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5/9/2018 as Em Alimentos - slidepdf.com

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PATULINAPATULINA

Acadêmicos:Amandha Prado Clarissa LiraHannae Freitas Naiane GomesRafaella Xavier Thieres Andriolle



INTRODUÇÃOINTRODUÇÃO

Micotoxinasy Mykes : Fungo.y Toxicum : Veneno ou toxina.

As micotoxinas são metabolitos secundários

com elevada toxicidade.

A contaminação de alimentos com

micotoxinas pode dever-se à influência de

fatores ambientais e biológicos.



PATULINAPATULINA

A patulina uma micotoxina termo-resistente também chamada clavicina,

claviformina ou expansina.

y Aspergillus clavatus

y Penicillium espansum

y Byssochlamys nivea



Apresenta estabilidade em ácidos diluídose é resistente à temperatura de 125ºC na

faixa de pH entre 3,5 e 5,5.

A patulina causa diversos efeitos tóxicos:

teratogênico e cancerígeno.



Ocorrência:

y maçãsy uvasy cerejasy perasy morangosy

framboesasy pêssegos



HistóricoHistórico



y Aspergillus clavatus, Penicillium espansum e Byssochlamysnivea

� 1941 - ação como antibiótico e posteriormente por suas

propriedades fitotóxicas e carcinogênicas;

� 1953, estudos sobre o possível uso terapêutico paracombater enfermidades humanas mas observou-se que estamicotoxina era tóxica para ser utilizada como agenteantimicrobiano;

� 1961- carcinogenicidade em bovinos, suínos, coelhos eratos;

� Distúrbios respiratórios e motor.

HistóricoHistórico



y Efeito tóxico é caracterizado por:

- distúrbios respiratório e motor,- espasmos,- asfixia,- hemorragia no pulmão e cérebro- Além disso, tem ação teratogênica

y Esta micotoxina tem sido detectada em frutas, sucos,vegetais e outros cereais mas a maior fonte decontaminação são as maçãs e produtos derivados da maçã.



Exposição à PatulinaExposição à Patulina



� Empregada como indicador de qualidade nos frutos e produtos demaçã (MOSS, 1996)

� Limite máximo permitido de até 50 �g/L, recomendado pelaOrganização Mundial de Saúde (OUGH; CORISON, 1980)

� Se desenvolvem nas regiões da fruta que sofreram danos porpragas ou ação mecânica, formando focos de apodrecimento

� Estudos não provam conclusivamente os efeitos da patulina na

saúde humana

Exposição à PatulinaExposição à Patulina



y O comércio interno de suco de fruta é em torno de 5 a 7 litrosanuais por habitante

y Insignificante quando comparado com a Europa e os Estados Unidos,onde o consumo de sucos de fruta chega a 30 litros anuais porhabitante

y Consumo diário de suco de maçã no Brasil por pessoa é de 0,3 g(GEMS, 2003)

y Ingestão Diária Tolerável Provisória (PTDI) = 0,4 Qg/kg p.c./dia(JECFA, 1995)

y È o segundo suco mais consumido no mundo



y A atividade biológica da patulina é instável em meioalcalino porém apresenta estabilidade em ácidosdiluídos, é resistente à temperatura de 125ºC

y A Patulina está associada a danos no tratogastrointestinal, incluindo úlceras einflamação do estômago e intestino

y Sintomas agudos podem incluiragitação, convulsões, congestão

pulmonar, edema, ulceração,degeneração de células epiteliais

e danos nos rins



ToxicocinéticaToxicocinética

eeToxicodinâmicaToxicodinâmica



y Passagem através da membrana

y Ingestão de alimentos contaminados

y Ocorre no trato gastrointestinal

y Fígado, órgãos reprodutores e nosrins

AbsorçãoAbsorção



y São transportadas pelo sangue

y Distribuem nos órgãos, sistemas e todosos tecidos

DistribuiçãoDistribuição



y Fígado é o órgão mais lesado resultando numa série de danos aometabolismo das proteínas, carboidratos e lipídeos.

BiotransformaçãoBiotransformação



y Núcleo do hepatócito inibição daenzima RNA- polimerase, inibindo

a síntese protéica

y Mitocôndria ocorre aumentopermeabilidade, interrompendo otransporte de elétrons inibindo arespiração celular.

y No retículo endoplasmático ocorrea degranulação com ruptura dospolissomos inibindo muitasfunções metabólicas, comosíntese de proteínas, indução de

enzimas e interferindo nacoagulação sanguínea pelainibição de fatores.



y Ocorre elevada concentraçãodessa toxina:

y Tecido Adiposo

y Fígado

y Órgãos reprodutores

y Rins

ArmazenamentoArmazenamento



y Sete dias após a ingestão da toxina ainda é recuperaday É excretado cerca de 87%

y Sendo 49% nas fezes

ExcreçãoExcreção

y 36% na urina

y 1 a 2% pela via respiratóriana forma de dióxido decarbono



ToxicodinâmicaToxicodinâmica

Redução Ig ,enzimas, co-fatores, etcRedução Ig ,enzimas, co-fatores, etc

DNA ou RNADNA ou RNA

Redução síntese proteínas e metabólitos

MicotoxinaMicotoxina

Membrana celular



Biossíntese de patulinaBiossíntese de patulina1 acetil-Coenzima A e 3 malonil-Coenzima A

ácido 6-metilsalicilico sintetase (6-MAS sintetase)

ácido 6-metilsalicilico (6-MAS)

6-MAS descarboxilase

m-cresol

m-cresol hidrolase

álcool m-hidroxibenzil

álcool m-hidroxibenzil desidrogenase

gentisaldeido

m-hidroxibenzaldehido álcool gentisil

IsopoxidonaFilostina

Neopatilina

E-ascladiolPatulina



ANALISES CLÍNICASANALISES CLÍNICASTOXICOLÓGICASTOXICOLÓGICAS



ANALISES CLÍNICASANALISES CLÍNICAS

TOXICOLÓGICASTOXICOLÓGICAS

y Métodos de detecção de patulina:

1. Cromatografia em camada delgada (CCD)2. Cromatografia líquida de alta eficiência

(CLAE)3. Cromatografia gasosa (CG)4. Eletroforese capilar (EC).



y Etapa de preparação de amostras:

1. Extração líquido-líquido (ELL):Partição da amostra entre duas fases

imiscíveis, orgânica e aquosa.

