Determinacion de La Dosis Efectiva Media Del Suero Antiofidico Antielapidico de Laboratorios Probiol...

Determinación de la Dosis Efectiva Media (De50)del Suero Antiofídico Antielapídico (Anticoral)

de Laboratorios Probiol Ltda.frente al veneno de 5 especies de serpientesdel género Micrurus sp. y la mezcla de estos.

Héctor Charry Restrepo.Biólogo – Herpetólogo.

Director Científico del Centro de Investigación y Asesoría Ofidiológica“Ophidia”

Manizales (Caldas) 21 de agosto de 2006

INFORME FINAL DEINVESTIGACIÓN.

Determinación de la Dosis Efectiva Media del Suero Antiofídico Anticoral de Laboratorios Probiol Ltda. Centro de Investigación y Asesoría Ofidiológica “Ophidia”. Informe final de Investigación.

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Contenido.

1. INTRODUCCION.

1.1 Presentación. 51.2 Advertencia de confidencialidad y propiedad del informe. 61.3 Objetivos generales del estudio. 61.4 Justificación. 6

1.5 Definiciones. 71.5.1 Dosis Efectiva Media (De50). 71.5.1.1 Términos similares. Diferenciación. 71.5.1.2 El modelo biológico. 7

1.5.2 Accidente elapídico. 81.5.2.1 La subfamilia Elapinae. 8

1.5.3 Accidente micrúrico. 91.5.3.1 Definición. 91.5.3.2 Incidencia. 91.5.3.3 Diversidad de especies. 91.5.3.4 Características generales de las serpientes del género Micrurus. 101.5.3.5 Los venenos micrúricos. 131.5.3.6 Especies de interés médico. 13

1.5.4 Suero Antiofídico Antielapídico Antimicrúrico. 15

1.6 Cantidad de pruebas realizadas. 15

2. MATERIALES Y METODOS.

2.1 Dosis Efectiva media (De50). 172.2 Verificación y repetibilidad de las pruebas. 172.3 Materiales utilizados para la realización de las pruebas. 17

2.3.1 Venenos de serpientes del género Micrurus. 172.3.1.1 Tipos de venenos utilizados. 172.3.1.2 Cantidad de veneno utilizada. 182.3.1.3 Obtención legal de los venenos. 182.3.1.4 Método utilizado para la obtención de los venenos. 182.3.1.5 Tratamiento de los venenos. 182.3.1.6 Edad de los venenos. 18

2.3.2 Suero Antiofídico Anticoral de Laboratorios Probiol Ltda. 18


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2.3.2.1 Identificación de los Sueros Antiofídicos utilizados para las pruebas. 19

2.3.3 Solución Salina Normal. 192.3.4 Jeringas. 19

2.3.5 Ratones blancos de laboratorio. 192.3.5.1 Especie. 192.3.5.2 Cantidad y procedencia. 192.3.5.3 Estado de salud, peso y sexo. 202.3.5.4 Condiciones de mantenimiento. 202.3.5.5 Disposición final. 202.3.5.6 Comité de ética. 20

2.4 Métodos utilizados para la realización de las pruebas (procedimientos). 212.4.1 Método general y Protocolo utilizado. 212.4.2 Preparación de cada ampolla de Suero Antiofídico Anticoral liofilizado. 222.4.2.1 Comentario. 222.4.3 Preparación de la Solución madre. 232.4.4 Preparación de la Solución madre de las pruebas 11 y 12 (para la

determinación de la De50 de la mezcla de los venenos utilizados). 232.4.5 Fórmula de cada experimento. 232.4.6 Incubación de la fórmula. 242.4.7 Inoculación a los animales de experimentación (modelo biológico). 242.4.8 Observación y lectura. 242.4.9 Disposición final de los materiales y desechos. 24

3. RESULTADOS Y HALLAZGOS.

3.1 Información general. 25

3.2 Tabla de resultados de la De50 del Suero Antiofídico Anticoral de LaboratoriosProbiol Ltda. frente al veneno de la especie Micrurus mipartitus. 25A

3.3 Tabla de resultados de la De50 del Suero Antiofídico Anticoral de LaboratoriosProbiol Ltda. frente al veneno de la especie Micrurus dumerilii. 25B

3.4 Tabla de resultados de la De50 del Suero Antiofídico Anticoral de LaboratoriosProbiol Ltda. frente al veneno de la especie Micrurus surinamensis. 25C

3.5 Tabla de resultados de la De50 del Suero Antiofídico Anticoral de LaboratoriosProbiol Ltda. frente al veneno de la especie Micrurus spixii obscurus. 25D

3.6 Tabla de resultados de la De50 del Suero Antiofídico Anticoral de LaboratoriosProbiol Ltda. frente al veneno de la especie Micrurus spyches medemii. 25E


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3.7 Tabla de resultados de la De50 del Suero Antiofídico Anticoral de LaboratoriosProbiol Ltda. frente al veneno de la especie Micrurus spp. (mezcla de todos losanteriores. 25F

4. CONCLUSIONES. 26

5. BIBLIOGRAFÍA. 28

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INDICE DE TABLAS.

Tabla 1: Número de pruebas, venenos probados y experimentos realizados. P 16Tabla 2: Tiempo de dilución del Suero Antiofídico Anticoral liofilizado. P 22Tabla 3: Fórmula de la solución madre de las pruebas 11 y 12. P 24Tabla 4: Dosis Efectiva media de los venenos estudiados. P 26

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INDICE DE FIGURAS.

Fig. 1. Detalle de la cabeza de Micrurus sp. P 10Fig. 2. Detalle de la cabeza de Micrurus sp. P 10Fig. 3. Craneo de Micrurus mipartitus. Dentición proteroglifa. P 10Fig. 4. Escutelación cefálica de Micrurus sp. Vista lateral. P 11Fig. 5. Escutelación cefálica de Micrurus sp. Vista dorsal. P 11Fig. 6. Escutelación cefálica de Micrurus sp. Vista ventral. P 12Fig. 7. Región caudal de Micrurus sp. P. 12Fig. 8. Micrurus mipartitus. P 13Fig. 9. Micrurus dumerilii. P 14Fig. 10. Micrurus psyches medemii. P 14Fig. 11. Micrurus spixii obscurus. P 14Fig. 12. Micrurus surinamensis. P 15Fig. 13. Suero Antiofídico Antielapídico Anticoral. P 16

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1.Introducción.

1.1 Presentación.Los accidentes ofídicos causados por serpientes del género Micrurus constituyenen nuestro país un riesgo potencial para la población rural y urbana de las zonasde clima cálido y medio; si bien no son demasiado numerosos desde el punto devista estadístico, los accidentes causados por corales tienen la característica deque revisten especial gravedad y en muchas ocasiones resultan mortales, razónpor la cual se hace indispensable poder contar con un antídoto adecuado, eficaz yespecíficamente elaborado para neutralizar el veneno de las especies deserpientes de coral presentes en nuestro territorio; ese antiveneno para podertratar este tipo de accidentes con seguridad y efectividad existe en Colombiadesde hace muchos años, es el Suero Antiofídico Antielapídico Anticoralelaborado por Laboratorios Probiol Ltda.

Desde el año 1988, Laboratorios Probiol Ltda. ha estado fabricando el único sueroanticoral disponible en Colombia y hecho específicamente para Colombia, fruto deuna paciente, constante y profunda investigación iniciada por el doctor CesarGómez Villegas (q.e.p.d.), fundador del Laboratorio, y continuada cuidadosamentepor sus sucesores.

El Suero Antiofídico Antielapídico Anticoral (suero Antimicrúrico) elaborado porLaboratorios Probiol ha probado en numerosas ocasiones que es un eficazantiofídico polivalente anticoral, capaz de neutralizar adecuadamente los venenosde las diversas especies de corales venenosas presentes en el país, prueba deello son las cientos de vidas que ha salvado, no solamente en Colombia, sinotambién en los países vecinos. Muchos casos bien documentados lo atestiguan yconfirman.

A pesar del importante acervo probatorio de la indiscutible eficacia de esteproducto y de su vital necesidad en un país tropical y especialmente rico enbiodiversidad como es Colombia, recientemente las autoridades sanitarias delpaís, a través de su órgano de vigilancia de medicamentos, han puesto en duda lacondición de “Polivalente” del suero antiofídico anticoral, así como su grado o nivelde potencia neutralizante frente a los venenos de las más importantes especies deserpientes de coral colombianas; por esta razón, Laboratorios Probiol Ltda.queriendo tener el concepto científico, riguroso e imparcial de un tercero expertoconocedor del tema, ha contratado con el Centro de Investigación y AsesoríaOfidiológica “Ophidia” la elaboración de un estudio que determine la potencianeutralizante de su producto Suero Antiofídico Antielapídico Anticoral, y queademás confirme o niegue la condición de Polivalente del mencionado producto.


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El presente documento es el informe final de dicho estudio y contiene losresultados, conclusiones y hallazgos de la investigación llevada a cabo por elCentro de Investigación y Asesoría Ofidiológica “Ophidia” a pedido de LaboratoriosProbiol Ltda.

1.2 Advertencia de Confidencialidad y Propiedad del Informe.El presente documento es de carácter privado y confidencial y pertenece demanera exclusiva a Laboratorios Probiol Ltda. empresa que lo solicitó y contrató, ypor lo mismo es su propietario. Este informe solo podrá ser publicado, dado aconocer o utilizado por Laboratorios Probiol Ltda; el Centro de Investigación yAsesoría Ofidiológica “Ophidia” comparte la propiedad intelectual de este informepor ser de su autoría, pero el derecho y la prioridad de liberación y primerapublicación es de Probiol. El Centro de Investigación y Asesoría Ofidiológica“Ophidia” se compromete a no publicar ni dar a conocer parte alguna del presenteinforme sin la expresa autorización de Laboratorios Probiol Ltda.

1.3 Objetivos generales del estudio.a. Determinar la Dosis Efectiva Media (De50), es decir, la capacidad o potencianeutralizante efectiva media del Suero Antiofídico Altielapídico Anticoral fabricadopor Laboratorios Probiol Ltda. para neutralizar los venenos de las siguientes 5especies de serpientes del género Micrurus:

Micrurus surinamnesis s.Micrurus spixii obscurus.Micrurus mipartitus m.Micrurus dumerilii t.Micrurus psyches medemi.

b. Además, determinar la Dosis Efectiva Media (De50) del mismo antiveneno frentea la mezcla homogénea de todos estos venenos, la que se denominará aquí comoDosis Efectiva Media (De50) de veneno de Micrurus spp.

