CULTURA E TESTE DE CULTURA E TESTE DE SENSIBILIDADE: TRADIÇÃO X SENSIBILIDADE: TRADIÇÃO X
AUTOMAÇÃOAUTOMAÇÃO
III Encontro Nacional de TuberculoseIII Encontro Nacional de TuberculoseSalvador, 18 a 21 de junho de 2008Salvador, 18 a 21 de junho de 2008
Maria Alice da Silva TellesMaria Alice da Silva Telles
PROFICIÊNCIAPROFICIÊNCIA
Teste de sensibilidadeTeste de sensibilidade
PROFICIÊNCIA DA EQUIPE Cultura de micobactérias e
identificação Critérios de resistência
PADRONIZAÇÃO E REALIZAÇÃO DOS PROCEDIMENTOS
A padronização é difícil e os procedimentos são complexos
FATORES QUE PODEM INFLUIR NO RESULTADO DO TESTE
POTÊNCIA E ESTABILIDADE DA DROGA Cálculo da potência Condições de armazenamento
Diluição correta Inativação pelo calor (coagulação) Prazo de validade
ATIVIDADE DA DROGA Alteração da atividade de determinadas
drogas quando incorporada em diferentes meios de cultura
FATORES QUE PODEM INFLUIR NO RESULTADO DO TESTE
TIPO DO MEIO DE CULTURA (sólido, líquido) pH do meio Metodologia usada para o teste Padronização do inóculo QUALIDADE DA CULTURA ORIGINAL Crescimento,idade da cultura, meio de
cultura LEITURA E RELATO DOS RESULTADOS Tempo de incubação Leitura – contagem das colônias
interpretação dos resultados – critério de resistência
FATORES QUE PODEM INFLUIR NO RESULTADO DO TESTE
Teste de sensibilidadeTeste de sensibilidade
Tradicional e automatizadoTradicional e automatizado
MÉTODOS CONVENCIONAIS
LOWENSTEIN JENSEN (LJ)
LIMITAÇÕES
PREPARO DO MEIO LJ, DAS SOLUÇÕES ESTOQUE DE DROGAS
DILUIÇÕES DA DROGA PARA INCORPORAÇÃO NO MEIO LJ
COAGULAÇÃO DO MEIO COM AS DROGAS - POTÊNCIA DA DROGA
MÉTODOS CONVENCIONAISLOWENSTEIN JENSEN (LJ)
LIMITAÇÕES
LEITURA – INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS POR TÉCNICO EXPERIENTE (SUBJETIVO)
MÉTODO DAS PROPORÇÕES –NECESSIDADE DE FRASCOS GRANDES E SEMEADURA DE DUAS DILUIÇÕES PARA CONTAGEM DAS COLÔNIAS O QUE limita a capacidade resolutiva do laboratório (limita o número de testes realizados por mês)
TEMPO DE INCUBAÇÃO: 28 e 42 dias
MÉTODO AUTOMATIZADO
Princípio – Baseado no método das proporções
Monitoramento contínuo do crescimento Redução do tempo do exame TEMPO DE INCUBAÇÃO - 5 A 12 DIAS (SIRE) E 7 A 21 DIAS (PZA)
LISTAGEM COM INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS
Controle maior dos fatores que influenciam a qualidade do teste
MÉTODO AUTOMATIZADO
VANTAGENS CONTROLE DE QUALIDADE DOS MEIOS, DAS
DROGAS E DO ENRIQUECIMENTO
A DROGA É LIOFILIZADA NA QUANTIDADE ADEQUADA PARA UM LOTE DE 40 TESTES
A DILUIÇÃO DAS DROGAS É FEITA COM ÁGUA DESTILADA NO MOMENTO DO USO - PADRONIZADA
Validação do método Validação do método automatizado no Brasilautomatizado no Brasil
Giampaglia CMS, Martins MC, Vieira GBO, Vinhas AS, Telles MAS, Palaci M, Marsico AG, Hadad DJ, Mello FCQ, Fonseca LS, Kritski A. Multicentre evaluation of an automated BACTEC 960 system for susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. Int J Tuberc Lung Dis 11(9):986-991, 2007.
VALIDAÇÃO DO MÉTODO BACTEC MGIT960 NO BRASIL
ESTUDO COMPARATIVO EM 3 LABORATÓRIOS USANDO AS MESMAS CEPAS EM ESQUEMA TRIPLO CEGO
INSTITUTO ADOLFO LUTZ – SÃO PAULO RAZÃO DA RESISTÊNCIA x MGIT 960 UNIVERSIDADE FEDERAL DO ESPÍRITO SANTO BACTEC 460 x MGIT 960 UNIVERSIDADE ESTADUAL DO RIO DE JANEIRO MÉTODO DAS PROPORÇÕES x MGIT 960
VALIDAÇÃO DO MÉTODO BACTEC MGIT960 NO BRASIL
Comparação dos resultados das cepas Sensíveis e Resistentes (Método PADRÃO* e MGIT960)
*MÉTODO USADO NOS LABORATÓRIOS ONDE FORAM REALIZADOS OS ESTUDOS
S I R E TOTAL MÉTODO RESULTADO SEN RES SEN RES SEN RES SEN RES
PADRÃO CONCORDANTE 64 51 65 55 64 53 65 47 464 DI SCORDANTE 1
-RR
10 5-RR
3-460 2-MP
0 1 -460
1 -RR
2 1-RR
1-MP
0 4-460
19
MGI T960 CONCORDANTE 65 60 64 55 65 54 65 50 478 DI SCORDANTE 0 1 1 1 0 1 0 1 5
TOTAL 65 61 65 56 65 55 65 51 483
INCUBAÇÃO DOS TESTES NO EQUIPAMENTO
Leitura única do
código de barras
para o conjunto
de tubos do TS
REMOÇÃO DO TESTE FINALIZADO
+ !O SISTEMA INDICA QUE O TESTE FOI FINALIZADO
TS FINALIZADO
SEM ERRO
TS FINALIZADO
DETECÇÃO ERRO
EMISSÃO DE RELATÓRIO COM INTERPRETAÇÃO RESULTADOS
(SENSÍVEL-S, RESISTENTE-R, ERRO)
E200
0
10
2030
40
50
MGIT
RR
TEMPO DE LIBERAÇÃO DOS RESULTADOS DOS TESTES DE SENSIBILIDADE PARA M.