2. Extração em fase sólida (EFS):Separa amostras a serem analisadas

usando uma fase sólida e uma líquida



Cromatografia em camada delgada Cromatografia em camada delgada (CCD)(CCD)

y Tipo adsorção

y Fase móvel: soluto

y Fase estacionária: sólido altamente polar

y A distância que cada um corre égeralmente expressa em valor de Rf (fatorde retenção).



y Visualização:1. Método não-destrutivo: utiliza lâmpada

de UV.2. Método destrutivo: utiliza um reagente

apropriado que produz uma corcaracterística.

y A análise de cromatografia em camada

delgada nos permite obter um perfil("fingerprint") da amostra.



Aplicação na placaAplicação na placa Desenvolvimento: cuba

Visualização

Revelação



Cromatografia líquida de alta Cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE ou HPLC)eficiência (CLAE ou HPLC)

y Fase móvel: líquida

y Fase estacionária: dividida

y Para ter um fluxo razoável, opera a pressõeselevadas

y Utiliza-se colunas metálicas e fase móvel

pressurizada, obtida com o auxílio de bombasde alta pressão

y Os detectores mais empregados são osfotômetros no UV e os espectrofotômetros

UV/VIS



Cromatografia líquida de alta Cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE ou HPLC)eficiência (CLAE ou HPLC)

Instrumentação básica do métodode HPLC



Cromatografia gasosa (CG)Cromatografia gasosa (CG)

y Principio básico: técnica de separação eanálise de misturas por interação dos seuscomponentes entre uma FASE

ESTACIONÁRIA e uma FASE MÓVEL.



y A amostra éinjetada e

arrastada pelafase móvel atravésda coluna quecontem a faseestacionaria, ondeocorre aseparação damistura. Apósserem separadas

as amostrar vãopara um detectorque vai quantificaro material.



Instrumentalização:Instrumentalização:



Características da fase móvel, ouCaracterísticas da fase móvel, ougás de arraste: gás de arraste:

y Inerte: apenas transporta a amostra pelacoluna.

y Puro: isenta de impurezas que possamcontaminar a amostra.

y Compatível com o detector.



Características da fase estacionaria: Características da fase estacionaria:

y Quimicamente inerte a amostra.

y Volatilidade baixa.

y Estabilidade térmica.

y Pouco viscosa.

y Pura.

y Características próximas das dos solutos a seremseparados.

y Seletividade deve ter um bom solvente diferencial doscomponentes da amostra.

y

As FE mais usadas: silicones, poliglicóis e poliésteres.



Eletroforese CapilarEletroforese Capilar

y Principio básico: Transporte em soluçãoeletrolítica de compostos carregadoseletricamente sob a influência de um campoelétrico, no qual a separação entre dois solutosocorre de acordo com as diferenças entre suasmobidades eletroforéticas.

y Há diversos modos de separação: Cromatografiaeletrocinética micelar (MEKC),IsotacoforeseCapilar (CITP),Focalização Isoelétrica Capilar

(CIEF), Eletroforese Capilar em Gel (CGE),Eletrocromatografia Capilar (CEC), no entanto omais utilizado é o Eletroforese Capilar de Zona(CZE).



Instrumentalização: Instrumentalização:



y Na eletroforese de zona, a migração dasespécies ocorre pela combinação dos efeitos

dos fluxos eletroosmótico e eletroforético quesão gerados quando o campo elétrico éaplicado.

y Ao passar uma solução alcalina através do

capilar, adquire uma carga negativa.y Uma camada de contra-íons é formada

próxima à parede (eletroneutralidade)

y

Dupla camada elétrica que possui umacamada compacta (fixa) e outra difusa(móvel).



y O fluxo eletroforético é direcionado aoeletrodo de carga contrária ao analito.

y Todas as espécies presentes do analitoserão direcionadas para o sistema dedetecção pelo fluxo eletroosmótico.

y A separação:mobilidades iônicas dos analitos =

densidades de carga.



y Tempo de migração.

y Introdução da amostra capilar: Hidrodinâmica eeletrocinética

y É possível obter picos com alta definição (resolução),pois os efeitos de alargamento dos picos são mínimos.

y

não existe de fase estacionária diminuindo o efeito dealargamento, causado pela transferência de massaentre as fases estacionária e móvel.

y O fluxo eletroosmótico é gerado uniformemente aolongo de todo o capilar e migra de forma segmentada.

y A resolução do capilar depende como em outrastécnicas cromatográficas, do número de pratosteóricos



Considerações finais:Considerações finais:

y Perigo inerente de contaminação pelatoxina.

y Pesquisas quanto as característicasbiológicas e químicas da patulinapossibilitou o avanço em métodos dequantificação, prevenção e tratamento.

y O estudo da patulina é de grandeinteresse para a segurança alimentar.



R EFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICASR EFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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y SANT¶ANA, A.S.; ROSENTHAL, A.; MASSAGUER, P.R. The fate of patulin in apple juiceprocessing: A review. Food Research International 41: 441-453; 2008.



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