1.4 Justificación.El presente estudio se adelantó con el fin de establecer, sustentar, verificar oconfirmar la condición de dicho producto (Suero Antiofídico Antielapídico Anticoralde Laboratorios Probiol Ltda.) como antiveneno POLIVALENTE , es decir, queposee una adecuada capacidad de neutralización contra todos y cada uno de losvenenos de las especies de serpientes antes mencionadas, así como su mezcla.Todas estas serpientes altamente venenosas forman parte de la herpetofaunacolombiana y de gran parte de Sudamérica; pertenecen a la familia Elapidae(elápidos), subfamilia Micrurinae (micrurinos) y son comúnmente llamadas “coralesverdaderas”, “corales” o “serpientes de coral”, son conocidas además con losnombres vulgares de “rabo de ají”, coral “mataganado”, y “coral matagatos”, entremuchos otros.


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1.5 Definiciónes.Consideramos muy importante para efectos de la comprensión del presenteinforme definir algunos términos de especial relevancia dentro del mismo; estosson:

1.5.1 Dosis efectiva media (De50).1.5.2 Accidente elapídico.1.5.3 Accidente micrúrico.1.5.4 Suero Antiofídico Antielapídico Antimicrúrico (Anticoral).

1.5.1 Dosis Efectiva Media (De 50).Se denomina así a la dosis mínima de un antiveneno (o de un antídoto) capaz deproteger efectivamente al 50% de los animales expuestos a la acción de unasustancia tóxica, en un lapso de tiempo determinado, que generalmente es de 24horas. Se deben determinar además el tipo de tóxico y la cantidad suministrada, lavía de administración (oral, subcutánea, intramuscular, intraperitoneal,intravenosa, inhalada, tópica, etc.) y la especie animal usada como modelobiológico. La De50 se expresa usualmente en miligramos de veneno neutralizadospor cada ml de antiveneno.

Existen varios métodos para determinar la De50 y la elección del mismo dependedel tipo de tóxico a usar y del tipo de antídoto que se quiere probar.

1.5.1.1 Términos similares. Diferenciación.No se debe confundir la abreviatura De50, a la que nos hemos referido, con lasabreviaturas DL50 y CL50.

La abreviatura DL50 (dosis letal media) indica la dosis mínima de un tóxico capazde causar la muerte del 50% de la población examinada, en un periodo de tiempodeterminado, que usualmente es de 24 horas.

La abreviación CL50 (concentración letal media) indica la concentración mínimacapaz de causar la muerte de la mitad de la población expuesta a la inhalación deuna sustancia tóxica gaseosa o volátil, durante un tiempo determinado.

La DL50 se expresa en miligramos de sustancia tóxica o de veneno por kilogramode peso corporal del animal examinado (dato del que debe quedar constancia). LaCL50 se expresa en mililitros de sustancia tóxica gaseosa por kilogramo de pesocorporal del animal examinado (dato del que debe quedar constancia), expuesto alcompuesto por inhalación durante un periodo de tiempo especificado. La gama devalores de los parámetros DL50 y CL50 es muy amplia.

1.5.1.2 El modelo biológico.Es importante señalar claramente la especie animal usada como modelo biológicoo el tipo de organismo en el que se realizó el ensayo, ya que los valores de De50,DL50 o CL50 dependen de varios factores entre los que se destacan: el sistema


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biológico o el tipo de animal utilizado, la raza, el peso, el sexo, la edad, la dieta,etc.

Así, por ejemplo, en el caso del insecticida DDT, la DL50 es de 87 mg/kg de pesocorporal cuando se administra por vía oral en ratas, pero alcanza 150 mg/kg depeso corporal en perros. La DL50 correspondiente a la Dioxina es de 0,02 mg/kg depeso corporal en ratas y de 0,001 mg/kg de peso corporal en perros; es decir, larata tolera una dosis veinte veces superior a la que toleran los perros.

Aunque para valorar cómo respondería un organismo humano no basta unaextrapolación directa de los resultados obtenidos con animales, estos sí dan unaidea clara y muy aproximada del grado de toxicidad de una sustancia o del poderneutralizante de un antídoto o antiveneno.

1.5.2 Accidente elapídico.Se denomina accidente elapídico al accidente ofídico causado por una serpienteperteneciente a la gran familia Elapidae (elápidos). Los elápidos son serpientesvenenosas terrestres y marinas. Poseen el maxilar superior más corto y estepresenta en la parte anterior un par de colmillos cortos, rígidos y erectos,conductores de veneno, surcados o perforados, esta condición dentaria sedenomina proteroglifa; la cola es generalmente corta, terminada en punta y nocomprimida. Habitan en todos los continentes excepto en Europa. Poseenvenenos muy poderosos de acción neurotóxica. Hay especies terrestres,hipógeas, arborícolas y otras exclusivamente marinas. Los miembros másrepresentativos y conocidos de esta familia son las llamadas serpientes de coral,las cobras, las mambas, búngaros, kraits y las serpientes marinas. Esta familia sedivide en dos grandes subfamilias que agrupan las formas terrestres (SubfamiliaElapinae) y las formas marinas (Subfamilia Hydrophinae).

1.5.2.1 La subfamilia Elapinae.Está constituida por serpientes venenosas terrestres, hipógeas o arborícolas.Todas ellas presentan un tipo de dentición proteroglifa. Pueden ser ovíparas uovovivíparas. Esta subfamilia la componen aproximadamente 250 especies y 50géneros. Usualmente son de talla pequeña y media. Los venenos de estasserpientes son muy tóxicos y potentes, las 10 serpientes más venenosas delmundo pertenecen a este grupo. Su coloración suele ser muy vistosa y brillante.Las especies más conocidas de esta subfamilia son las cobras, mambas,búngaros, serpientes de coral, etc. Especialmente numerosas son las especies deesta subfamilia en Australia, en donde comprenden dos terceras partes de losofidios presentes en dicho continente.

Los géneros más representativos de esta subfamilia son: Dendroaspis,Ophiophagus, Boulengerina, Denisonia, Naja, Hemachatus, Acantophis, Maticora,Notechis, Bungarus, Oxyuranus, Pseudechis, Demansia, Calliophis yHemibungarus. En América están presentes los géneros Micrurus y Micruroides.


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1.5.3 Accidente micrúrico.

1.5.3.1 Definición.Se denomina accidente micrúrico al envenenamiento causado por la mordedurade una serpiente del género Micrurus, que forma parte de la amplia familia de loselápidos (Elapidae) a la que, como se mencionó ya, pertenecen también lasfamosas cobras, mambas, kraits y las serpientes venosas australianas; por estarazón algunas veces se lo denomina también “accidente elapídico” que es untérmino mucho más general.

En toda América las serpientes del género Micrurus (que significa “cola corta”) sonconocidas con el nombre de corales o serpientes coral. En algunas regiones deColombia, aparte de ser llamadas corales o coralillos, son denominadas tambiéncon los nombres de “coral mata ganado”, “cabeza de chocho” y “rabo de ají”.

1.5.3.2 Incidencia.Se ha calculado que tan solo entre el 2 y 3% de todos los accidentes ofídicos enColombia son ocasionados por corales. Este tipo de accidentes no suelen sercomunes pero generalmente sí son graves; la mayoría de los casos se presentanen niños, que se sienten atraídos por la belleza y los colores de estos animales, oen adultos que imprudentemente juegan con ellos, confiados en su relativamansedumbre.

1.5.3.3 Diversidad de especies.En Colombia se han descrito hasta la fecha 22 especies diferentes de Micrurus,esta extraordinaria diversidad hace que ocupe el tercer puesto en número deespecies, después de México y Brasil.

Género Micrurus (Serpientes de coral verdaderas) especies reportadas enColombia:

M. alleni.M. ancoralis.M. clarki.M. dissoleucus.M. dumerilii.M. filiformis.M. hemprichii.M. isozonus.M. karlschmidti.M. langsdorffi.M. lemniscatus.

M. mipartitus.M. multiscutatus.M. narduccii.M. nigrocinctus.M. psyches.M. putumayensis.M. sangilensis.M. spixii.M. spurrelli.M. surinamensis.M. stewarti.


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1.5.3.4 Características generales de las serpientes del género Micrurus.En términos generales, las serpientes de coral son de tamaño mediano y pequeño,la mayoría de las especies muestra unas proporciones con tendencia a ser muydelgadas y largas; las escamas son lisas y la mayoría de las especies exhibe unacoloración muy viva y vistosa, con anillos completos de color rojo, negro y blanco(o amarillo).

La cabeza suele ser pequeña, con el cuello no diferenciado y los ojos muypequeños y puntiformes. Habitan en zonas de clima medio y cálido, algunasespecies viven en estrecha cercanía con los seres humanos, como las queprefieren los jardines o cultivos como el café y cacao. Muchas especies llevan vidasemisubterránea y prefieren permanecen ocultas bajo la hojarasca, piedras otroncos. Se reproducen por medio de huevos y la gran mayoría se alimentan demanera exclusiva de otras serpientes, es decir, que son ofidiófagas.

Como todos los miembros de la familia Elapidae, poseen una dentición de tipoproteroglifo, con dos colmillos delanteros, pequeños y fijos, que en las especiesmás grandes no sobrepasan los 3 mm. En términos generales, son serpientes decarácter manso, pero cuando muerden lo hacen con mucha fuerza y confrecuencia se quedan firmemente aferradas a la piel por un largo periodo detiempo.

Fig.2

Fig. 1

Fig. 3


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Fig. 4

Fig. 5


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Fig. 7 Región caudal de Micrurus spp.

Fig. 6


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1.5.3.5 Los venenos micrúricos.Los venenos de las serpientes de coral son muy potentes, su acción espredominantemente neurotóxica, si bien algunos son también cardiotóxicos.Nunca debe subestimarse el tamaño de la serpiente ni la ausencia inicial desíntomas generales y locales. La mordedura indolora de una pequeña serpientecoral “rabo de ají” de 10 a 15 cm de longitud y tan delgada como un cordón dezapato, es potencialmente mortal para un hombre adulto. Estos venenos poseenneurotoxinas de bajo peso molecular, que se unen fuertemente a los receptorescolinérgicos de la placa neuromotora de las fibras musculares, actuando como un“aislante” que bloquea el paso del impulso nervioso al músculo, lo que ocasionauna parálisis flácida que puede conducir a disnea y paro respiratorio.

