CULTURA E TESTE DE CULTURA E TESTE DE SENSIBILIDADE: TRADIÇÃO X SENSIBILIDADE: TRADIÇÃO X

AUTOMAÇÃOAUTOMAÇÃO

III Encontro Nacional de TuberculoseIII Encontro Nacional de TuberculoseSalvador, 18 a 21 de junho de 2008Salvador, 18 a 21 de junho de 2008

Maria Alice da Silva TellesMaria Alice da Silva Telles

PROFICIÊNCIAPROFICIÊNCIA

Teste de sensibilidadeTeste de sensibilidade

PROFICIÊNCIA DA EQUIPE Cultura de micobactérias e

identificação Critérios de resistência

PADRONIZAÇÃO E REALIZAÇÃO DOS PROCEDIMENTOS

A padronização é difícil e os procedimentos são complexos

FATORES QUE PODEM INFLUIR NO RESULTADO DO TESTE

POTÊNCIA E ESTABILIDADE DA DROGA Cálculo da potência Condições de armazenamento

Diluição correta Inativação pelo calor (coagulação) Prazo de validade

ATIVIDADE DA DROGA Alteração da atividade de determinadas

drogas quando incorporada em diferentes meios de cultura

FATORES QUE PODEM INFLUIR NO RESULTADO DO TESTE

TIPO DO MEIO DE CULTURA (sólido, líquido) pH do meio Metodologia usada para o teste Padronização do inóculo QUALIDADE DA CULTURA ORIGINAL Crescimento,idade da cultura, meio de

cultura LEITURA E RELATO DOS RESULTADOS Tempo de incubação Leitura – contagem das colônias

interpretação dos resultados – critério de resistência

FATORES QUE PODEM INFLUIR NO RESULTADO DO TESTE

Teste de sensibilidadeTeste de sensibilidade

Tradicional e automatizadoTradicional e automatizado

MÉTODOS CONVENCIONAIS

LOWENSTEIN JENSEN (LJ)

LIMITAÇÕES

PREPARO DO MEIO LJ, DAS SOLUÇÕES ESTOQUE DE DROGAS

DILUIÇÕES DA DROGA PARA INCORPORAÇÃO NO MEIO LJ

COAGULAÇÃO DO MEIO COM AS DROGAS - POTÊNCIA DA DROGA

MÉTODOS CONVENCIONAISLOWENSTEIN JENSEN (LJ)

LIMITAÇÕES

LEITURA – INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS POR TÉCNICO EXPERIENTE (SUBJETIVO)

MÉTODO DAS PROPORÇÕES –NECESSIDADE DE FRASCOS GRANDES E SEMEADURA DE DUAS DILUIÇÕES PARA CONTAGEM DAS COLÔNIAS O QUE limita a capacidade resolutiva do laboratório (limita o número de testes realizados por mês)

TEMPO DE INCUBAÇÃO: 28 e 42 dias

MÉTODO AUTOMATIZADO

Princípio – Baseado no método das proporções

Monitoramento contínuo do crescimento Redução do tempo do exame TEMPO DE INCUBAÇÃO - 5 A 12 DIAS (SIRE) E 7 A 21 DIAS (PZA)

LISTAGEM COM INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS

Controle maior dos fatores que influenciam a qualidade do teste

MÉTODO AUTOMATIZADO

VANTAGENS CONTROLE DE QUALIDADE DOS MEIOS, DAS

DROGAS E DO ENRIQUECIMENTO

A DROGA É LIOFILIZADA NA QUANTIDADE ADEQUADA PARA UM LOTE DE 40 TESTES

A DILUIÇÃO DAS DROGAS É FEITA COM ÁGUA DESTILADA NO MOMENTO DO USO - PADRONIZADA

Validação do método Validação do método automatizado no Brasilautomatizado no Brasil

Giampaglia CMS, Martins MC, Vieira GBO, Vinhas AS, Telles MAS, Palaci M, Marsico AG, Hadad DJ, Mello FCQ, Fonseca LS, Kritski A. Multicentre evaluation of an automated BACTEC 960 system for susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. Int J Tuberc Lung Dis 11(9):986-991, 2007.

VALIDAÇÃO DO MÉTODO BACTEC MGIT960 NO BRASIL

ESTUDO COMPARATIVO EM 3 LABORATÓRIOS USANDO AS MESMAS CEPAS EM ESQUEMA TRIPLO CEGO

INSTITUTO ADOLFO LUTZ – SÃO PAULO RAZÃO DA RESISTÊNCIA x MGIT 960 UNIVERSIDADE FEDERAL DO ESPÍRITO SANTO BACTEC 460 x MGIT 960 UNIVERSIDADE ESTADUAL DO RIO DE JANEIRO MÉTODO DAS PROPORÇÕES x MGIT 960

VALIDAÇÃO DO MÉTODO BACTEC MGIT960 NO BRASIL

Comparação dos resultados das cepas Sensíveis e Resistentes (Método PADRÃO* e MGIT960)

