Post on 03-Feb-2021
Efeitos locais e sistêmicos de lesões associadas ao HPV sobre o sistema imune:possibilidades terapêuticas?
Ana Paula LepiqueDepartamento de Imunologia
Instituto de Ciências BiomédicasUniversidade de São Paulo
alepique@icb.usp.br
Família: Papillomaviridae
Gênero: , ...Papillomavirus
Partícula 50nm
8Kb, ds DNA
epiteliotrópcio (pele e mucosa)
Potencial oncogêncico alto ou baixo
Fator etiológico para verrugas,
papilomas e câncer orofaríngeos e
anogenitais.
PAPILOMAVÍRUS HUMANO E CÂNCER
GENOMA E PRINCIPAIS EFEITOS BIOLÓGICOS
E6 - liga a E6AP e leva à degradação de p53;- ativa o promotor de hTERT;
E7 – liga-se a pRb hipofosforilado, liberandoE2F e promovendo proliferação celular
Imortalização
Neoplasia intraepitelial cervical
Grau: I II III
Degradação de pRb and p53, expressão de hTERT, integração do genoma viral no
genoma do hospedeiro, imortalização, alterações genéticas, transformação celular
…......... mecanismos de evasão do sistema imune
Boccardo et al, 2010. Carcinogenesis
Endométrio
Vagina
Vulva
Cérvice
Útero
Ovário
Trompa de Falópio
trat
osu
per
ior
trat
oin
feri
or
MICROAMBIENTE
Epitélio estratificado escamoso
Epitélio colunar
SISTEMA IMUNE E REAÇÕES LOCAIS
Tempo e grau de lesão
DC
DC
IL-10
TGFCD8CTL
Treg
Treg
Treg
M2MØ
M2MØ
Alvarez, et al, 2017. Sci. Rep.
Estudo prospectivo140 pacientes
Cervicite, NIC1, 2, 3, câncerPacientes sexualmenteativas, imunocompetentes,não grávidas;
Hospital das ClínicasDra. Maricy Tacla
CD8CTL
TregTreg
Treg
CD8CTL
TregTreg
Treg
CD8CTL
TregTreg
TregCD8CTL
TregTreg
Treg
CD8CTL
TregTreg
Treg
CITOCINAS METABÓLITOS
MEDULA ÓSSEA
ORGÃOS LINFÓIDES 2ARIOS
EFEITOS SISTÊMICOS
MEDIADORESLIPÍDICOS
FATORES DECRESCIMENTO
CÉLULAS
CÉLULAS
LEUCOCITOSE TOLERÂNCIA
C’ÉLULASTUMORAIS
INFILTRADOINFLAMATÓRIO
MØ
MØ
CITOCINASFATORES SOLÚVIES
MEDULAÓSSEA
BAÇO
Treg Th1CTL
CÉLULAS
HIPÓTESE DE TRABALHO
0
50
100
150
200
1 2 3 4 5 6
G-C
SF p
g/m
l pla
sma
cont. CC CIN1 CIN2 CIN3 ICC
*
*
*
0
1
2
3
control CC highgrade
invCa
% o
f C
D6
6b
+CD
11
b-
cont. CC HG ICC
p=0.01
0
20
40
60
80
100
120
0 10 20
0
20
40
60
80
100
120
0 20 40 60
0
20
40
60
80
100
120
0 10 20 30% of circulating CD66b cells
pg/
ml p
lasm
a G
-CSF
CC HG ICC
0
20
40
60
80
100
120
0 10 20 30 40 50
R=0.02
control
R=0.28 R=0.12 R=0.54
EM PACIENTES COM CA COLO UTERINO HÁ AUMENTO DA CONCENTRAÇÃO
PLASMÁTICA DE G-CSF E AUMENTO DE NEUTRÓFILOS
IMATUROS CIRCULANTES
Alvarez, et al. 2017. Sci. Rep.