La mayoría de estos venenos tiene una actividad de bloqueo postsináptico, sinembargo, algunos venenos de corales poseen también actividad de bloqueopresináptico, producto de la acción de fosfolipasas A2 que afectan esta terminal.Es importante recordar que los venenos de los Micrurus (serpientes de coral) noproducen efectos hemorrágicos, coagulopatías, ni daños locales a piel o a tejidos.

1.5.3.6 Especies de interés médico.Aunque en Colombia se presentan accidentes por todas las especies de Micrurus,las más importantes desde el punto de vista médico, por ser aquellas que habitanen las zonas más pobladas y en estrecha cercanía con los seres humanos, son enprimer lugar, Micrurus mipartitus (coral “rabo de ají”, “rabo de candela”, “cabeza dechocho”) y Micrurus dumerilii (coral macho, “mataganado” “coral verdadera”). Ensegundo lugar se destacan las especies Micrurus surinamensis (“coral de agua”),Micrurus spixii y Micrurus psyches medemi, es decir, todas las especies que sonobjeto del presente estudio.

Fig. 8. Micrurus mipartitus. (Coral “Rabo de ají”).

Dx

Resaltado

Dx

Resaltado


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Fig. 9. Micrurus dumerilii.

Fig. 10. Micrurus spyches medemi.

Fig. 11. Micrurus spixii obscurus.


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Fig. 12. Micrurus surinamensis surinamensis.

1.5.4 Suero Antiofídico Antielapídico Antimicrúrico .Se denomina así al antiveneno capaz de neutralizar las toxinas presentes en elveneno de las diversas especies de serpientes pertenecientes a la familia de loselápidos (fam. Elapidae), subfamilia de los micrurinos (subfam. Micrurinae), géneroMicrurus spp. En términos que son más comprensibles se denomina sueroantiofídico “Anticoral”. Este es un suero heterólogo de origen equino, ovino ocaprino, que posee comprobada eficacia y características de Polivalente regional.Actualmente es producido por laboratorios de México, Costa Rica, Colombia,Brasil y Argentina.

1.6 Cantidad de pruebas realizadas.Con el fin de obtener los objetivos generales propuestos en este estudio, sellevaron a cabo 12 grandes pruebas, dos por cada uno de los venenos de lasespecies de Micrurus antes mencionadas; en cada una de las diez (10) primeraspruebas se realizaron 6 experimentos o niveles, y para el análisis de la mezcla detodos los venenos, pruebas 11 y 12, se realizaron, respectivamente, 6 y 10experimentos o niveles, para un gran total de 76 experimentos realizados.


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Prueba. Veneno. Experimentos.1 M. mipartitus 62 M. mipartitus 63 M. Surinamensis 64 M. surinamensis 65 M. spixii 66 M. spixii 67 M. dumerilii 68 M. dumerilii 69 M. spyches medemi 6

10 M. spyches medemi 611 M. spp (mezcla) 612 M. spp (mezcla) 10

Total 12 6 venenos 76

Tabla 1. Número de pruebas, venenos probados y experimentos realizados

Fig. 13. Presentación del producto Suero Antiofídico Antielapídico (Anticoral) deLaboratorios Probiol Ltda.


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2.Materiales y métodos.

2.1 Método general utilizado para determinar la De 50.En todas la pruebas efectuadas se utilizó el método denominado “Costa Rica” yque es exactamente el mismo que se emplea de forma regular en los laboratoriosdel Instituto de investigaciones biológicas Clodomiro Picado de San José de CostaRica para determinar la Dosis Efectiva media (De50) o potencia neutralizante de losantivenenos. Este método, aceptado mundialmente por la comunidad científicageneral, está debidamente validado y avalado por la Organización Mundial de laSalud (OMS), y se considera un método económico y confiable, seguro y de fácilaplicación. Para una descripción del método, véase el punto 2.4 de este mismodocumento sobre “métodos utilizados para la realización de las pruebas”.

2.2. Verificación y repetibilidad de las pruebas.En la realización de todas las pruebas se ha aplicado estrictamente el métodoantes mencionado (el denominado método “Costa Rica”), ciñéndose a suprocedimiento, y ha sido aplicado sin adaptaciones ni modificaciones. La listacompleta de los materiales y sus características, así como el método y las técnicasde manejo utilizadas se relacionan a continuación, de modo que todas las pruebasdescritas en este trabajo puedan ser repetidas y verificadas por quien lo considerenecesario.

2.3 Materiales utilizados para la realización de la s pruebas.2.3.1 Venenos de serpientes del género Micrurus.2.3.2 Suero Antiofídico Anticoral de Laboratorios Probiol.2.3.3 Solución salina normal.2.3.4 Jeringas de diversos tamaños.2.3.5 Ratones blancos de laboratorio (como modelo biológico).

2.3.1 Venenos de serpientes del género Micrurus.2.3.1.1 Tipos de venenos utilizados.2.3.1.2 Cantidad de veneno utilizada.2.3.1.3 Obtención legal de los venenos.2.3.1.4 Método utilizado para la extracción de los venenos.2.3.1.5 Tratamiento de los venenos.2.3.1.6 Edad de los venenos.

2.3.1.1 Tipos de venenos utilizados.Para la realización de las pruebas se utilizaron los siguientes tipos de venenos deserpientes del género Micrurus, previa verificación y confirmación de laidentificación taxonómica de cada ejemplar:


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Veneno de Micrurus surinamnesis.Veneno de Micrurus spixii.Veneno de Micrurus mipartitus.Veneno de Micrurus dumerilii.Veneno de Micrurus spyches medemi.

2.3.1.2 Cantidad de veneno utilizada.Para la realización de las pruebas se dispuso de una cantidad mínima de 15 a 20mg de veneno de cada una de las especies mencionadas. En el formato o planillade las pruebas se especifica la cantidad de veneno utilizada en cada caso para lapreparación de la solución madre.

2.3.1.3 Obtención legal de los venenos.Todos los venenos de serpientes del género Micrurus a utilizar en estas pruebashan sido obtenidos de ejemplares cautivos que forman parte del inventario oficialdel Serpentario del Centro de Investigación y Asesoría Ofidiológica “Ophidia”.Dicho serpentario se encuentra debidamente autorizado, avalado y vigilado por lasautoridades ambientales del Estado. Cada ejemplar de la colección ha sidolegalmente obtenido y cuenta con su respectiva identificación y registro.

2.3.1.4 Metodo utilizado para la extracción de los venenos.Para la extracción de los venenos se ha utilizado la técnica denominada “ordeñomanual” con el uso de pipetas Pasteur; esta técnica es conocida con el nombre de“método de Barme” y consiste básicamente en sujetar la serpiente por el cuello,abrirle la boca y colocar sobre cada colmillo una micropipeta tipo Pasteur demanera que el colmillo quede dentro de esta; luego se hace un masaje de suavepresión sobre las glándulas productoras del veneno, lo que generalmente induceen la serpiente el reflejo de morder e inocular el veneno, el cual queda depositadoen las pipetas.

2.3.1.5 Tratamiento de los venenos.Una vez obtenidos, los venenos fueron conservados a baja temperatura y en laoscuridad, en frascos herméticamente cerrados y debidamente roturados.Posteriormente fueron secados por liofilización, cuidadosamente pesados enbalanza analítica digital y dispuestos en recipientes plásticos a dosis de 10 mg.Los recipientes son mantenidos a temperatura ambiente en la oscuridad hasta elmomento de preparar la solución madre o solución de veneno diluido en soluciónsalina normal.

2.3.1.6 Edad de los venenos.Ninguno de los venenos utilizados para la realización de estas pruebas tenía untiempo mayor a 3 meses de haber sido extraído.

2.3.2 Suero Antiofídico Anticoral de Laboratorios P robiol.Para la realización de todas las pruebas se utilizaron en total 14 ampollas deSuero Antiofídico antimicrúrico - altielapídico (anticoral) de Laboratorios ProbiolLtda.


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2.3.2.1 Identificación de los sueros antiofídicos u tilizados en las pruebas:

Tipo de producto: Suero antiofídico antielapídico (anticoral).Cantidad: 14 frascos viales.Presentación: Polvo liofilizado para ser reconstituido con 10 ml de diluente estéril.Marca: Probiol.Fabricante: Productos Biológicos Probiol Laboratorios Probiol Ltda.Lote: AC004 (Lote piloto Nro. 4)

Estos antivenenos nos fueron facilitados por Laboratorios Probiol Ltda.

En la realización de cada una de las 11 primeras prueba de DE50 se utilizaron 6,85ml de suero antiofídico de cada frasco vial de 10 ml. (véase formato del protocolopara la determinación de potencia). En cada caso los 3,15 ml restantes fuerondesechados. En la prueba Nro. 12, con 10 niveles o experimentos, se utilizaron21,3 ml (de 3 frascos viales) de antiveneno, los restantes 8,7 ml fuerondesechados. En total se utilizaron 14 viales de Suero Antiofídico Anticoral deLaboratorios Probiol Ltda.

2.3.3. Solución salina normal.Para la preparación de la solución madre (solución de veneno de serpientediluido), se utilizó solución salina normal de marca “Baxter”, de uso corrientehospitalario y disponible comercialmente. Se verificó cuidadosamente la vigenciadel registro sanitario y la vigencia del producto.

2.3.4 Jeringas.Se utilizaron jeringas desechables de plástico de diferentes marcas disponibles enel comercio (Rimco, Nipro, BD Plastipak, Inject) con capacidades de 10, 5, 3 y 1ml; se verificó cuidadosamente la vigencia del producto y de las licencias legales.

2.3.5 Ratones blancos de laboratorio (como modelo b iológico).2.3.5.1 Especie.2.3.5.2 Cantidad y procedencia.2.3.5.3 Estado de salud, peso y sexo.2.3.5.4 Condiciones de mantenimiento.2.3.5.5 Disposición final.2.3.5.6 Comité de ética.

2.3.5.1 Especie.Como modelo biológico para la realización de las pruebas se utilizaron ratonesblancos (suizos) de la especie Mus musculus (llamados comúnmente ratones delaboratorio).

