MTODOS PARA DIAGNSTICO IMUNOLGICO DE PARASITOSES

AMOSTRA

A amostra a ser colhida para o teste imunolgico depender do stio de infeco do parasita e do tipo de teste utilizado.Ex.: soro, lquor, urina, fezes, tecidos etc.Na maioria dos testes, trabalha-se com diluies (seriadas ou no) das amostras ttulos

REAES DE AGLUTINAOFormao de agregados visveis como resultado da interao de Ac especficos e partculas insolveis que contenham determinantes Ag em sua superfcie.Pode ocorrer em: partculas que apresentem Ag naturais de superfcie (hemcias, bactrias, protozorios) aglutinao direta partculas inertes (ltex) ou com clulas antigenicamente no relacionadas, s quais se adsorvem ou se fixam Ag solveis aglutinao indireta

HemaglutinaoAglutinao do ltex

TESTE DE HEMAGLUTINAOTesta Ac IgG e IgM Hemcias de carneiro ou humanas do grupo O, fixadas com formaldedo ou glutaraldedo, sensibilizadas com o Ag (polissacardicos ou proticos)Suspenso das hemcias em soluo estabilizadora para evitar reaes inespecficasAdio do soro em diluies progressivas

Teste positivo: formao de tapeteTeste negativo: formao de boto

TESTE DE AGLUTINAO DO LTEXUsado na deteco de Ag ou AcPartculas de ltex so esferas de poliestireno que podem ser usadas como suportes na adsoro de protena solvel a Ag polissacardeos

REAO DE FIXAO DO COMPLEMENTOA ligao Ag-Ac promove a fixao do complemento, cujo consumo (in vitro) pode ser empregado para deteco de Ac, Ag ou ambos. O teste realizado em duas etapas:

fixao do complemento: Ag incubado com Ac na presena de uma quantidade definida de complemento. Se Ag e Ac correspondentes estiverem presentes, h ativao da cascata do complemento e haver consumo do complemento adio do revelador da reao: hemcias de carneiro sensibilizadas com hemolisina (Ac anti-hemcia de carneiro obtido em coelhos)

A medida da atividade hemoltica do complemento no sistema indicador permite detectar a presena de Ag ou Ac na mistura inicial e sua quantidade.

1. fixao do complemento2. revelao da reao

TESTE DE IMUNOFLUORESCNCIABaseia-se na capacidade das molculas de Ac se ligarem a fluorocromos sem perder sua reatividade especfica com o Ag.

Fluorocromos: substncias que, quando excitadas com luz UV, absorvem luz de um comprimento de onda menor e, instantaneamente, emitem luz de comprimento de onda maior (fluorescncia).

Teste de Imunofluorescncia Direto: usado geralmente para detectar a presena do Ag em uma amostra clnica. Teste Imunofluorescncia Indireto: usado para detectar a presena, no soro, de Ac especficos.

Imunofluorescncia Indireta (IFI)

IFI positivo para T. cruziIFI para T. gondii: (A) positivo e (B) negativoAB

IF positivo para G. duodenalisAg

TESTE DE ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assayreao Ag-Ac monitorada por medida da atividade enzimtica (peroxidase). leitura visual ou fotomtrica, com substratos coloridos, fluorescentes ou luminescentes.para a peroxidase o substrato o H2O2 e os cromgenos: ortofenilenodiamina, cido 5-amino saliclico, ortotoluidina etc , que sero oxidados originando um produto solvel e colorido.

ELISA Direto: detecta Ag ELISA Indireto: detecta Ac

ELISA indireto

ELISA direto (ELISA sandwich)

Interpretao dos resultados:

leitura visual espectrofotmetro (absorbncia)

PARMETROS SOROLGICOS

SENSIBILIDADE: porcentagem de resultados verdadeiramente positivos em indivduos comprovadamente infectadosESPECIFICIDADE: porcentagem de resultados verdadeiramente negativos em indivduos comprovadamente sadiosEFICINCIA: concordncia dos resultados verdadeiros positivos e negativos em indivduos com e sem infecoVALOR PREDITIVO POSITIVO: probabilidade do resultado positivo ser verdadeiramente positivoVALOR PREDITIVO NEGATIVO: probabilidade do resultado negativo ser verdadeiramente negativo

SENSIBILIDADE (S) = VP / total infectados ESPECIFICIDADE (E) = VN / total sadiosEFICINCIA (Ef) = VP + VN / total indivduosVALOR PREDITIVO POSITIVO (VPP) = VP / total resultados positivosVALOR PREDITIVO NEGATIVO (VPN) = VN / total resultados negativos

indivduosresultadoinfectadosno infectadostotalpositivoverdadeiro positivo(VP)falso positivo(FP)VP + FPnegativofalso negativo(FN)verdadeiro negativo(VN)FN + VNtotalVP + FNFP + VNVP + FP+ FN + VN

Variao da sensibilidade e especificidade do teste de acordo com o cut-off

Influncia da prevalncia nos valores preditivos

Variao dos valores preditivos dependendo da prevalncia

exerccios