Estudo prospectivo140 pacientes
Cervicite, NIC1, 2, 3, câncerPacientes sexualmenteativas, imunocompetentes,não grávidas;
Hospital das ClínicasDra. Maricy Tacla
Karla Alvarez
EM MODELO EXPERIMENTAL OBSERVA-SE QUE CÉLULAS TUMORAIS PRODUZEM G-CSF E IL-6 ENTRE OUTRAS CITOCINAS
0
2
4
6
8
10
12
0,5 1,5 2,5 3,5 4,5
exp
ress
ion
ra
ot
arge
t/p
M
IL-1a
IL-1b
IL-1ra
IL-2
IL-4
IL-5
IL-6
IL-7
IL-10
IL-12p70
IL-13
IL-16
IL-17
IL-23
IL-27
IFNg
TNFa
IL-5
IL-10
IL-5IL-10
IL-6
IL-1
IL-1ra
0
5
10
15
20
25
0,5 1,5 2,5 3,5 4,5
exp
ress
ion
ra
ot
arg
et/
pM
CCL1
CCL2
CCL3
CCL4
CCL5
CCL11
CCL12
CCL17
CXCL1
CXCL2
CXCL9
CXCL10
CXCL11
CXCL12
CXCL13
CCL2CCL2
CCL2
CCL2
CCL3
CCL12
CCL12
CXCL13CCL5CXCL2CXCL9 CXCL9
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
0,5 1,5 2,5 3,5 4,5
exp
ress
ion
ra
ot
arg
et/
pM
C5a
sICAM-1
TIMP-1
TREM-1
11bGr1 TAMTC-1
CD45+SiHa
C5a
C5a
C5a
TIMP1
C5a
TREM1
0
0,5
1
1,5
2
2,5
0,5 1,5 2,5 3,5 4,5
exp
ress
ion
ra
ot
arg
et/
pM
G-CSF
GM-CSF
M-CSF
IL-3
TC-1 11bGr1 TAMTC-1
CD45+SiHa
G-CSF
IL-3
exp
ress
ãore
lati
vap
op
ula
ção
alvo
/pM
Stone, et al. J Leukoc Biol. 2014 Oct;96(4):619-31.
Dissociadofrações CD45+e CD45-
separadas
Simone Stone
TC-1
p65 NFkBSTAT3
IL-6 G-CSF IL-10
TLR
CD40L
TCR
IL-1
IL-6R G-CSFR IL-10R CD40 IL-1R
TLRL Ag
Sobrevivência, proliferação, inflamaçãoTEM, tolerância
Sobrevivência, proliferação, inflamação,apresentação de antígenos,
resposta de linfócitos T
SINALIZAÇÃO EM CÂNCER E SISTEMA IMUNE
CARACTERIZAÇÃO DO STATUS DE ATIVAÇÃO DE STAT3 E P65 NFKB EM
PACIENTES COM CA DO COLO UTERINOEstudo prospectivoCohorte de 96 pacientes, ICESP, SPPacientes com lesão de alto grau (NIC3) ou câncer invasivoSexualmente ativas, imunocompetentes, não grávidas
Hospital Universitário, USP, Dra. Noely LorenziICESP, Dr. Jesus Carvalho
Sangue periférico
FSC-A
SSC
-A
FSC-W
FSC
-H
CD3
HLA
HLA
SSC
-A
biopsia
FSC-A
SSC
-A
FSC-W
FSC
-H
CD45
SSC
-AH
LA
CD3
HLA
CD3
Renata Rossetti
0
1000
2000
3000
4000
1 2 3 4
NF P
0
5000
10000
15000
20000
25000
30000
1 2 3 4
STAT T
0
500
1000
1500
1 2 3 4
STAT P
0
10000
20000
30000
40000
50000
1 2 3 4
CD3 NF T
0
1000
2000
3000
4000
1 2 3 4
CD3 NF P
0
500
1000
1500
1 2 3 4
STAT P
0
10000
20000
30000
40000
1 2 3 4
APC NF Total
0
2000
4000
6000
8000
1 2 3 4
APC NF P
0
5000
10000
15000
20000
25000
30000
35000
1 2 3 4
APC STAT T
0
500
1000
1500
2000
2500
1 2 3 4
APC STAT P
0
5000
10000
15000
20000
25000
30000
1 2 3 4
CD3 STAT T
0
10000
20000
30000
40000
50000
1 2 3 4
NF total
p65 NFkB p65 NFkB Ser536-P STAT3 STAT3 Tyr705
PBMC
CD3+
CD3-HLA+
MFI
-b
k
R² = 0.8917
R² = 0.9004
0
500
1000
1500
2000
2500
0 1 2 3 4
R² = 0.8944
R² = 0.9935
0
500
1000
1500
2000
0 1 2 3 4
R² = 0.7092
R² = 0.942
0
1000
2000
3000
4000
0 1 2 3 4
CÂNCER CERVICAL CONTROLA A SINALIZAÇÃO DE STAT3 E P65 NFKB
EM LEUCÓCITOS CIRCULANTES
EXPRESSÃO DE STAT3 E P65 PODEM SER MARCADORES DE PROGRESSÃO DE CA COCOLO UTERINO?