2.3.5.2 Cantidad y procedencia.Se utilizaron un total de 456 ratones, 72 para cada una de las cinco primeraspruebas y 96 para la sexta prueba (véanse los formatos de protocolo para cada


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una de las pruebas); todos ellos procedentes del Bioterio del Centro deInvestigación y Asesoría Ofidiológica “Ophidia”; Dicho bioterio o criadero técnicode animales para experimentación, se encuentra debidamente autorizado, avaladoy vigilado por las autoridades ambientales y sanitarias del Estado.

2.3.5.3 Estado de salud. Peso y sexo.Antes de ser utilizados se verificó por parte del médico veterinario el estado desalud y el peso de los animales. Se utilizaron solamente animales sanos, de 18 a20 gramos de peso, machos y hembras no preñadas. Los ratones fueron pesadosen una balanza tipo gramera, de marca Ohaus Cent-O-gram, referencia 8217,fabricada por Ohaus Scale Corporation y que recientemente fue calibrada.

2.3.5.4 Condiciones de mantenimiento.Durante la realización de las pruebas y en el tiempo de observación posterior aestas, los ratones fueron mantenidos en cajas de acero inoxidable (6 por caja) delas mismas que se utilizan normalmente en el bioterio; fueron mantenidos encondiciones de temperatura y humedad ambiente, con buena ventilación, y conagua y alimento disponibles a voluntad todo el tiempo.

2.3.5.5 Disposición final.Todos los ratones sobrevivientes (150 ejemplares, el 32,89% de los utilizados)ingresaron de nuevo al bioterio pero fueron mantenidos aparte y sometidos a unperiodo de cuarentena y observación de 30 días, luego de los cuales fueronexaminados para verificar su estado de salud y posteriormente destinados aalimentar las serpientes del Centro de Investigación.

Los ratones que resultaron muertos durante las pruebas (306 ejemplares) fuerondebidamente empacados en bolsas rojas para desechos biológicos o biomédicos,marcadas con etiquetas reglamentarias de riesgo biológico, selladas yconservadas en refrigerador hasta su recolección por parte del personalespecializado en desechos tóxicos y biológicos de la empresa municipal de aseo,entidad que se encarga de la incineración técnica y adecuada de todo tipo dedesechos tóxicos, biomédicos y hospitalarios.

2.3.5.6 Comité de ética.Antes de la realización de las pruebas, y conforme a lo establecido en el artículo23 del capítulo VI la ley 84 de 1989, se reunió el Comité de Etica permanente delCentro de Investigación y Asesoría Ofidiológica “Ophidia” y hecho un concienzudoanálisis de la necesidad y utilidad de las pruebas a realizar y de la metodología aemplear, determinó aprobar la realización de los experimentos teniendo en cuenta:

a. Que los experimentos que se quieren llevar a cabo con animales vivos serealizarán con la autorización previa de la autoridad competente y que talespruebas son imprescindibles para el estudio y avance de la ciencia.

b. Que los resultados experimentales no puedan obtenerse por otrosprocedimientos o alternativas.


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c. Que las experiencias son necesarias para el control, prevención, el diagnósticoo el tratamiento de enfermedades que afecten al hombre o a los animales.

d. Que los experimentos no puedan ser sustituidos por cultivo de tejidos, medios ymodelos computarizados de simulación, dibujos, películas, fotografías, videos uotros procedimientos.

Así mismo, la realización de las pruebas estuvo vigilada por delegados de dichoComité y como consta en el acta correspondiente, se verificó que no se utilizaranmás animales de los estrictamente necesarios y de antemano programados paralos experimentos, que no se les causara dolor innecesario ni se incurriera encrueldad o maltrato hacia los mismos.

2.4 Métodos utilizados para la realización de las p ruebas.

2.4.1 Método general y protocolo utilizado.2.4.2 Preparación del Suero Antiofídico Anticoral.2.4.3 Preparación de la solución madre.2.4.4 Preparación de la Solución madre de las pruebas 11 y 12 (mezcla devenenos)2.4.5 Incubación de la solución madre.2.4.6 Formula de cada experimento.2.4.7 Inoculación.2.4.8 Observación y lectura.2.4.9 Disposición final.

2.4.1 Método general y protocolo.Como ya se mencionó, el método utilizado para determinar la Dosis EfectivaMedia (De50) fue el llamado “Método Costa Rica”, y que es mismo que se utilizaregularmente en el Instituto de Investigaciones Biológicas Clodomiro Picado deSan José de Costa Rica para medir el título de neutralización de los antivenenosque allí se producen.

En principio, este método consiste en la mezcla de una cantidad fija de veneno enpresencia de cantidades variables del antiveneno, las que se ajustan a un volumenigual, se incuban por 30 minutos a 37° C y se inocu lan por vía intraperitoneal engrupos de seis ratones por mezcla, de forma que cada uno reciba una dosis noinferior a 3 dosis letales medias (Dl50).

El título de neutralización, se expresa en microgramos de veneno neutralizadospor mililitro de antiveneno, y se calcula con base en la menor cantidad deantiveneno que proteja adecuadamente a tres de los seis animales inoculados (el50% de la muestra). Para mayor información, véase definición de la De50, numeral1.5.1 de este mismo documento.


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El tiempo de observación de cada prueba es de 24 horas. La observacióndetallada del formato de protocolo puede contribuir mucho a la comprensión delmétodo y su aplicación. (Véase el anexo 1).

2.4.2 Preparación de cada ampolleta del Suero Antio fídico Anticoralliofilizado.Las ampollas de suero antiofídico fueron numeradas del 1 al 14 para identificarlas.Al momento de realizar cada prueba se preparó la respectiva ampolla de SueroAntiofídico según las instrucciones del fabricante, esto es, aplicando los 10 ml dediluente estéril en forma lenta y por la pared del frasco y dejándolo luego enreposo, sin agitarlo, para permitir que el producto se hidrate.

Con el fin de verificar el tiempo requerido para la dilución del producto, se calculóun tiempo para la aplicación del diluente estéril de 15 segundos, y se permitióenseguida un periodo de hidratación en reposo que varió entre 1 y 14 minutos;concluido este periodo de tiempo se agitó suavemente el frasco por un periodo de10 segundos y se realizó una observación. Los resultados u observaciones serelacionan en la tabla 2.

Ampolla Diluente Reposo Agitar Resultado. Observación.1 15’’ 1’ 10’’ Se observa un grumo sólido muy grande.2 15’’ 2’ 10’’ Muchos grumos grandes sin diluir.3 15’’ 3’ 10’’ Algunos grumos grandes sin diluir.4 15’’ 4’ 10’’ Algunos grumos pequeños sin diluir.5 15’’ 5’ 10’’ Se forma un sedimento en el fondo.6 15’’ 6’ 10’’ Un poco de sedimento en el fondo del frasco.7 15’’ 7’ 10’’ Se observa aún algo de sedimento.8 15’’ 8’ 10’’ El suero está completamente diluido.9 15’’ 9’ 10’’ El suero está completamente diluido.

10 15’’ 10’ 10’’ El suero está completamente diluido.11 15” 11’ 10” El suero está completamente diluido.12 15” 12’ 10” El suero está completamente diluido.13 15” 13’ 10” El suero está completamente diluido.14 15” 14’ 10” El suero está completamente diluido.

Tabla 2. Tiempo de dilución del suero antiofídico Anticoral liofilizado.

2.4.2.1 Comentario.La presentación final (comercial) del producto Suero Antiofídico AntielapídicoAnticoral, es la de Polvo liofilizado para ser reconstituido con 10 ml de diluenteestéril. La prueba de preparación del suero anteriormente descrita demuestra queun tiempo de hidratación en reposo entre 5 y 10 minutos facilita mucho la dilucióndel producto, el cual no requiere ser agitado fuertemente para quedar listo a serutilizado.


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2.4.3 Preparación de la Solución madre.En la preparación de la Solución Madre (veneno diluido en solución salina), paracada prueba se utilizó la fórmula estándar de 1mg de veneno por 1ml de soluciónsalina. Ante la dificultad de preparar cantidades pequeñas, se preparó siempreuna cantidad de 10 ml de solución madre de cada tipo de veneno.

2.4.4 Preparación de la solución madre de las prueb as 11 y 12 (Mezcla detodos los venenos antes probados).Las pruebas 11 y 12, destinadas a determinar la De50 de la mezcla de los cincovenenos antes probados, se programó como prueba para reconfirmar la condiciónde POLIVALENTE del Suero Antiofídico Anticoral de Probiol, condición ya probadapor el hecho de haber neutralizado adecuadamente cada uno de los venenos enlas anteriores pruebas individuales.

Para la preparación de la solución madre de esta prueba se planteó si podríautilizarse una mezcla de cantidades iguales del sobrante de las soluciones madreindividuales preparadas para cada una de las pruebas anteriores o si por elcontrario se deberían mezclar cantidades iguales de los diferentes venenos, enestado seco liofilizado y disolver dicha mezcla en solución salina normal.

Reunido el equipo de investigadores y asesores, se planteo y discutió el asunto yse concluyó que técnicamente no debe existir ninguna diferencia en la soluciónmadre de venenos mezclados resultante, bien sea que se use un método o el otro;aún así, se decidió utilizar la segunda opción, para garantizar la frescura de lasolución y para verificar que las cantidades de veneno a mezclar fueranexactamente iguales. Se conservó la proporción de 1mg de veneno por 1 ml desolución salina, pero ante la dificultad de pesar cantidades muy pequeñas deveneno con una exactitud 100% confiable, se optó por preparar una cantidadgrande de solución (25 ml) de modo que se usaran 25 mg de veneno, es decir 5mg de cada tipo de veneno. La fórmula de la solución madre de venenosmezclados que se utilizó para las pruebas 11 y 12 es la siguiente:

Veneno de Micrurus miparitus: 5mgVeneno de Micrurus dumerilii: 5mgVeneno de Micrurus surinamensis: 5mgVeneno de Micrurus spyches medemi: 5 mgVeneno de Micrurus spixii obscurus: 5 mgSolución Salina Normal: 25 ml

Tabla 3. Fórmula de la solución madre pruebas 11 y 12.

2.4.5 Fórmula de cada experimento.La formula para cada experimento se preparó en el momento previo a lainoculación y no antes, y se hizo de acuerdo a las proporciones establecidas yprogramadas de antemano para cada nivel según el formato de Protocolodiseñado para cada prueba (Ver formato de Protocolo). De cada fórmula se


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preparó un volumen de 4,5 ml, de manera que se pudiera inocular 0,75 ml a cadauno de los seis ratones de cada nivel y no quedaran sobrantes.

