01 - Prática Histologia 2014 - MICROSCOPIA

FARMCIA 3 Perodo/2014 HISTOLOGIA

Prof Esp.Luciana S. de Mello Cordeiro Teixeira

Mdica Veterinria

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Aula Prtica: 01 e 02

Tema da Aula: O MICROSCPIO E A MICROSCOPIA Data: ........../........../.............

Professora: LUCIANA CORDEIRO

Aluno (a): ................................................................................................................................

Assuntos: Estruturao, manuseio, utilizao e funcionamento do microscpio ptico (MO)

ou microscpio de luz (ML).

Objetivo(s): Entender a importncia da utilizao do microscpio ptico no estudo tecidual

Aprender a usar e familiarizar-se com o microscpio ptico;

Identificar os sistemas de constituio do microscpio;

Conhecer todos componentes inseridos na estrutura do microscpio;

Aprender a funo de cada uma das partes de constituio do microscpio;

Entender o mecanismo geral de funcionamento do microscpio na ampliao da

imagem;

Manusear corretamente o microscpio.

MICROSCPIO DE LUZ

O microscpio ptico (MO), ou microscpio de luz

(ML), um instrumento que permite observar objetos de

pequenas dimenses ou invisveis a olho nu. Fornece uma

imagem consideravelmente aumentada, geralmente

invertida da esquerda para a direta, devido associao de

lentes. constitudo por dois sistemas, um formado por

partes mecnicas e o outro por partes pticas. Cada sistema

engloba uma srie de componentes constituidores do equipamento como um todo.



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SISTEMAS DO MICROSCPIO DE LUZ

Cada um dos sistemas do MO tem finalidade especfica, o Sistema Mecnico se

responsabiliza pela estabilidade e sustentao do equipamento, e o Sistema ptico,

composto por um conjunto de elementos transparentes (lentes biconvexas diferenciadas em

objetivas, situadas prximas ao objeto que se observa, e oculares, prximas ao olho do

observador) que conduzem o feixe luminoso usado na microscopia, que por sua vez tem

como funo o estabelecimento da imagem do objeto estudado.

Como um todo, envolvendo sistemas mecnico e ptico, o MO composto por:

a) Base ou p: sustenta todo o conjunto do MO podendo ser triangular, redondo, oval

ou de outra forma qualquer desde que seja amplo, slido e pesado a fim de suportar essa

sustentao.

b) Brao, Coluna ou Estativa: esta se articula com o p sustentando o tubo do

microscpio onde se encontram as lentes.

c) Mesa ou Platina: uma mesa em miniatura, perpendicular ao grande eixo do

microscpio, que sustenta a lmina e tem orifcio no centro dando passagem para a luz. A

lmina presa por meio de pinas, presilhas ou garras e desloca-se por meio de um

mecanismo de deslizamento, provido de botes que se movimentam chamados charriot.

d) Canho ou tubo: faz a comunicao entre as partes pticas de resoluo e

ampliao, ou seja, entre a objetiva e a ocular.

e) Revlver: pea giratria do tubo que proporciona a fixao e troca de objetivas.

f) Parafuso Macromtrico: permite movimentos mais grosseiros da platina em direo

as objetivas ou vice-versa.

g) Parafuso Micromtrico: permite movimentos menores mais delicados da platina em

direo s objetivas ou vice-versa, para focalizao complementar. Localiza-se prximo ao

parafuso micromtrico ou adaptado sobre ele. Em certos microscpios, s existe um

parafuso em lugar do macro e do micromtrico (roda de enfoque).

h) Parafuso condensador: tambm se situa na poro inferior da coluna, destinando-

se a elevar e abaixar o condensador.

i) Trava: parte mecnica, junto ao brao do microscpio pode existir uma alavanca que

trava o movimento do parafuso macromtrico em uma determinada posio, impedindo a



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movimentao da platina e protegendo as objetivas contra possveis choques na lmina

estudada.

j) Objetivas: situadas sempre prximas do objeto que observado no microscpio,

constituem-se em sistemas centrados de lentes convergentes que formam a imagem, real e

invertida do objeto. Essa imagem que acompanhada pela ocular e tornada definitiva.

k) Oculares: as oculares so formadas por sistemas de lentes cuja posio est sempre

prxima ao olho do observador. Sua finalidade recolher a imagem aumentada, vertical a

direta. Como a imagem que a objetiva fornece invertida, a imagem, final do microscpio

ser tambm invertida. As oculares so formadas por duas lentes, a superior (lente ocular)

e a inferior (lente de campo ou coltica).