*MÉTODO USADO NOS LABORATÓRIOS ONDE FORAM REALIZADOS OS ESTUDOS

S I R E TOTAL MÉTODO RESULTADO SEN RES SEN RES SEN RES SEN RES

PADRÃO CONCORDANTE 64 51 65 55 64 53 65 47 464 DI SCORDANTE 1

-RR

10 5-RR

3-460 2-MP

0 1 -460

1 -RR

2 1-RR

1-MP

0 4-460

19

MGI T960 CONCORDANTE 65 60 64 55 65 54 65 50 478 DI SCORDANTE 0 1 1 1 0 1 0 1 5

TOTAL 65 61 65 56 65 55 65 51 483

INCUBAÇÃO DOS TESTES NO EQUIPAMENTO

Leitura única do

código de barras

para o conjunto

de tubos do TS

REMOÇÃO DO TESTE FINALIZADO

+ !O SISTEMA INDICA QUE O TESTE FOI FINALIZADO

TS FINALIZADO

SEM ERRO

TS FINALIZADO

DETECÇÃO ERRO

EMISSÃO DE RELATÓRIO COM INTERPRETAÇÃO RESULTADOS

(SENSÍVEL-S, RESISTENTE-R, ERRO)

E200

0

10

2030

40

50

MGIT

RR

TEMPO DE LIBERAÇÃO DOS RESULTADOS DOS TESTES DE SENSIBILIDADE PARA M.

tuberculosis LABORATÓRIO DE MICOBACTÉRIAS DO INSTITUTO ADOLFO LUTZ

2004 E 2005

%

N0 D

E C

EPA

S C

OM

RESU

LTA

DO

S L

IBER

AD

OS

TEMPO EM DIAS DESDE O RECEBIMENTO ATÉ A LIBERAÇÃO DO RESULTADO

CULTURACULTURA

MÉTODOS CONVENCIONAISLOWENSTEIN JENSEN (LJ)

VANTAGENS

CUSTO BAIXO – MAIS ACESSÍVEL – R$ 5,00

Menos contaminação

Visualização do aspecto da colônia

MÉTODO AUTOMATIZADOMÉTODO AUTOMATIZADOdiferencialdiferencial

Redução do tempoRedução do tempo

Maior positividade – incremento de Maior positividade – incremento de 20 a 30%20 a 30%

+

MÉTODO AUTOMATIZADO

LIMITAÇÕES

CUSTO DO MEIO É ALTO Cultura meio líquido manual – R$ 13 a 15,00 Cultura automatizada – R$ 19 a 25,00

MEIO LÍQUIDO: POSSÍVEL CONTAMINAÇÃO MAIOR

Não visualiza a colônia

CUSTO EFETIVIDADECUSTO EFETIVIDADE

CUSTO (efetividade??)CUSTO (efetividade??)

Custo envolve :Custo envolve : Infra-estrutura do laboratório (água, luz, equipamentos, Infra-estrutura do laboratório (água, luz, equipamentos,

limpeza, biossegurança, etc)limpeza, biossegurança, etc) Horas de trabalho (salário)Horas de trabalho (salário) Categoria profissional (salário)Categoria profissional (salário) Material do testeMaterial do teste

Efetividade envolve:Efetividade envolve: Agilidade do resultadoAgilidade do resultado Introdução da terapia correta o mais cedo possívelIntrodução da terapia correta o mais cedo possível Redução de transmissãoRedução de transmissão Redução de resistência (transmissão de resistência)Redução de resistência (transmissão de resistência) Redução de tempo de internaçãoRedução de tempo de internação Agilização da curaAgilização da cura Evitar a morteEvitar a morte

CUSTOSCUSTOS

Meio sólidoMeio sólido

•Cultura - Cultura - R$ 5,00R$ 5,00

•Teste de Teste de sensibilidadesensibilidade

R$ 60,00R$ 60,00

Meio líquidoMeio líquido

•Cultura manualCultura manualR$ R$

13,00 – 15,0013,00 – 15,00 •AutomatizadaAutomatizada

R$ R$ 19,00 – 25,0019,00 – 25,00

•TS automatizadoTS automatizadoR$ 200,00R$ 200,00

TEMPOTEMPO

SÓLIDOSÓLIDO

CULTURACULTURA 15 a 60 dias15 a 60 dias

TSTS 30 a 42 dias30 a 42 dias

AUTOMATIZADOAUTOMATIZADO

CULTURACULTURA 8 a 42 dias8 a 42 dias

TSTS 5 a 13 dias5 a 13 dias

TB or not TB???TB or not TB???

Fator corda – baciloscopiaFator corda – baciloscopia

+ + indicativo de TBindicativo de TB

atípico atípico indicativo de MNTindicativo de MNT PNB – ácido p-nitrobenzóicoPNB – ácido p-nitrobenzóico

negativo negativo TBTB

positivopositivo MNTMNT

Monteiro PHT, Martins MC, Ueki SMY, Giampaglia CMS, Telles MAS.Cord Monteiro PHT, Martins MC, Ueki SMY, Giampaglia CMS, Telles MAS.Cord formation and colony morphology for the presumptive identification of formation and colony morphology for the presumptive identification of Mycobacterium tuberculosis complex. Brazilian Journal of Microbiology Mycobacterium tuberculosis complex. Brazilian Journal of Microbiology (2003) 34: 171-174(2003) 34: 171-174

PublicaçõesPublicações

Giampaglia CMS, Martins MC, Inumaru VTG, Butuem IV, Telles MAS. Evaluation of a rapid differentiation test for the Mycobacterium tuberculosis complex by selective inhibition with –nitrobenzoic acid and thiophene-2-carboxylic acid hydrazide. Int J Tuberc Lung Dis 9(2):206–209, 2005.

Giampaglia CMS, Martins MC,Chimara E, Oliveira RS, Vieira GBO, Marsico AG, Mello FCQ, Fonseca LS, Kritski A, Telles MAS. Differentiation of Mycobacterium tuberculosis from other mycobacteria with –nitrobenzoic acid using MGIT960. Int J Tuberc Lung Dis 11(7):803-807, 2007.