2.4.6 Incubación de la fórmula.Una vez preparada cada una de las 12 fórmulas de cada prueba, estás fueronincubadas a 37°C durante 30 minutos en una incubado ra estándar para laboratorioclínico o bacteriología (Marca “Clinic Lab Supplies” modelo “TermoLab 4,5” defabricación canadiense).

2.4.7 Inoculación.Una vez preparada e incubada la fórmula para cada experimento, se procedió a lainoculación de 0,75 ml de dicha formula a seis ratones por vía intraperitoneal y encada experimento o nivel se hizo de la misma manera; como se dijo antes, decada formula se preparó un volumen de 4,5 ml, de manera que se inocularan losseis ratones de cada nivel y no quedaran sobrantes. La inoculación se efectuó conjeringas tipo insulina de 1 ml, jeringas de aguja fija no removible; se utilizó unajeringa por cada ratón y tras la inoculación fueron debidamente desechadas.

2.4.8 Observación y lectura.Una vez inoculados los ratones de cada experimento o nivel, fueron dejados enuna caja de acero inoxidable con sustrato de cascarilla de arroz, tal y como se losmantiene normalmente en el bioterio, con alimento y agua disponibles a voluntad.Cada caja fue debidamente marcada e identificada y dejada en reposo atemperatura y humedad ambiente, con luz baja e indirecta y protegida decorrientes de aire, tal y como son normalmente mantenidas. Se anotócuidadosamente la hora de cada inoculación y se realizó la lectura de la prueba alas 24 horas exactas, haciendo el recuento de ratones vivos y muertos, datos quese consignaron en las planillas correspondientes.

2.4.9 Disposición final.Todos los frascos, pipetas y jeringas que se utilizaron durante las pruebas, asícomo las bolsas vacías de solución salina, los guantes y tapabocas desechables,fueron empacados en bolsas rojas para desechos biomédicos debidamenteetiquetadas y marcadas. Todas las agujas y jeringas de aguja fija no removiblefueron depositadas en un recipiente tipo “guardián” diseñado especialmente parala disposición o desecho de elementos cortopunzantes de uso médico; esterecipiente, debidamente etiquetado y marcado, fue sellado según las instruccionesdel fabricante. Todos estos desechos fueron recogidos por personal especializadoen la recolección de desechos tóxicos, biológicos y biomédicos de la empresamunicipal de aseo, que se encarga de la incineración y disposición técnica de estaclase de basuras. Con respecto a la disposición final de los ratones utilizados enlas pruebas, véase el numeral 2.3.5.5 de este mismo documento.


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3.Resultados y hallazgos.

Los resultados y hallazgos de cada una de las pruebas se consignaron en lasrespectivas tablas o formatos de Protocolo que se relacionan a continuación.

Información general.

Tipo de pruebas realizadas:Dosis Efectiva Media (De50).

Número de pruebas realizadas:12 pruebas, 76 experimentos.

Tipo de antiveneno probado:Suero Antiofídico Antielapídico Anticoral de Laboratorios Probiol Ltda.

Tipo de toxinas a neutralizar:Venenos de serpientes del género Micrurus spp.

Método utilizado:De50 según Método “Costa Rica”, validado por el Instituto de Investigacionesbiológicas “Clodomiro Picado” de San José de Costa Rica”. Aprobado OMS(WHO).

Modelo biológico utilizado:Ratones de laboratorio de la especie Mus musculus, de raza albina suiza.

Responsable y Coordinador general de la realización de las pruebas:Héctor Charry Restrepo.Director Científico del Centro de Investigación y Asesoría Ofidiológica “Ophidia”.

Pruebas ejecutadas por:Equipo de Investigadores y colaboradores de “Ophidia”.

PRUEBA GRUESA

Experimento Veneno sol. Solución Suero Relación Ug de Ratones inoculado Ratones vivos % De50madre salina normal Anticoral veneno/1 mL Suero intraperitoneal 24 horas

1 0,3 ml 1,2 ml 3 ml 100 6 0,75 ml 4 de 6 66,6 *2 0,3 ml 2,7 ml 1,5 ml 200 6 0,75 ml 2 de 6 33,3 *3 0,3 ml 3,2 ml 1 ml 300 6 0,75 ml 1 de 6 16,64 0,3 ml 3,45 ml 0,75 ml 400 6 0,75 ml 1 de 6 16,65 0,3 ml 3,6 ml 0,60 ml 500 6 0,75 ml 0 de 6 06 0,3 ml 4,2 ml 0 Control 6 0,75 ml 0 de 6 0


7 0,3 ml 1,2 ml 3 ml 100 6 0,75 ml 4 de 6 66,68 0,3 ml 1,8 ml 2,4 ml 125 6 0,75 ml 3 de 6 50 *9 0,3 ml 2,2 ml 2 ml 150 6 0,75 ml 3 de 6 50 *

10 0,3 ml 2,5 ml 1,7 175 6 0,75 ml 2 de 6 33,311 0,3 ml 2,7 ml 1,5 ml 200 6 0,75 ml 2 de 6 33,312 0,3 ml 2,9 ml 1,3 225 6 0,75 ml 1 de 6 16,6

25Apor cada ml de suero; esto significa que cada vial de 10 ml está en capacidad de neutralizar entre 1,25 y 1,5 mg de veneno (promedio 1,37).

Análisis Nro: 1 Experimentos realizados: 12 Fecha de realización: 19 y 20 de marzo de 2006Realizado por: Ophidia. Centro de Investigación y Asesoría Ofidiológica. Director y responsable: Héctor Charry Restrepo.

Resultado: la De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus mipartitus se encuentra entre 100 y 200 Ug de veneno neutralizado

por cada ml de suero; como el rango es muy grande, se hace necesario realizar una prueba fina en este nivel.

3.2 Dosis Efectiva Media (De50) del Suero Antiofídico Anticoral de Laboratorios Probiol Ltda.

PRUEBA FINA.

frente al veneno de la especie: Micrurus mipartitus.

Resultado: la De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus mipartitus se encuentra entre 125 y 150 Ug de veneno neutralizado

PRUEBA GRUESA




7 0,3 ml 1,2 ml 3 ml 100 6 0,75 ml 4 de 6 66,68 0,3 ml 1,8 ml 2,4 ml 125 6 0,75 ml 3 de 6 50 *9 0,3 ml 2,2 ml 2 ml 150 6 0,75 ml 2 de 6 33,3


25B

3.3 Dosis Efectiva Media (De50) del Suero Antiofídico Anticoral de Laboratorios Probiol Ltda.

Resultado: La De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus dumerilii se sitúa en 125 Ug de veneno neutralizados por cadaml de suero; esto significa que cada vial de 10 ml está en capacidad de neutralizar mínimo 1,25 mg de veneno.

PRUEBA FINA.

frente al veneno de la especie: Micrurus dumerilii.

Análisis Nro: 2 Experimentos realizados: 12 Fecha de realización: 14 y 15 de abril de 2006Realizado por: Ophidia. Centro de Investigación y Asesoría Ofidiológica. Director y responsable: Héctor Charry Restrepo.

Resultado: La De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus dumerilii se encuentra entre los 100 y 200 Ug de veneno

neutralizados por cada ml de suero; con el fin de establecer una cifra más precisa se realiza la siguiente prueba fina:

PRUEBA GRUESA


1 0,3 ml 1,2 ml 3 ml 100 6 0,75 ml 3 de 6 50 *2 0,3 ml 2,7 ml 1,5 ml 200 6 0,75 ml 2 de 6 33,33 0,3 ml 3,2 ml 1 ml 300 6 0,75 ml 1 de 6 16,64 0,3 ml 3,45 ml 0,75 ml 400 6 0,75 ml 0 de 6 05 0,3 ml 3,6 ml 0,60 ml 500 6 0,75 ml 0 de 6 06 0,3 ml 4,2 ml 0 Control 6 0,75 ml 0 de 6 0


7 0,3 ml 1,2 ml 3 ml 100 6 0,75 ml 3 de 6 50 *8 0,3 ml 1,8 ml 2,4 ml 125 6 0,75 ml 3 de 6 50 *9 0,3 ml 2,2 ml 2 ml 150 6 0,75 ml 2 de 6 33,3


25C

Resultado: la De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus surinamensis se encuentra entre 100 y 125 Ug de veneno neutra-lizado por cada ml de suero; esto significa que cada vial de 10 ml está en capacidad de neutralizar entre 1 y 1,25 mg de veneno (promedio 1,12).

3.4 Dosis Efectiva Media (De50) del Suero Antiofídico Anticoral de Laboratorios Probiol Ltda.frente al veneno de la especie: Micrurus surinamensis.

PRUEBA FINA.

Análisis Nro: 3 Experimentos realizados: 12 Fecha de realización: 12 y 13 de mayo de 2006Realizado por: Ophidia. Centro de Investigación y Asesoría Ofidiológica. Director y responsable: Héctor Charry Restrepo.

Resultado: la De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus surinamensis se encuentra alrededor de los 100 Ug de veneno


PRUEBA GRUESA


1 0,3 ml 1,2 ml 3 ml 100 6 0,75 ml 5 de 6 83,32 0,3 ml 2,7 ml 1,5 ml 200 6 0,75 ml 4 de 6 66,6 *3 0,3 ml 3,2 ml 1 ml 300 6 0,75 ml 2 de 6 33,3 *4 0,3 ml 3,45 ml 0,75 ml 400 6 0,75 ml 1 de 6 16,65 0,3 ml 3,6 ml 0,60 ml 500 6 0,75 ml 0 de 6 06 0,3 ml 4,2 ml 0 Control 6 0,75 ml 0 de 6 0


7 0,3 ml 2,7 ml 1,5 ml 200 6 0,75 ml 4 de 6 66,68 0,3 ml 2,9 ml 1,3 ml 225 6 0,75 ml 3 de 6 50 *9 0,3 ml 3 ml 1,2 ml 250 6 0,75 ml 3 de 6 50 *

10 0,3 ml 3,1 ml 1,1 ml 275 6 0,75 ml 2 de 6 33,311 0,3 ml 3,2 ml 1 ml 300 6 0,75 ml 2 de 6 33,312 0,3 ml 3,27 ml 0,93 ml 325 6 0,75 ml 2 de 6 33,3

3.5 Dosis Efectiva Media (De50) del Suero Antiofídico Anticoral de Laboratorios Probiol Ltda.frente al veneno de la especie: Micrurus spixii obscurus.

