105A 0,10 0,10 0,10 0,105B 0,10 0,10 0,10 0,106A 0,15 0,10 0,05 0,106B 0,15 0,10 0,05 0,10
T 2 ( )
1 MNPG
()
2 MNPG
()
8 MNPG
()
0,4 M
()
1,2 M
()
T
100 M H7
()
L
()
7A 0,08 0,10 0,12 0,107B 0,08 0,10 0,12 0,108A 0,20 0,10 0,108B 0,20 0,10 0,109A 0,16 0,10 0,04 0,109B 0,16 0,10 0,04 0,1010A 0,20 0,10 0,10
10B 0,20 0,10 0,1011A 0,10 0,10 0,10 0,1011B 0,10 0,10 0,10 0,1012A 0,15 0,10 0,05 0,1012B 0,15 0,10 0,05 0,10
T 3
S (M)
I (M)
1(A420)
2(A420)
3(A420)
(A420)
1A1B2A
2B3A3B4A4B5A5B6A6B
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23/24
23
T 4
S (M)
I (M)
1(A420)
2(A420)
3(A420)
(A420)
7A7B8A8B
9A9B10A10B11A11B12A12B
7/23/2019 Apostila Protocolos Bioqumica Experimental
24/24
3P 6 P SDSPAGEP 7 C : K VP 8 C :
O :
1. O . P , :) I SDSPAGE.) C
.2.
O K V . P , :) C (/) P7) C MM ( ).) C LB (1/V 1/[S)]) D K V
3.
P . P , :) C (/) P8,
) C LB (1/V 1/[S)]
) D .
A , :) P ?) Q ?) Q SDS?) C
?) E .
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