Histologia e seus métodos de estudo

Rosiane Nascimento Alves

Tecidos do corpo órgãos

4 tipos de tecidos fundamentais:

◦ Tec. Epitelial

◦ Tec. Conjuntivo

◦ Tec. Muscular

◦ Tec. Nervoso

Histologia

Constituição:

◦ Células + matriz extracelular (MEC)

Cada tecido:

◦ Células + MEC característicos

Distinção no reconhecimento

Tecidos

Método mais utilizado MO

◦ Feixe de luz atravessa a estrutura

Tecidos e órgãos são espessos

◦ Fixação da amostra, inclusão em parafina, corte

histológico, coloração.

Preparação de tecido para microscopia

Fixação

◦ Evitar autólise e preservar estrutura e composição

◦ Física (congelamento) ou química (formaldeído 4%)

Inclusão

◦ Desidratação em etanol e clareamento em xilol

◦ Inclusão em parafina

Preparação de tecido para microscopia

Bateria de inclusão

Blocos de parafina

Microtomia

◦ Cortes de 4µm de espessura em lâmina de vidro

1µm = 0,001mm

Preparação de tecido para microscopia

Coloração Evidenciar os vários componentes dos tecidos,

células e MEC Corantes: caráter ácido ou básico que formam ligações

eletrostáticas (salinas) com componentes ionizados dos tecidos

Ácido

Básico Básico

Hematoxilina e Eosina (HE) Hematoxilina: corante básico (azul ou violeta)

Liga-se à estruturas basófilas (núcleo) Eosina: corante ácido (rosa)

Liga-se à estruturas acidófilos (citoplasma)

Células intestinas de camundongos

Hematoxilina e Eosina (HE) Aplicações:

Caracterização do tecido Identificação de carcinoma Identificação de infiltrado inflamatório → PATOLOGIA

Células renais humanas

Células renais de carcinoma humano

Hematoxilina e Eosina (HE) Infiltrado Inflamatório

Células hepáticas de camundongo

Hematoxilina e Eosina (HE) Necrose

Células hepáticas de camundongo

Microscópio de luz

Imagem aumentada e com detalhes

Limite de resolução:

◦ A menor distância entre 2 partículas que permite

visualizá-las como 2 objetos separados.

◦ MO: 0,2µm (0,002mm)

◦ MET: 3nm (0,003µm ou 0,00003mm)

Resolução

Contraste de fase

◦ Células e cortes não corados (transparentes)

Outras microscopias

Microscopia convencional

Contraste de fase Contraste diferencial

Reação de Imunohistoquímica (IH)

Infecção por Leishmania sp. Amastigotas extracelulares (A) e intracelulares (B).

Detecção da reação química:

Anti-Leishmania + enzimaSubstrato da enzima PRECIPITADO

MARROM

Reação de Imunofluorescência (IF)Baseada na excitação de átomos de fluorocromo

1. Emissão de luz (fotons) com pequeno (comprimento de onda).

2. Excitação de elétrons, os quais saltam de camada.

3. Estes retornam à sua camada original.

4. Liberação de luz (fotons) em um maior comprimento de onda (visível).

5. Visualização com microscópio de fluorescência. (confocal)

UV(Não

visível)Espectr

o visível

Infecção por Listeria monocitogenes

LaranjaMarcador anti-L. monocitogenes

VerdeFilamentos de actina

AmareloSobreposição das duas marcações:Laranja e verde

Microscopia de Fluorescência (MF)

Microscopia Confocal O espécime é iluminado por um feixe de luz muito estreito A imagem coletada deve passar por um orifício muito

pequenoFocalizar um único plano de cada vez sem deterioração da

imagem• Luz fora do foco é eliminada

• Definição melhorada do objeto

• Localização mais precisa de componentes do espécime

Reunir os vários planos = objeto 3D

Cultura de plasmócitos

AzulDNA

VerdeFimamentos intermediários

VermelhoFilamentos de actina

Microscopia Confocal

Microscopia Confocal

Fases do ciclo celular

Microscopia Eletrônica de Transmissão

Microscopia Eletrônica de Transmissão

Cardiomiócitos de Tilápia tailandesa

Microscopia Eletrônica de Transmissão

Microscopia Eletrônica de Transmissão Marcação citoquímica para detecção enzimática:

Incubação em meio Gormori

-glicerofosfato + Pb(NO3)2 → ↓Pb(PO4)

Fosfatase ácida

Célula renal de rato

Microscopia Eletrônica de TransmissãoN

MIL

N

CE L

LL

L

Microscopia Eletrônica de Varredura Imagens pseudotridimensionais das superfícies de células,

tecidos e órgãos

• Os elétrons não atravessam o espécime

• Os elétrons varrem uma delgada camada de metal aplicada ao espécime e são refletidos pelos átomos do metal

Microscopia Eletrônica de Varredura

Eritrócitos humanos

Microscopia Eletrônica de Varredura

Mucosa respiratória de rato