Análisis Nro: 4 Experimentos realizados: 12 Fecha de realización: 26 y 27 de mayo de 2006Realizado por: Ophidia. Centro de Investigación y Asesoría Ofidiológica. Director y responsable: Héctor Charry Restrepo.

25Dcada ml de suero; esto significa que cada vial de 10 ml está en capacidad de neutralizar de 2,25 a 2,5 mg de veneno (promedio 2,37).

Resultado: La De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus spixii se encuentra entre los 200 y 300 Ug de veneno


PRUEBA FINA.

Resultado: La De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus spixii se sitúa entre 225 y 250 Ug de veneno neutralizados por

PRUEBA GRUESA




7 0,3 ml 1,2 ml 3 ml 100 6 0,75 ml 4 de 6 66,68 0,3 ml 1,8 ml 2,4 ml 125 6 0,75 ml 3 de 6 50 *9 0,3 ml 2,2 ml 2 ml 150 6 0,75 ml 3 de 6 50 *

10 0,3 ml 2,5 ml 1,7 175 6 0,75 ml 2 de 6 33,311 0,3 ml 2,7 ml 1,5 200 6 0,75 ml 2 de 6 33,312 0,3 ml 2,9 ml 1,3 225 6 0,75 ml 2 de 6 33,3

25E

3.6 Dosis Efectiva Media (De50) del Suero Antiofídico Anticoral de Laboratorios Probiol Ltda.frente al veneno de la especie: Micrurus spyches medemi.

Análisis Nro: 5 Experimentos realizados: 12 Fecha de realización: 16 y 17 de junio de 2006Realizado por: Ophidia. Centro de Investigación y Asesoría Ofidiológica. Director y responsable: Héctor Charry Restrepo.

cada ml de suero; esto significa que cada vial de 10 ml está en capacidad de neutralizar de 1,25 a 1,5 mg de veneno (promedio 1,37).

Resultado: La De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus spyches m. se encuentra entre los 100 y 200 Ug de veneno


PRUEBA FINA.

Resultado: La De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus spyches m. se sitúa entre 125 y 150 Ug de veneno neutralizados por

20 y 21- 7- 06Experimento Veneno sol. Solución Suero Relación Ug de Ratones inoculado Ratones vivos % De50

madre salina normal Anticoral veneno/1 mL Suero intraperitoneal 24 horas1 0,3 ml 1,2 ml 3 ml 100 6 0,75 ml 4 de 6 66,6 *2 0,3 ml 2,7 ml 1,5 ml 200 6 0,75 ml 2 de 6 33,3 *3 0,3 ml 3,2 ml 1 ml 300 6 0,75 ml 1 de 6 16,64 0,3 ml 3,45 ml 0,75 ml 400 6 0,75 ml 0 de 6 05 0,3 ml 3,6 ml 0,60 ml 500 6 0,75 ml 0 de 6 06 0,3 ml 4,2 ml 0 Control 6 0,75 ml 0 de 6 0

22 y 23- 7-06Experimento Veneno sol. Solución Suero Relación Ug de Ratones inoculado Ratones vivos % De50

madre salina normal Anticoral veneno/1 mL Suero intraperitoneal 24 horas7 0,3 ml 1,2 ml 3 ml 100 6 0,75 ml 4 de 6 66,68 0,3 ml 1,5 ml 2,7 ml 110 6 0,75 ml 3 de 6 50 *9 0,3 ml 1,7 ml 2,5 ml 120 6 0,75 ml 3 de 6 50 *

10 0,3 ml 1,9 ml 2,3 ml 130 6 0,75 ml 3 de 6 50 *11 0,3 ml 2,1 ml 2,1 ml 140 6 0,75 ml 2 de 6 33,312 0,3 ml 2,2 ml 2 ml 150 6 0,75 ml 2 de 6 33,313 0,3 ml 2,4 ml 1,8 ml 160 6 0,75 ml 2 de 6 33,314 0,3 ml 2,44 ml 1,76 ml 170 6 0,75 ml 2 de 6 33,315 0,3 ml 2,54 ml 1,66 ml 180 6 0,75 ml 2 de 6 33,316 0,3 ml 2,63 ml 1,57 ml 190 6 0,75 ml 2 de 6 33,3

3.7 Dosis Efectiva Media (De50) del Suero Antiofídico Anticoral de Laboratorios Probiol Ltda.frente al veneno de la especie: Micrurus sp. (Mezcla de todos los anteriores)

Análisis Nro: 6 Experimentos realizados: 16 Fecha de realización: 20 al 23 de julio de 2006Realizado por: Ophidia. Centro de Investigación y Asesoría Ofidiológica. Director y responsable: Héctor Charry Restrepo.

cada ml de suero; esto significa que cada vial de 10 ml está en capacidad de neutralizar de 1,1 a 1,3 mg de veneno (promedio 1,2). Pag. 25F

Prueba gruesa:

Prueba fina:

Resultado: La De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus sp. se encuentra entre los 100 y 200 Ug de veneno


Resultado: La De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus sp se sitúa entre 110 y 130 Ug de veneno neutralizados por


26

4.Conclusiones.

Observando las planillas del capítulo 3 de resultados y hallazgos, las conclusionesde este estudio resultan evidentes; ha quedado claramente demostrado que:

a. El Suero Antiofídico Antielapídico Anticoral de Laboratorios Probiol Ltda. poseeuna adecuada potencia neutralizante contra los venenos de serpientes de lasespecies Micrurus mipartitus, Micrurus surinamensis, Micrurus dumerilii, Micrurusspyches medemi y Micrurus spixii.

La Dosis Efectiva Media (De50) del suero antiofídico Antielapídico Anticoral deLaboratorios Probiol frente al veneno de cada una de las especies de serpientesmencionadas, según las pruebas y experimentos realizados es la siguiente:

Especie. Dosis Efectiva Media(De50)*

Micrurus mipartitus. 1,37*Micrurus surinamensis. 1,12*

Micrurus dumerilii. 1,25*Micrurus spyches medemi. 1,37*

Micrurus spixii. 2,37*Micrurus spp. Mezcla. 1,20*

Tabla 3 . Dosis efectiva media de los venenos estudiados.*De50 expresada en miligramos de veneno neutralizados por cada 10 ml de antiveneno.

De aquí se derivan dos conclusiones muy importantes, a saber:

1. El mencionado suero Antiofídico Antielapídico es efectivamente un antivenenoANTIMICRÚRICO o ANTICORAL , ya que neutraliza adecuadamente los venenosde las especies más representativas de este género en Colombia.

2. El mencionado Suero Antiofídico Antielapídico es efectivamente un antivenenoPOLIVALENTE , ya que neutraliza adecuadamente los venenos de un importantenúmero de especies de serpientes del género Micrurus, incluida la especieMicrurus mipartitus (coral “rabo de ají”), cuyo veneno no es neutralizado por otrosantivenenos anticorales extranjeros.

b. El Suero Antiofídico Antielapídico Anticoral de Laboratorios Probiol Ltda. poseeuna adecuada potencia para neutralizar la mezcla de todos los venenosanteriormente mencionados; según las pruebas y experimentos realizados, laDosis Efectiva Media (De50) del Suero frente a la mezcla de los venenos es de 1,2


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mg de veneno neutralizados por cada 10 ml de antiveneno, lo que ratifica yconfirma la condición de ANTICORAL POLIVALENTE .

c. Por ser elaborado a partir del veneno de serpientes de coral colombianas,procedentes de las diversas zonas geográficas del país, no cabe duda que elSuero antiofídico Anticoral de Laboratorios Probiol Ltda. debe ser el antiveneno deelección para el tratamiento eficaz de los accidentes causados por la mordedurade este tipo de serpientes en Colombia.

d. La confirmada condición de POLIVALENTE del Suero Antiofídico Anticoral delLaboratorios Probiol permite que los accidentes causados por este tipo deserpientes puedan ser tratados con eficacia y seguridad sin que sea necesaria unaexhaustiva identificación de la especie causante por parte del personal médico ode enfermería que atienda el caso.

e. La demostrada capacidad neutralizante (De50) del Suero Antiofídico Anticoral deLaboratorios Probiol Ltda. frente a los venenos micrúricos, guarda una coherenterelación de proporción con la cantidad promedio de veneno inoculada en lamordida de la mayoría de las especies de corales estudiadas y que está entre los5 y 25 mg de veneno, esto significa que una dosis inicial de entre 5 y 10 frascosviales de 10 ml del antiveneno permiten tratar adecuadamente un accidentemicrúrico promedio, siempre y cuando su aplicación sea precoz y por la vía deadministración más adecuada (intravenosa).

f. No dudamos en recomendar este producto como un Suero Antiofídico Anticoralde primera calidad, capaz de neutralizar adecuadamente los venenos deserpientes de coral colombianas y consideramos urgente su fabricación industrial ysu posterior distribución a todas las regiones del país.

Autenticación y aval de contenidos, procedimientos, resultados y conclusiones.El Director y Responsable por esta investigación:

_____________________________________Héctor Charry Restrepo. C.C. 79’387.066 Btá.Biólogo – Herpetólogo.Director científico del Centro de InvestigaciónY Asesoría Ofidiológica “Ophidia”.


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5.Bibliografía.

En la realización de las diversas etapas que tuvo la elaboración del presentetrabajo de investigación se consultaron numerosas fuentes bibliográficas,electrónicas y entrevistas personales con expertos y autoridades en el tema. Lasprincipales fuentes bibliográficas se relacionan a continuación:

Angel R. 1989. Animales venenosos y sus venenos. Act. Med. Col. 14:349.

Angel R. 1983. Serpientes de Colombia. Revista Facultad Nacional de Agronomía,vol. XXXVI. Universidad Nacional. Medellín 1983

Angel, R. 1987. Serpientes de Colombia. Su relación con el Hombre. Academia deMedicina de Medellín. Ediciones Especiales del Fondo Rotatorio de Publicaciones.Imprenta Departamental de Antioquia; pp.: 149-177.

Arguelos A, Vanegas D, Montenegro J, et al. 2002. Complicaciones cardiacasen mordeduras de serpientes. Revista Colombiana de Cardiología. 9:361-363.