Outros elementos so importantes constituintes da parte ptica de um microscpio,

dentre eles pode-se citar:

l) Fonte Luminosa ou de Luz: pode ser distante, como a luz solar ou prxima como a

luz de uma lmpada. Os microscpios modernos, mais aperfeioados, possuem uma

lmpada embutida.

m) Diafragma ou ris: quando for conveniente, pode-se limitar parte dos raios de luz

perifricos que chegam ao objeto. Para tanto, o microscpio dispe de um diafragma que

permite diminuir a abertura de entrada do feixe luminoso.

n) Condensador: possvel tambm aumentar a quantidade de luz que atravessa o

objeto, tanto no caso da luz ser fraca, como no caso em que o aumento da objetiva exige

raios mais intensos. Neste caso, usa-se o condensador como um dispositivo auxiliar que

condensa os raios luminosos.

o) Filtros: os filtros so discos de vidro coloridos ou recobertos com gelatina colorida

que absorvem parte das radiaes luminosas que atingem o objeto, permitindo utilizar faixas

estreitas de comprimento de onda proporcional, para uma dada objetiva, ao comprimento de

onda da luz empregada. O uso dos filtros pode favorecer grandemente a absoro ou

aumentando o poder de resoluo. Alm do mais, usando filtros de cores complementares

possvel aumentar o contraste entre estruturas de formas pouco diferenciadas.



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OBSERVAO MICROSCPICA

No que respeita a microscopia ptica existem dois mtodos fundamentais de observao,

de acordo com o tipo de preparao a observar:

Se a lmina no est corada (exame a fresco): a observao feita com objetivas

secas e iluminao no muito intensa,

Se a lmina est corada: a observao feita com objetivas de imerso, iluminao

mxima e intensa.

COMO UTILIZAR O MICROSCPIO

Sequncia de passos para se efetuar observaes ao microscpio de luz:

1. Retirar a capa do microscpio;

2. Identificar as diferentes partes do microscpio;

3. Ligar o microscpio no boto lateral;

4. Limpar a lmina a ser examinada;

5. Ajustar o Charriot de modo a centrar o orifcio da platina;

6. Colocar a lmina sobre a platina (com a lamnula voltada para cima) e sobre a lente

frontal do condensador;

7. Comear as observaes, utilizando-se a objetiva de menor aumento;

8. Ajustar o condensador;

9. Ajustar as oculares para a obteno de uma nica imagem.

10. Olhar pela ocular, ao mesmo tempo em que se eleva lentamente a platina, girando o

parafuso macromtrico, at que a preparao aparea focalizada. Os ajustes finais de

focalizao devem ser efetuados com o parafuso micromtrico;

11. Se houver necessidade de efetuar observaes com outras objetivas, exceto a

objetiva de 100x (imerso), girar o revlver e encaixar a objetiva adequada. Se a focalizao

no for automtica, faa uso do parafuso micromtrico;



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12. Deslocar a lmina sobre a platina, utilizando toda sua extenso;

13. Ao efetuar a mudana de objetiva, certificar se a visualizao esta sendo mantida;

14. Quando desejar retirar a lmina do microscpio, girar o revlver de modo a deixar a

objetiva panormica em posio de observao. Abaixar a platina girando o parafuso

macromtrico. Remover a lmina com cuidado para que os dedos no toquem as lentes das

objetivas e para que a lmina no toque nas mesmas.

15. Ao terminar: No esquea a lmina no Charriot; desligar a luz e retirar o fio da tomada;

colocar a capa no microscpio; limpar a mesa.

