IB/RC – UNESP UFSCar – Araras

II CURSO DE MONITORAMENTO DA FERMENTAÇÃO ETANÓLICA PERÍODO: 11 a 15 DE FEVEREIRO DE 2008

ATIVIDADES PRÁTICAS

1° Aula Prática – Microscopia e Plaqueamento de Leveduras 1 – OBJETIVO: Proporcionar condições para acompanhar a microbiota (leveduras

e bactérias) do processo industrial de fermentação etanólica; reconhecer uma

contaminação por leveduras;

2 – MATERIAL:

• Tecido para limpeza tipo perfex;

• 3 culturas denominadas A, B e C;

• 4 placas com meio pré-determinados para cultivo de

leveduras;

• Fósforo;

• 4 pipetas esterilizadas;

• Alça de Drigalski;

• Lâmina e lamínula para microscópio;

• Microscópio;

• Solução corante: azul de metileno e eritrosina;

• Tubo de cultura com a diluição para plaqueamento;

• Papel absorvente;

• Becker;

• Bico de Bunsen;

• Frasco para descarte das pipetas;

• Material para assepsia da bancada;

• Caneta de retroprojetor.

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3 – PROCEDIMENTO DE COLETA DE AMOSTRAS NA INDÚSTRIA: Frascos limpos e esterilizados. Coletar sempre pela metade do

volume do frasco considerando as condições da fermentação. Recomenda-se

resfriar o mais rápido possível. Transportar para o laboratório para as análises.

4 – PROCEDIMENTO COM AS AMOSTRAS: 4.1 Exame macroscópico (visual) Sedimentação – agite e deixe decantar por 5 min.

Verificar cor, odor e pH.

4.2 Exame microscópico Preparar um esfregaço e examinar diretamente.

Preparar um esfregaço com os corantes azul de metileno ou

eritrosina.

A partir do exame microscópico pode-se, depois de algum tempo,

trabalhar com mais facilidade na microbiologia.

Para fins de treinamento faremos acompanhamento de três

situações diferentes das amostras apresentadas:

A – Fermentação em cultura pura – Saccharomyces cerevisae.

B – Fermentação contaminada com leveduras selvagens.

C – Fermentação contaminada com leveduras selvagens e bactérias.

Faça um esquema do material observado:

A B C

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4.3 Procedimento para plaqueamento em superfície Homogeneizar o conteúdo dos tubos que estão nas bandejas e

colocar assepticamente 0,1 mL em cada placa, seguindo o esquema abaixo:

Amostra A – Plaquear em meio WLN;

Amostra B – Plaquear em meio WLN com verde de bromocresol, com e sem

adição de actidiona (actidiona deve inibir o crescimento de S.

cerevisae e eventualmente outras leveduras).

Amostra C – Plaquear em meio WLN com verde de bromocresol com os

antibióticos ampicilina e ácido nalidíxico (os antibióticos devem

inibir as bactérias, lembrando que algumas podem apresentar-se

resistentes).

Esparramar homogeneamente sobre a superfície do meio com a

espátula de Drigalski.

Incubar as placas na posição invertida a 28 °C por XX h.

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