Arroyo, O., Rojas, G. & Gutiérrez, J.M. 1999. Envenenamiento por mordedura deserpiente en Costa Rica en 1996: epidemiología y consideraciones clínicas. ActaMédica Costarricense 41, 23-29.

Ayerbe, S., Amparo Paredes y Doris Gálvez. 1979. Estudio Retrospectivo sobreOfidiotoxicosis en el Dpto. del Cauca. 2ª Parte. Aspectos Clínicos,Epidemiológicos y Complicaciones. Cuad. de Med. Popayán (Col.), 4 (1-2): 33-45.

Ayerbe, S. 1982. Ofidiotoxicosis Micrúrica en el Cauca: Reporte de un caso Fatal.Cuad. de Med. Popayán (Col.), 7: 1 - 7.

Ayerbe, S. 1995. Pautas para el manejo de las mordeduras de serpientes.Temas de Pediatría Nestlé, 133:1-31

Ayerbe, S. 2000. Ofidismo en el Departamento del Cauca, Colombia.Epidemiología, Etiología, Clínica y Complicaciones. Rev. Fac. Cienc. Salud. Univ.Cauca, 2(4): 21-7.

Ayerbe, S. 2001. Tratamiento del Ofidismo en el Departamento del Cauca,Colombia. Rev. Fac. Cienc. Salud. Univ. Cauca, 3(1): 20-6.

Ayerbe, S.; F. Castro; F. J. López y F. Ayerbe. 2001. Nuevo récord de Micruruspara Colombia en el Valle del Cauca. In Press.


29

Badillo R, Casa M. 1989. Ofidotoxicosis en el Hospital Universitario RamónGonzález Valencia de Bucaramanga. Act Med Col 14:352.

Barnes, R. D . 1995. Zoología de los Invertebrados. México: EditorialInteramericana, 850 p.

Barraviera, B. e P. Camara-Marques-Pereira 1999. Acidentes por Serpentes doGênero Bothrops in: Barraviera, B. Venenos, Aspectos Clínicos e Terapêuticos,EPUB, pp.: 268, 272.

Barraviera, B. 1999. Acidentes por Serpentes dos Gêneros Crotalus e Micrurus eAcidentes por Serpentes do Gênero Lachesis in: Barraviera, B. Venenos, AspectosClínicos e Terapêuticos, EPUB, pp.: 283-6, 297.

Bogarín, G.; Segura, E.; Duran, G.; Lomonte, B.; Ro jas, G.; Gutiérrez, J.M.1995. Evaluación de la Capacidad de Cuatro antivenenos (anti-terciopelo) deCosta Rica. Instituto Clodomiro Picado, Facultad de Microbiología, Universidad deCosta Rica, San José Costa rica. Toxicon, vol.33, N° 9. p. 1242 – 1247.

Bolaños, R. 1982. Las serpientes venenosas de Centroamérica y el problema delofidismo. Primera parte. Aspectos zoológicos, epidemiológicos y biomédicos.Revista Costarricense de Ciencias Médicas 3: 165-184.

Bolaños, R., Marín, O., Mora, E. & Alfaro, E. 1981. El accidente ofídico porcascabela (Crotalus durissus durissus) en Costa Rica. Acta Médica Costarricense24: 211-

Bolaños, R., Rojas, O. & Ulloa, C.E . 1982. Aspectos biomédicos de cuatro casosde mordeduras de serpiente por Lachesis muta (Ophidia: Viperidae) en CostaRica. Revista de Biología Tropical 30: 53-76

Bolaños R. & Cerdas L. 1980. Producción y control de sueros antiofídicos enCosta Rica. Boletín de la Oficina Sanitaria Panamericana, 88: 189-196.

Campbell, J.A. and W.W. Lamar. 1989. The Venomous Reptiles of Latin America.Comstock/Cornell Univ. Press; pp.: 52 - 339.

Corporación Autónoma Regional de Caldas Corpocaldas . 2002 Agenda parala Gestión Ambiental del Municipio de Manizales. Manizales.

Corporaciones Autónomas Regionales de la Ecorregión Eje Cafetero . 2002.Agenda para el desarrollo sostenible de la ecorregión eje cafetero. Documentobase para la expresión de Acuerdos Regionales de Concertación. Publicaciónconjunta de las corporaciones autónomas regionales de Caldas, Risaralda yQuindío. Manizales.


30

Charry Restrepo Héctor. 2003. Ofidismo, síntesis de conceptos básicos.Memorias del I seminario nacional de medicina en fauna silvestre. Grupo deestudio de fauna silvestre Kumá. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia.Universidad de Caldas. Manizales.

Charry Restrepo Héctor. 2004. Aspectos biomédicos del accidente bothropico.Memorias del II seminario nacional y I internacional de medicina en fauna silvestre.Grupo de estudio de fauna silvestre Kumá. Facultad de Medicina Veterinaria yZootecnia. Universidad de Caldas. Manizales.

Chippaux, J.P. 1998. Snake-bites: appraisal of the global situation. Bulletin WorldHealth Organization vol. 76, pag. 515-524.

Dietrich, M. 1990. Use of Toxins in Neurobiology and Muscle Research, in K.F.,Stocker. Medical Use of Snake Venom Proteins, CRC Press, Boca Ratón Florida,pp. 58.

Eckert, R.; Randall, D. y Agustine, G. 1992. Fisiología Animal, Mecanismos yAdaptaciones. Madrid: Interamericana- McGraw-Hill. 683 p.

Ellenhorn, M.J. 1997. Ellenhorn’s Medical Toxicology. Second Ed. Williams andWilkins Co. Baltimore, Md.

Farmacopea Británica. (BP) 1973. University Printing House, Cambridge,London.

Farmacopea de los Estados Unidos. (USP) 2000. Edición 24. NationalPublishing, Philadelphia, U.S.A.

Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos. 1988. Comisión permanente dela Farmacopea de los E. U. Mexicanos, 5ta. Edición, México.

Fernando, M. and W. Gooneratne. 1983. Sea Snake Envenoming. The CeylonMed. J., 28 (3): 131-143.

Furukawa, K. and S. Ishimaru. 1990. Use of Thrombin-like Snake VenomEnzymes in the Treatment of Vascular Occlusive Diseases in: Stocker, K.F. (ed.)Medical Use of Snake Venom Proteins, CRC Press, Boca Raton, Florida. Pp.: 161-171.

García, E. 1896. Los Ofidios Venenosos del Cauca. Métodos Empíricos yRacionales Empleados contra los Accidentes de las Mordeduras Producidas poresos Reptiles. Librería e Imprenta de la Vda. de Ch. Bouret, Paris; 102 pp.

García-Osorio M. E. MD, MSc . 1989. Aspectos clínicos y epidemiológicos delaccidente ofídico en Antioquia y Chocó. Memorias Programa de ofidismo deAntioquia y Chocó, Universidad de Antioquia.


31

Gardiner, L. 1978. Biología de los Invertebrados. Barcelona : Editorial Omega,950 p.

Gómez Cabal Clemencia. 2003. El accidente ofídico en Colombia: un problemaque merece nuestra atención. Revista del Ministerio de Agricultura y DesarrolloRural, Colombia Agropecuaria, año IV, volumen 9. Bogotá.

Gómez Cabal Clemencia. 2003. Situación de la producción de suero antiofídicoen Colombia. Revista del Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural, ColombiaAgropecuaria, año IV, volumen 11. Bogotá.

Gómez Cabal Clemencia. 2003. El adecuado manejo del accidente ofídico: unreto para evitar secuelas y complicaciones. Revista del Ministerio de Agricultura yDesarrollo Rural, Colombia agropecuaria, año IV, volumen 12. Bogotá.

Gómez Cabal Clemencia. 2003. Laboratorios Probiol: una empresa 100%colombiana, comprometida con la salud y la vida de los colombianos. Revista delMinisterio de Agricultura y Desarrollo Rural, Colombia Agropecuaria, año IV,volumen 13. Bogotá.

Gómez Cabal Clemencia. 2004. Suero antiofídico en Colombia: una necesidadpuesta en evidencia por la muerte publicitada de una niña. Revista del Ministeriode Agricultura y Desarrollo Rural, Colombia Agropecuaria, año V, volumen 14.Bogotá.

Gómez Cabal Clemencia. 2006. Los “caballos locos” y las “serpientes locas” delInvima. Revista La Otra Verdad, año 3, número 16, mayo de 2006, Colombia, pp55 a 59.

Gonzalez-Sponga, M. 1996. Guía para Identificar Escorpiones de Venezuela.Cuadernos Lagoven, 204 p.

González-Vesga, G. y Méndez-Bravo Angela. 1994. Mordedura de Serpiente enNiños. Hospital Universitario R.G.V. 1983-1993, Bucaramanga, Santander (Col.).Hosmil Médica, 16 (2): 78-91.

Granados-Zúñiga J. 1998. Alteraciones cardiovasculares inducidas por el venenode Lachesis muta (serpientes: Viperidae) y por su enzima fibrinogenolítica. RevistaBiología Tropical diciembre 1998. 46(4): 1149 - 57.

Grenard, S. 1994. Medical Herpetology. Amphibians and Reptiles. Their Influenceon, and Relationship to Human Medicine. Reptile & Amphibian Magazine; pp : 53-115.

Gutberlet Jr. R. and J.A. Campbell. 2001. Generic Recognition for a NeglectedLineage of South American Pitvipers (Squamata: Viperidæ: Crotalinæ), with the


32

Description of a New Species from the Colombian Chocó. American MuseumNovitates, 3316:1-15, 6 Figs., 1 Table

Gutiérrez, J.M., B. Lomonte, Elsa Portilla, L. Cerd as and Ermila Rojas. 1983.Local Effects Induced by Coral Snake Venoms: Evidence of Myonecrosis afterExperimental Inoculations of Venoms from Five Species. Toxicon, 21 (6): 777-783.

Gutiérrez, J.M.; Rojas, G.; Aymerich, R . 1999. El envenenamiento ofídico enCentroamérica: Fisiología y Tratamiento. Instituto Clodomiro Picado, Universidadde Costa Rica p. 1 – 15.

Gutiérrez, J.M.; Lomonte, B.; Gene A. J.; Chávez, F .; Estrada, R.; Alvarado J.;Robles, A. 1990. El Suero antiofídico polivalente producido en Costa Rica.Estabilidad y Capacidad Neutralizante. Instituto Clodomiro Picado, Facultad deMicrobiología, Universidad de Costa Rica, San José Costa Rica. P. 155.

