Amplificação e Clonagem: NovidadesnaRotinadaMolecular curso_mol/PCR_Clonagem.pdf · Thermus...
-
Upload
trinhthien -
Category
Documents
-
view
217 -
download
0
Transcript of Amplificação e Clonagem: NovidadesnaRotinadaMolecular curso_mol/PCR_Clonagem.pdf · Thermus...
Jayme Nunes de Souza Filho
Amplificação e Clonagem:Novidades na Rotina da Molecular
Desenho e Síntese de Primers
• Escala de síntese de 25 nmol ( 3 ODs): R$ 2,10 / base• Oligos purificados por PAGE ou HPLC• Oligos antisense (S-oligos)• Oligos fluorescentes marcados na 5’, 3’ ou biotinilados• Sondas duplamente marcadas (fluoróforo e quencher)• Moléculas de RNA (RNAi)
• Todos os oligos são certificados por espectrometria de massa
www.idtdna.com
Thermus aquaticusTaq DNA Polymerase
- Enzima termoestável (94 kDa). - Replica DNA à 74°C e exibe uma meia vida de 40 min à 95°C.
PCR Master Mix
GoTaq DNA Polymerase
GoTaq DNA Polymerase
GoTaq® Green Master Mix
• GoTaq Green Master Mix (2X) contains: – GoTaq– dNTPs– MgCl2
• Nuclease-Free Water
The performance of GoTaq DNA Polymerase in a Master Mix format.
Added convenience for Direct-To-Gel Applications.
GoTaqGreenMaster
Mix
Primers,Template,& Water
Purificação de Produtos de PCR
Enzimas e Sistemas para RT-PCR
AMV Reverse Transcriptase M-MLV Reverse Transcriptase
ImProm II Reverse Transcriptase
Access RT-PCR - One-Step AccessQuick RT-PCR - One-Step
Rnasin Ribonuclease Inhibitor
ImProm II Reverse Transcriptase
Enzimas e Sistemas para RT-PCR
AMV Reverse Transcriptase M-MLV Reverse Transcriptase
ImProm II Reverse Transcriptase
Access RT-PCR - One-Step AccessQuick RT-PCR - One-Step
Rnasin Ribonuclease Inhibitor
Marcadores Moleculares de DNA
Clonagem de Produtos de PCR (T-Vectors)
pGEM-T
Plexor™ System for Quantitative Amplification - qPCR
How does Plexor™ Work ? Use of IsoG & IsoC in Real-Time
• Oligo primer tagged at the 5’ end with novel base (iso-dC + Fluorophore as 6-FAM, JOE, HEX, ROX or other choice)
• Amplification master mix contains standard dNTPs and a dabcyl-labeled complementary iso-dGTP
• Dabcyl-iso-dGTP incorporated opposite iso-dC and quenches fluorescence
Real Time PCR
• Existing methods– gain of fluorescence
Threshold
Fluor
esce
nce
Cycle
Threshold
Fluor
esce
nce
Cycle
Threshold
Fluor
esce
nce
Cycle
Threshold
Fluor
esce
nce
Cycle
• Plexor™ Method– quenching of fluorescence
Wizard SV total RNA Isolation
PolyAtracT mRNA Isolation
www.promega.com www.idtdna.comwww.prodimol.com.br
TeleVendas: [email protected]@prodimol.com.brBioEstoque