tuberculosis LABORATÓRIO DE MICOBACTÉRIAS DO INSTITUTO ADOLFO LUTZ
2004 E 2005
%
N0 D
E C
EPA
S C
OM
RESU
LTA
DO
S L
IBER
AD
OS
TEMPO EM DIAS DESDE O RECEBIMENTO ATÉ A LIBERAÇÃO DO RESULTADO
CULTURACULTURA
MÉTODOS CONVENCIONAISLOWENSTEIN JENSEN (LJ)
VANTAGENS
CUSTO BAIXO – MAIS ACESSÍVEL – R$ 5,00
Menos contaminação
Visualização do aspecto da colônia
MÉTODO AUTOMATIZADOMÉTODO AUTOMATIZADOdiferencialdiferencial
Redução do tempoRedução do tempo
Maior positividade – incremento de Maior positividade – incremento de 20 a 30%20 a 30%
+
MÉTODO AUTOMATIZADO
LIMITAÇÕES
CUSTO DO MEIO É ALTO Cultura meio líquido manual – R$ 13 a 15,00 Cultura automatizada – R$ 19 a 25,00
MEIO LÍQUIDO: POSSÍVEL CONTAMINAÇÃO MAIOR
Não visualiza a colônia
CUSTO EFETIVIDADECUSTO EFETIVIDADE
CUSTO (efetividade??)CUSTO (efetividade??)
Custo envolve :Custo envolve : Infra-estrutura do laboratório (água, luz, equipamentos, Infra-estrutura do laboratório (água, luz, equipamentos,
limpeza, biossegurança, etc)limpeza, biossegurança, etc) Horas de trabalho (salário)Horas de trabalho (salário) Categoria profissional (salário)Categoria profissional (salário) Material do testeMaterial do teste
Efetividade envolve:Efetividade envolve: Agilidade do resultadoAgilidade do resultado Introdução da terapia correta o mais cedo possívelIntrodução da terapia correta o mais cedo possível Redução de transmissãoRedução de transmissão Redução de resistência (transmissão de resistência)Redução de resistência (transmissão de resistência) Redução de tempo de internaçãoRedução de tempo de internação Agilização da curaAgilização da cura Evitar a morteEvitar a morte
CUSTOSCUSTOS
Meio sólidoMeio sólido
•Cultura - Cultura - R$ 5,00R$ 5,00
•Teste de Teste de sensibilidadesensibilidade
R$ 60,00R$ 60,00
Meio líquidoMeio líquido
•Cultura manualCultura manualR$ R$
13,00 – 15,0013,00 – 15,00 •AutomatizadaAutomatizada
R$ R$ 19,00 – 25,0019,00 – 25,00
•TS automatizadoTS automatizadoR$ 200,00R$ 200,00
TEMPOTEMPO
SÓLIDOSÓLIDO
CULTURACULTURA 15 a 60 dias15 a 60 dias
TSTS 30 a 42 dias30 a 42 dias
AUTOMATIZADOAUTOMATIZADO
CULTURACULTURA 8 a 42 dias8 a 42 dias
TSTS 5 a 13 dias5 a 13 dias
TB or not TB???TB or not TB???
Fator corda – baciloscopiaFator corda – baciloscopia
+ + indicativo de TBindicativo de TB
atípico atípico indicativo de MNTindicativo de MNT PNB – ácido p-nitrobenzóicoPNB – ácido p-nitrobenzóico
negativo negativo TBTB
positivopositivo MNTMNT
Monteiro PHT, Martins MC, Ueki SMY, Giampaglia CMS, Telles MAS.Cord Monteiro PHT, Martins MC, Ueki SMY, Giampaglia CMS, Telles MAS.Cord formation and colony morphology for the presumptive identification of formation and colony morphology for the presumptive identification of Mycobacterium tuberculosis complex. Brazilian Journal of Microbiology Mycobacterium tuberculosis complex. Brazilian Journal of Microbiology (2003) 34: 171-174(2003) 34: 171-174
PublicaçõesPublicações
Giampaglia CMS, Martins MC, Inumaru VTG, Butuem IV, Telles MAS. Evaluation of a rapid differentiation test for the Mycobacterium tuberculosis complex by selective inhibition with –nitrobenzoic acid and thiophene-2-carboxylic acid hydrazide. Int J Tuberc Lung Dis 9(2):206–209, 2005.
Giampaglia CMS, Martins MC,Chimara E, Oliveira RS, Vieira GBO, Marsico AG, Mello FCQ, Fonseca LS, Kritski A, Telles MAS. Differentiation of Mycobacterium tuberculosis from other mycobacteria with –nitrobenzoic acid using MGIT960. Int J Tuberc Lung Dis 11(7):803-807, 2007.
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