Gutiérrez JM, Arroyo O & Bolaños R. (1980). Mionecrosis, hemorragia y edemainducidos por el veneno de Bothrops asper en ratón blanco. Toxicon, 18: 603-610.

Gutiérrez JM, Rojas G, Lomonte B, Gené JA & Chaves F. (1990). La Evaluaciónde la Capacidad Neutralizante de los Antivenenos en América. Publicación offset,Universidad de Costa Rica, San José.

Gutiérrez JM, Chaves F & Bolaños R. (1980). Estudio comparativo de venenosde ejemplares recién nacidos y adultos de Bothrops asper. Revista de BiologíaTropical, 28: 341-351.

Gutiérrez JM, Chaves F, Bolaños R, Cerdas L, Rojas E, Arroyo O & Portilla E.(1981). Neutralización de los efectos locales del veneno de Bothrops asper por unantiveneno polivalente. Toxicon, 19: 493-500.

Halstead, B.W. 1988. Poisonous and Venomous Marine Animals of the World. TheDarwin Press Inc. Pp.: 1042 – 43, 1085 – 86.

Harborne, J. B. 1985. Introducción a la Bioquímica Ecológica. Madrid: EditorialAlhambra, 350 p.

Hardy, Sr., D.L. and Bush, S.P. 1998. Pressure/Immobilisation as First Aid forVenomous Snakebite in the United States. Herpetol. Rev. 29(4): 204-208.

Hardy, Sr., D.L. and Silva-Haad, J.J. 1998. A Review of Venom Toxinology andEpidemiology of Envenoming of the Bushmaster (Lachesis) with Report of a FatalBite. Bull. Chicago Herp. Soc. 33(6): 113-23.

Higgins, S.B. 1870. Culebras y Reptiles Venenosos. Imprenta de Gaitán, Santaféde Bogotá; 167 pp.


33

Hoehne, F.C. 1939. Plantas e Substâncias Vegetais Tóxicas e Medicinais. Ed.Graphicars, São Paulo – Rio. Pp.: 166-7.

Hoge, A.R. and Romano-Hoge, S.A.R.W.L. 1978-1979. Poisonous Snakes of theWorld. Part I. Checklist of the Pitvipers Viperoidea, Viperidæ, Crotalinæ.

Holstedge, C.P. et al . 1997. Crotalid Snake Envenomation. Medical Toxicology.13(4): 889-921.

Instituto Geográfico Agustín Codazzi. 1998. Atlas de Colombia, edición 2005.Bogotá.

Instituto Geográfico Agustín Codazzi. 1989. El departamento de Caldas.Características geográficas. Bogotá.

Instituto Geográfico Agustín Codazzi. 1989. El departamento del Quindío,Características geográficas. Bogotá.

Jaramillo S, Laverde DL, Tobón Y. 1989. Factores que influyen en la respuesta altratamiento de los accidentes ofídicos manejados en el Hospital Regional deVillavicencio durante los años 1983, 1987. Tesis de Grado. Facultad deEnfermería. Universidad Tecnológica de los Llanos. Villavicencio, 1989

Kouznetsov, V. 1998. Defensa Química en la Naturaleza. Bucaramanga. EditorialUniversidad Industrial de Santander, 203 p.

Lorenzi, H. 2000. Plantas Daninhas do Brasil. 3ª Ed. Inst. Plantarum de Estudosda Flora Ltda. pp.: 510.

Lorenzi, Therezinha F. 1999. Manual de Hematologia, 2ª. Ed. MEDSI, pp.: 200-1,523-7.

Mattison, C. 1995. The Encyclopedia of Snakes. Checkmark Books. Hong Kong;256 pp.

Medem, F. 1968. El Desarrollo de la Herpetología en Colombia. Rev. Acad. Col.de las Ciencias Exactas, Fís. y Nat.,13 (50): 149-99.

Memorias do Instituto Butantan, Vols. 42-43:179-310.

Memorias do Instituto Butantan, 1965. Vol. 32, 132 pp.; 1982. Vol. 46, 358.

Memorias del Primer Simposio Colombiano de Toxinolo gía. 1998. Toxinas yEnvenenamientos por Animales, Plantas y Microorganismos. Otero-Patiño, R.;Ángel-Mejía, R. y García, M.E. Editorial Ecográficas Ltda., Medellín; 276 pp.


34

Memorias del Instituto Bioclon. 1997. Bases para el tratamiento en laIntoxicación causada por mordeduras de Serpientes y picaduras de Alacrán.México.

Moreno Villa Pedro Juan. 2006. Las culebras “enroscadas” del Invima. Editor.Revista La Otra Verdad. Año 3, número 14, febrero de 2006, Colombia, pp 4 a 33.

Otero R, Tobón GS, Gómez LF, Osorio RG, Valderrama R, Hoyos D, UrretaJE, Molina S & Arboleda JJ. 1992. Accidente ofídico en Antioquia y Chocó.Aspectos clínicos y epidemiológicos (marzo de 1989-febrero de 1990). ActaMédica Colombiana, 17: 229-249.

Otero R, Valderrama R, Osorio RG & Posada LE . 1992. Programa de atenciónprimaria del accidente ofídico. Una propuesta para Colombia. Latreia, 5: 96-102.

Otero R, Osorio RG, Valderrama R & Giraldo CA . 1992. Efectos farmacológicosy enzimáticos de los venenos de serpientes de Antioquia y Chocó (Colombia).Toxicon, 30: 611-620.

Otero-Patiño, R. 1994. Manual de Diagnóstico y Tratamiento del AccidenteOfídico. Editorial Universidad de Antioquia, Yuluka /Medicina; 87 pp.

Otero-Patiño, R., R. Fonnegra y S. L. Jiménez. 2000. Plantas Utilizadas contraMordeduras de Serpientes en Antioquía y Chocó, Colombia. Grandacolor,Medellín; 402 pp.

Parra, J.H. y S. Virsano. 1994. Por el Camino Culebrero. Etnobotánica y Medicinade los Indígenas Awá del Sábalo (Nariño). Ediciones Abya-yala; 247 pp.

Peters, J.A. and Donoso-Barros, R. 1986. Catalogue of the NeotropicalSquamata. Part I. Snakes. Smithsonian Institution Press, Washington, D.C.; 347pp.

Peters, J.A. and Orejas-Miranda, B. with new materi al by Vanzolini, P.E. 1986.Catalogue of the Neotropical Squamata. Part II. Lizards & Amphisbaenians.Smithsonian Institution Press, Washington, D.C.; 347 pp.

Pineda Daniel. 2002. Accidentes por animales venenosos. Publicación delInstituto Nacional de Salud. Bogotá.

Polis, G . 1990. The Biology of Scorpions. Standford: Standford University Press,450 p.

Pott, A. e V.J. Pott. 1994. Plantas e aniamis do Pantanal. Empresa Brasileira dePesquisa Agropecuária (EMBRAPA), Centro de Pesquisa Agropecuária doPantanal (CPAP). pp.: 238 – 39.


35

Renjifo, J.M. 1998. Ranas y Sapos de Colombia. Editorial Colina, Medellín,Colombia; 160 pp.

Renjifo, J.M. y M. Lundberg. 1999. Anfibios y Reptiles de Urrá. Editorial Colina,Medellín, Colombia; 96 pp.

Rojas, G., Bogarín, G. & Gutiérrez, J.M. 1997. Snakebite mortality in Costa Rica.Toxicon vol. 35, pag 1639-1643.

Roze, J.A. 1982. New World Coral Snakes (Elapidæ) . A Taxonomic andBiological Summary . Mem. Inst. Butantan, 46: 305-338.

Roze, J.A. 1996. Coral Snakes of the Americas. Biology, identification andvenoms; Struik Publ. Co. Malabar, Florida. 328 pp.

Saborío, P., González, M. & Cambronero, M. 1998. Accidente ofídico en niñosen Costa Rica: epidemiología y detección de factores de riesgo en el desarrollo deabsceso y necrosis. Toxicon vol. 36, pag. 359-366.

Schmidt-Nielsen, K. 1976. Fisiología Animal, Adaptación y medio ambiente.Barcelona. Omega. 499 p.

Salcedo Vélez P. 2004. Accidente Ofídico. En “Guías para la Atención deUrgencias”, capítulo XX, pp 1033 a 1044. Ministerio de la Protección Social.Colombia

Silva-Hadd JJ. 1989. Las serpientes del género Bothrops en la Amazoníacolombiana. Act Med Col 14:148.

Silva-Haad, J.J. 1981. Accidentes Humanos por las Serpientes de los GénerosBothrops y Lachesis. Mem. Inst. Butantan, 45: 403-423.

Silva-Haad, J.J. 1994. Los Micrurus de la Amazonía Colombiana. Biología yToxicología Experimental de sus Venenos. Colombia Amazónica, 7(1-2): 41-138.

Silva-Haad, J.J. 1998. Un caso por mordedura de la especie Thamnodynastespallidus (Serpentes: Colubridæ). Primer Simposio Colombiano de Toxinología,Medellín. Memorias, pp.: 87 – 89.

Stocker, K. 1990. Snake Venom Proteins Affecting Hemostasis and Fibrinolysis in:Stocker, K.F. (ed.) Medical Use of Snake Venom Proteins, CRC Press, BocaRaton, Florida. Pp.: 130-147.

Sutherland, S. K., A. R. Coulter and R. D. Harris. 1979. Rationalization of First-Aid Measures for Elapid Snakebites. Lancet 1:183-86.


36

Tu, A.T.; T.S. Lin and A.L. Bieber. 1975. Purification and ChemicalCharacterization of the Major Neurotoxin from the Venom of Pelamis platurus.Biochemistry, 14: 3408 – 3413.

U.S. Department of the Navy (Boureau of Medicine an d Surgery). 1991.Poisonous Snakes of the World. Dover Publications, Inc. New York; 203 pp.

Vázquez-de Kartzow, A.R. 1995. Mordedura de Serpientes Venenosas Ed.Rosaristas, Santafé de Bogotá, D.C.; pp. 19-46.

Villota, L.F. 2003. Accidentes ofídicos (ofidiotoxicosis). En: Conceptos entraumatología. Echeverry y Gerstner. Bogotá.

World Health Organization. 1981. Progress in the Characterization of Venomsand Standardization of Antivenoms. WHO. Offset Publication, 58, Geneva.

Manizale s (Caldas) Colombia.

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