DIAGNÓSTICO LABORATORIAL DE DIROFILARIOSIS

Elena Carretón, José Alberto Montoya-AlonsoMedicina interna, Facultad de Veterinaria, Universidad de las Palmas de Gran Canaria

DIROFILARIOSIS

� Dirofilaria immitis

� Perros, gatos y hurones

DIROFILARIOSIS CANINA

� Arterias pulmonares

� Ventrículo derecho

� Wolbachia pipientis� Wolbachia pipientis

DIROFILARIOSIS CANINA

� Enfermedad cosmopolita

� Distribución mundial

� ↑Temperatura y humedad

DIROFILARIOSIS CANINA

� Transmisión anual

� Transmisión estacional

DIROFILARIOSIS CANINA

� España: condiciones óptimas

� Prevalencia que presente cada zona

� condiciones medioambientales

� hábitos de la población canina Montoya et al, 2007

� hábitos de la población canina

DIROFILARIOSIS CANINA

� Prevalencias más elevadas: Islas Canarias

� Gran Canaria: 67% - 19%

0

20

40

60

80

1994 1995 1996 2000 2002 2007 2010

Prevalencia

1. TESTS DE ANTÍGENOS

� Técnicas de ELISA o inmunocromatografía

� Proteínas parásitos adultos hembras

1. TESTS DE ANTÍGENOS

� Elevada ESPECIFICIDAD

� Falsos Positivos

� Elevada SENSIBILIDAD

� Falsos Negativos� Falsos Negativos

Snap 3Dx®, Snap Filaria® (Idexx)

� idexx Sensibilidad 98.7 %

Especificidad 100 %

Speed Diro® (Virbac)

Sensibilidad 95.2 %

Especificidad 99 %

Anigen HW Ag 2.0 ® (Bionote)

� anigen Sensibilidad 94.4 %

Especificidad 100 %

CHW Ag ® (Quicking Biotech)

� quicking Sensibilidad 91.3 %

Especificidad 100 %

Uranotest Dirofilaria® (Uranovet)

Sensibilidad 94.4 %

Especificidad 100 %

Witness ® (Synbiotics - Pfizer)

Sensibilidad 97.5 %

Especificidad 100 %

FasTest HW Antigen® (Megacor)

Sensibilidad 98.6 %

Especificidad 99.1 %

DFV test dirofilaria® (Divasa)

Sensibilidad 94.4 %

Especificidad 100 %

SensPERT CHW ® (SensPert)

Sensibilidad ?? %

Especificidad ?? %

Tests de Antígenos de pocillos

Petchek Filaria PF (Idexx) Filarchek (Ingenasa)

Dirochek (Pfizer)

1. TESTS DE ANTÍGENOS

� Una sola hembra adulta

� Factores pueden afectar la sensibilidad

� edad del parásito

� tamaño del perro � tamaño del perro

1. TESTS DE ANTÍGENOS

� No carga antigénica suficiente < 6 meses

1. TESTS DE ANTÍGENOS

� Cantidad de antígenos: nº hembras adultas??

� ↑muerte reciente

� ↓hembras jóvenes

� ↓filarias machos � ↓filarias machos

1. TESTS DE ANTÍGENOS

� Falsos positivos:

� errores técnicos

� retrasar la lectura del resultado

1. TESTS DE ANTÍGENOS

� Falsos negativos:

� Fallos técnicos

� Baja sensibilidad

� Carga parasitaria muy ligera� Carga parasitaria muy ligera

� Sólo por filarias macho

� Dirofilarias <6 meses

1. TESTS DE ANTÍGENOS

� Si se duda (positivo muy débil)

� repetir la prueba

� repetir en otra marca

2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS

� OBSERVACIÓN DIRECTA

� objetivo de x10 aumentos

2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS

� El nº no guarda relación con el nº adultos ni gravedad

� No identifica tipo de microfilarias

Dirofilaria immitis ● Arterias pulmonares● Ventrículo derecho

Dirofilaria repens● Tejido subcutáneo

Acanthocheilonema(Dipetalonema) reconditum

● Peritoneo y cavidad abdominal

Acanthocheilonema(Dipetalonema) dracunculoides

● Cavidad peritoneal

2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS

� Dirofilaria immitis

� más móviles

� movimiento ondulante y no progresivo

� Dipetalonema

reconditum

� movimiento rectilíneo y progresivo

2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS

� TEST DE WOO

� Tubo de hematocrito: capa flogística

2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS

� MÉTODO DE FILTRACIÓN:

� 1 ml de sangre + 9 ml de carbonato sódico 0.1%

� Filtro (3 µm diámetro)

� Azul de metileno 0.1% � Azul de metileno 0.1%

2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS

� TEST DE KNOTT:

� 1 ml sangre + 9 ml formalina 2%

� 5’ a 1100 rpm

� Sedimento + azul de metileno� Sedimento + azul de metileno

2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS

� MÉTODO HISTOQUÍMICO:

� Extensiones de sangre

� Se cubren con la fosfatasa ácida 2 horas a TA

� Contrateñir verde metilo al 1% � Contrateñir verde metilo al 1%

2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS

D.immitis

● Poro anal

● Poro excretor

D.repens

● Poro anal

D.reconditum

● Todo el parásito

D.dracunculoides:

● Poro anal

● Poro excretor

● Cuerpo interno

● Espacio cefálicoCanine and feline heartworm disease; diagnosis and therapy. Schrey & Trautvetter. 1998

2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS

� 20-30% amicrofilarémicos

� Localización ectópica de adultos

� Parásitos de un solo sexo

� Periodo de prepatencia (7 meses)� Periodo de prepatencia (7 meses)

� Respuesta inmune frente MF

2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS

� Porcentaje se eleva: tratamiento preventivo intermitente

MF POSITIVO y TEST AG NEGATIVO

� Falso Negativo

� Fallo técnico

� Bajo nº hembras

� Anticuerpos que enmascare antígenos� Anticuerpos que enmascare antígenos

MF POSITIVO y TEST AG NEGATIVO

� Microfilarias no son D.immitis:

� D.reconditum

� D.repens

� D.dracunculoides� D.dracunculoides

� Estudio histoquímico

� Estudio morfológico

MF POSITIVO y TEST AG NEGATIVO

� D.immitis y D.repens mayor anchura y longitud

� D.reconditum y D.dracunculoides más estrechas y cortas

D.immitis D.repens D.reconditum D.dracunculoides

Longitud µm 260-340 274-362 241-287 190-211Longitud µm 260-340 274-362 241-287 190-211

Anchura µm 4-6.5 5.8-7.3 3.8-5 4.8-5.8

Dirofilaria immitis ● Extremo cefálico afilado● Cola recta y afilada

Dirofilaria repens ● Extremo cefálico romo● Cola afilada y filiforme (mango de paragüas)

Acanthocheilonema(Dipetalonema) reconditum

● Extremo cefálico romo con gancho prominente● Cola chata y en gancho

Acanthocheilonema(Dipetalonema) dracunculoides

● Extremo cefálico romo● Cola larga y afilada

MF POSITIVO y TEST AG NEGATIVO

� Muerte de adultos:

� circunstancias naturales

� tratamiento adulticida

� MF sobreviven 2 años� MF sobreviven 2 años

MF POSITIVO y TEST AG NEGATIVO

� Transfusión: de un perro microfilarémico

MF POSITIVO y TEST AG NEGATIVO

� Vía transplacentaria: madre con microfilaremia

� Microfilarias no se desarrollarán en adultos

HEMATOLOGÍA

� Anemia: 10-60%

� Normocítica normocrómica

� Hemólisis (síndrome vena cava)

� Leucocitosis: 20%� Leucocitosis: 20%

� Neutrofilia, monocitosis

� Eosinofilia: 85-95%

� Basofilia: 35-40%

HEMATOLOGÍA

� Perfil de coagulación� Trombocitopenia

� Hipofibrinogenemia

� Tiempo de protrombinoplastina parcial y tiempo de � Tiempo de protrombinoplastina parcial y tiempo de

coagulación activada prolongados

� Altas concentraciones de PDFs

●Tromboembolismo●CID

BIOQUíMICA

� Alteración hepática:

� FA, ALT, AST: 5-10%

� Alteración renal:

� Azotemia: <5%

Hipoalbúminemia� Hipoalbúminemia

URIANÁLISIS

� Glomerulonefropatía

� Depósito de complejos autoinmunes

� MF circulantes

� Ag deWolbachiaAg deWolbachia

URIANÁLISIS

� Proteinuria (U P/C >0.5): 10-45%

Group A (WSP POSITIVE) Group B (WSP POSITIVE)

0.72+0.81 0.27+0.33

Group A (WSP POSITIVE) Group B (WSP NEGATIVE)

81.5+78.8 mg/dl 28.1+24.4 mg/dl

MARCADORES CARDIOPULMONARES

� Veterinaria:� Enf CP tempranas o asintomáticas

� Casos dudosos

� Pronóstico

� Hipertensión pulmonar:

� Adultos

� Pérdida de elasticidad

� ICC derecha

MARCADORES CARDIOPULMONARES

� ICC derecha

� Tromboembolización:

� Endoarteritis: oclusión de arteriolas

� Desprendimiento íntima lesionada

� Muerte de parásitos

MARCADORES CARDIOPULMONARES

� Muerte de parásitos

� Valorar las lesiones producidas

� Grado de severidad

� Pronóstico

MARCADORES CARDIOPULMONARES

Integridad Miocárdica

� Troponinas T e I:� Proteínas musculares estructurales

� Isoformas cardiacas específicas

Necrosis: pérdida de integridad de la membrana� Necrosis: pérdida de integridad de la membrana

Troponinas T e I en dirofilariosis

� Troponina T: valores normales

� Troponina I: valores ligeramente aumentados

� Troponina I es un marcador más sensible que la

troponina Ttroponina T

Integridad Miocárdica

� Mioglobina:� Proteína de bajo peso molecular

� Función: fijar el oxígeno en las células musculares

Músculo cardíaco y esquelético� Músculo cardíaco y esquelético

Mioglobina en dirofilariosis

� Traumatismo torácico

� Dilatación vólvulo-torsión

� Dirofilariosis canina:

� 18.8% de perros amicrofilarémicos� 18.8% de perros amicrofilarémicos

� 23.9% de perros microfilarémicos

Marcadores de tromboembolismo pulmonar

� Dímero-D:� Evalúa presencia de procesos tromboembólicos

� Producto final de la degradación de un trombo

Dímero-D

� Elevadas concentraciones:

� Mayor formación y degradación de fibrina

FIBRINóGENO

TROMBINA

FACTOR XIII

FIBRINA

PLASMINA

DÍMERO-D

Dímero-D en dirofilariosis

� 47% presentan valores patológicos

� Especialmente perros microfilarémicos

� incrementa la tendencia al desarrollo de trombos y

CID CID

*

DIROFILARIOSIS FELINA

� Los gatos también pueden verse infectados

� gatos de exterior y de interior

� Prevalencia: 5-10% de perros ??

� SUB-DIAGNOSTICADA!!� SUB-DIAGNOSTICADA!!

� Gran Canaria: 34%

DIAGNÓSTICO

� Más complicado

� Fácil pasarla por alto

� Bajo número de parásitos

� Combinar varias técnicas� Combinar varias técnicas

� Serología

� Radiología torácica

� Ecocardiografía

Tests comerciales

� Antígenos de hembras adultas

� Resultado negativo:

� Parásitos machos

� Parásitos inmaduros o juveniles� Parásitos inmaduros o juveniles

� Antigenemia: > 6-8 meses

Detección de anticuerpos

� Ac filarias desde los 2 meses post-infección

� Falsos positivos: contacto con el parásito

� Falsos negativos: 14-20% en gatos infectados

Detección de anticuerpos

Ray Dillon and Byron Blagburn, 2007

� Anticuerpos anti-WSP

� Proteína de superficie de Wolbachia (WSP)

Detección de anticuerpos

Microfilaremia

� Muy poco probable

� < 20%

Radiología torácica

� Principales hallazgos radiológicos: � Arterias lobares y pulmonares: aumento y mayor

tortuosidad

� Proyección DV y LL

Radiología torácica

� Silueta cardíaca no suele modificarse� Patrón pulmonar broncointersticial focal o multifocal

� Suele desaparecer espontáneamente en unos meses

La mitad de los gatos presentan alguna alteración radiográfica

Ecocardiografía

� Test antígenos negativo, pero sospechamos

� DÓNDE BUSCAR:� Arterias pulmonares � Arterias pulmonares

principal y lobar derecha� Observar todas las

localizaciones posibles

� Detecta parásitos en un 40-78%

Consultations in Feline Internal Medicine (Fifth Edition)

Cuadro diagnóstico

ANTICUERPOS

NEGATIVO: Bajo índice sospecha

POSITIVO: Alto índice sospecha

ANTÍGENOS

NEGATIVO: Bajo índice sospecha

ANTÍGENOSPOSITIVO: DIAGNÓSTICO

RADIOGRAFÍATÓRAX

NORMAL: Bajo índice sospecha

ALTERACIONES: Alto índice sospecha

ECOCARDIOGRAFÍA

NO PARÁSITOS: No influye índice sospecha

SÍ PARÁSITOS: DIAGNÓSTICO

ecarreton@becarios.ulpgc.es