QUALIDADE DA IMAGEM E TERMOS EMPREGADOS NA MICROSCOPIA

Ao se olhar para um espcime usando um microscpio, a qualidade da imagem avaliada

pelas seguintes caractersticas: ampliao, brilho, foco, resoluo e contraste.

Ampliao - produto do poder de amplificao da objetiva multiplicada pelo da

ocular. A ampliao refere-se ao grau de aumento da imagem em relao ao objeto. A

ampliao total obtida com o microscpio ptico consiste no produto da ampliao da

objetiva pela ampliao da ocular.

Brilho - intensidade de luz

ou obscuridade da imagem. A

luminosidade est relacionada ao

sistema de iluminao e pode ser

alterada mudando-se a voltagem

da lmpada e ajustando-se o

condensador e as aberturas do

diafragma ou do furo feito com a agulha.

Imagem de um gro de plen sob boa luminosidade (esquerda) e fraca luminosidade (direita)



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Foco - relacionado com a

distncia focal e pode ser

controlado com os botes de

focalizao, expressa uma imagem

definida e ntida sem apresentar-se

borrada.

Resoluo - capacidade

de formar imagens distintas

(separadas) de dois pontos

situados muito prximos um do

outro, no objeto observado.

Depende essencialmente da

objetiva, ou seja, de sua

abertura numrica (AN) e do

comprimento de onda de luz utilizada.

Contraste - relacionado ao

sistema de iluminao e

pode ser ajustado pela

mudana na intensidade de

luz e da abertura do

diafragma.

Profundidade de campo - distncia vertical, de cima abaixo do plano focal, capaz

de produzir uma imagem aceitvel.

Campo de viso - rea do objeto de estudo que pode ser vista atravs do

microscpio com uma determinada lente objetiva.

Distncia focal - distncia exigida para a lente focalizar a luz.

Ponto focal/foco - ponto onde a luz proveniente da lente converge.

Imagem de um gro de plen no foco (esquerda) e fora de foco ( direita )

Imagem de um gro de plen com boa resoluo (esquerda) e com baixa resoluo (direita)

Imagem de um gro de plen com bom contraste (esquerda) e com contraste ruim ( direita )



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RELATRIO DE AULA PRTICA DE HISTOLOGIA

Data: ........../........../............. N Relatrio: ................

Curso: FARMCIA Srie /Turma (P): ...................... Turno: ............................

Tema da Aula: ........................................................................................................................

Professora: .............................................................................................................................

Aluno(a): ........................................................................................... RA: .............................

EXERCCIOS DE FIXAO

1. Como se calcula o aumento final de um material observado ao

microscpio?

2. O que Poder de Resoluo?

3. Anote o aumento total em cada campo.

Objetiva: 4X Aumento:__________ Objetiva: 10X Aumento:__________

Objetiva: 40X Aumento:__________ Objetiva: 100X Aumento:__________



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4. Na ilustrao abaixo, faa a identificao de cada um dos componentes do

microscpio, e enquanto partes do equipamento, determine a qual sistema (ptico

ou mecnico) cada estrutura apontada se estabelece.



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5. Na tabela que segue abaixo, cite a funo de todos os componentes do

microscpio, indicados numericamente na ilustrao anterior.

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8

2

9

3

10

4

11

5

12

6

13

7

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6. Sobre os componentes do microscpio e suas respectivas funes faa a

palavras cruzadas abaixo.

HORIZONTAL

1. Pea que est localizada na mesa do microscpio e serve para prender a lmina.

2. Parte do microscpio responsvel pelo foco da imagem.

3. Sustenta as objetivas.

4. Parte do microscpio que o sustenta.

5. Controla a intensidade da luz.

VERTICAL

1. Pea do microscpio que movimenta a lmina.

2. Parte do microscpio que movimenta a mesa no sentido vertical.

3. Diz-se de 10x, 40x ou 100x. Responsvel pelo aumento da imagem.

4. Parte do microscpio que est diretamente ligado ao observador

5. PLATINA (parte do microscpio que acomoda a lmina).

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