É POSSÍVEL UTILIZAR ESSA INFORMAÇÃO PARA DESENHO DE FERRAMENTAS TERAPÊUTICAS?
EM MODELO EXPERIMENTAL, NEUTRALIZAÇÃO DE IL-6 E G-CSF INIBE O CRESCIMENTO TUMORAL
Citometria de fluxo
Western blotting
ab-IL-6N T T
ab-irr ab-G-CSFab-comb.N
P- p65
p65
P- STAT3
STAT3
-Tubulin
MFI
ph
osp
ho
-p6
5sp
len
ocy
tes
MFI
ph
osp
ho
-p6
5M
yelo
id A
PC
s
MFI
ph
osp
ho
-p6
5T
cells
Rel
ativ
e ex
n.
P-S
TAT3
/tu
b
Rel
ativ
e ex
n.
STA
T3/t
ub
Rel
ativ
e ex
n.
P-p
65
/tu
b
Rel
ativ
e ex
np
65
/tu
b
TRATAMENTO COM INIBIDOR FARMACOLÓGICO DE STAT3 INIBE O CRESCIMENTO TUMORAL
Days post tumor cells inoculation
Tum
or
volu
me
(mm
3)
A
B
Gretel Rodriguez
TRATAMENTO COM INIBIDOR DE STAT3 LEVA AO AUMENTO DA EXPRESSÃODE P65 NFKB
MFI
ph
osp
ho
-p6
5sp
len
ocy
tes
MFI
ph
osp
ho
-p6
5m
yelo
id c
ells
MFI
ph
osp
ho
-p6
5T
cells
N T N T NSC
P-STAT3
STAT3
P-p65
p65
-Tubulin
TRATAMENTO COM INIBIDOR DE STAT3 LEVA AO AUMENTO DA PROLIFERAÇÃOANTÍGENO ESPECÍFICA DE LINFÓCITOS T
CD
4 T
cel
l pro
lifer
atio
nre
lati
ve v
alu
esC
D8
T c
ell p
rolif
erat
ion
rela
tive
val
ues
control HPV pep PMA/iono
N Tv Tin N Tv Tin N Tv Tin
N Tv Tin N Tv Tin N Tv Tin
CONCLUSÕES E NOVAS HIPÓTESES DE TRABALHO
LEUCOCITOSETOLERÂNCIA
STAT3P65 NFkB
STAT3P65 NFkB
MØ
MØ
NEUTRALIZAÇÃO
IL-6G-CSF
MEDULAÓSSEA
BAÇO
SUPRESSÃO IMUNOMODULAÇÃO
INIBIÇÃO DE STAT3Treg Th1
CTL
STAT3P65 NFkB
AGRADECIMENTOS
Lepique Lab
Renata RossettiGretel RodriguezKarla Lucia AlvarezSimone StoneCaio Farina SilveiraMarcella CipelliSandra AlvesFlavia SardelaVictor Yamada
ICESP/FM-USP
Luisa VillaLara TerminiGiana MotaBarbara MelloRoger Chammas
FM-USP/ Ginecologia
Edmund BaracatMaricy TaclaNoely LorenziAdhemar Longatto Filho
USP – HU
Paulo MargaridoNoely LorenziKaori Yokochi
http://www.fapesp.br/index.phphttp://www.fapesp.br/index.php