ENZIMOLOGIA e BIOQUMICA CLNICAPUCPR 2009 Profa. Mauren Isfer

Protenas catalisadoras que aumentam a velocidade das reaes sem serem, elas prprias, alteradas nesse processo

[S] + [E]

[ES]

[P]

1. No geram sub-produtos indesejveis; 2. Atuam em condies brandas de pH, temperatura e presso; 3. Especificidade pelo substrato; 4. Controle das vias metablicas.

ENZIMASESTRUTURA das ENZIMAS Todas possuem estrutura 1, 2, 3 A maioria possui estrutura 4 (associao de subunidades ou protmeros) A alterao da estrutura acompanha-se de perda de atividade irreversvel)

ENZIMASISOENZIMAS

Enzimas com estrutura primria (seqncia de AA) diferente, catalisando a mesma reao (mesma funo), codificadas por genes estruturais diferentes. Formas moleculares mltiplas de uma enzima.Isoenzimas diferentes podem originar-se de tecidos diferentes, e sua determinao especfica pode fornecer pistas em relao ao stio da patologia. Isoenzimas genticas e no genticas (isoformas modificao ps-transduo)

desnaturao (reversvel ou

ENZIMASESPECIFICIDADE

ENZIMASCLASSIFICAO em RELAO s REAES QUMICAS CATALISADAS

A zona sombreada so os aminocidos desta enzima (protena) que configuram, neste caso, o centro ativo da enzima

1

ENZIMASCLASSIFICAO em RELAO AO SEU LOCAL

ENZIMAS PLASMTICASFatores que afetam os nveis enzimticos no plasma ou no soro

1) Enzimas especficas do plasmaTrombina, plasmina, lipoprotena lipase.

Presente em concentrao mais elevada, especfica do plasma e tem papel funcional no plasma.

2) Enzimas secretadas* 3) Enzimas celulares*LDH, FAL, AST, ALT.

Lipase, amilase, colinesterase.

* Normalmente esto em concentrao muito baixa e no tem papel funcional no plasma. Aparecem no sangue incidentalmente e tem valor diagnstico.

A leso dos tecidos de origem ou a proliferao aumentada das clulas de onde surgem estas enzimas levaro a um aumento da atividade dessas enzimas no plasma.

ENZIMAS de DIAGNSTICOPara que o diagnstico do envolvimento de um rgo seja feito atravs de enzimas, deve-se: Conhecer a proporo entre as enzimas, que difere de tecido para tecido; Conhecer a cintica do aparecimento e desaparecimento da enzima no plasma. Enzimas que no so especficas do plasma so depuradas do plasma em velocidades variveis (estabilidade da enzima e captao pelo sistema retculo-endotelial).

ENZIMAS de DIAGNSTICOPrincipais enzimas utilizadas no diagnstico de doenas so:Fosfatase cida AST/TGO ALT/TGP GGT Amilase Lipase CK LDH Fosfatase Alcalina

Fosfatase cida Maiores concentraes: prstata, no fgado, na medula ssea, nos eritrcitos e plaquetas.

Fosfatase Alcalina Maiores concentraes: presente em praticamente todos os tecidos do organismo, especialmente nas membranas das clulas dos tbulos renais, ossos (superfcie dos osteoblastos), placenta, trato intestinal e fgado. Funo: transporte de lipdios no intestino e nos processos de calcificao ssea.

frao no-prosttica: crianas em fase de crescimento e patologicamente aumentada em condies em que existe um hipermetabolismo sseo.

Utilidade diagnstica:

diagnstico e monitoramento da resposta ao tratamento e monitoramento de metstases, no CA de prstata.

2

Fosfatase Alcalina Utilidade Diagnstica: doenas sseas que cursam : com aumento da atividade osteoblstica e na investigao de doenas hepatobiliares.A resposta heptica a qualquer tipo de agresso da rvore biliar sintetizar fosfatase alcalina principalmente nos canalculos biliares.

TGO ou AST Maiores

Transaminase Glutmico Oxalactica / Aspartato Amino Transferase

concentraes: encontrada em diversos rgos e tecidos, incluindo corao, fgado, msculo esqueltico e eritrcitos.

Citoplasma e mitocndrias UtilidadeDiagnstica: hepatites virais agudas, hepatites alcolicas, metstases hepticas e necrose medicamentosas e isqumicas, e infarto agudo do miocrdio.

Recm-nascidos,

crianas, e especialmente adolescentes, apresentam valores significativamente mais elevados do que os adultos, devido ao crescimento sseo.

TGP ou ALT Maiores

Transaminase Glutmico Pirvica / Alanina Amino Transferase

CPK ou CK

Creatino fosfoquinase ou Creatino-quinase

concentraes: fgado, rim e em pequenas quantidades no corao e musculatura esqueltica.

Maiores concentraes: vasta distribuio tissular, estprincipalmente na musculatura cardaco e no crebro. estriada, no tecido

fazendo com que se eleve rapidamente aps a leso heptica (marcador sensvel da funo heptica). do hepatcito (hepatites virais, mononucleose, citomegalovirus e hepatites medicamentosas).

Sua origem predominantemente citoplasmtica,

So encontradas no citosol ou associadas com estruturas miofibrilares, e so liberadas no sangue aps dano ao tecido. Utilidade Diagnstica: leses da esqueltica e infarto agudo do miocrdio.musculatura

Utilidade Diagnstica: patologias que levam a necrose

3 isoformas = CK-1 (CK-BB) CK-2 (CK-MB) CK-3 (CK-MM)

CPK ou CK

Creatino fosfoquinase ou Creatino-quinase

CPK ou CKDistrofia muscular de Duchenne, miosites, traumas musculares, injees intramusculares recentes CK-MB / CK-2 CKCK% 1 22 2a3 0 CK-MM CK-3 CKCK% 99 77 0 4

Creatino fosfoquinase ou Creatino-quinase

Seus

TECIDO Musculatura Esqueltica Esquel Miocrdio Mioc Crebro Estmago, leo e clon c

CK-BB / CK-1 CKCK% 0 1 97-98 9796 AVC, tumor no crebro

nveis sricos podem estar diminudos em situaes nas quais ocorra perda de massa muscular.

O valor de referncia para a CK total bastante ampla, variando com idade, estatura, atividade fsica e volume da massa muscular.

Infarto, miocardite

3

CPK ou CK

Creatino fosfoquinase ou Creatino-quinase

LDH ou DHL Maiores

Lactato Desidrogenase ou Desidrogenase ltica

concentraes: vasta distribuio tissular, concentrando-se no miocrdio, rim, fgado, hemcias e msculo.

Utilidade Diagnstica: seus valores encontram-se elevados em todas as situaes em que ocorre grande destruio celular.5 isoformas = HHHH (LDH1), HHHM (LDH2), HHMM (LDH3), HMMM (LDH4), MMMM (LDH5).(Anemia hemoltica, infarto agudo do miocrdio, infarto pulmonar, doenas musculares, leses hepticas, neoplasias primrias ou secundrias (metastsicas), hepatites)

LDH ou DHL

Lactato Desidrogenase ou Desidrogenase lticaBURTIS, Carl A e ASHWOOD, Edward R. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3 ed. Saunders: Philadelphia, 1999, p.641.

Enzima

t (horas)50 12 14 6 107 10

PM 110 000 ---120 000 100 000 135 000 135 000

ALT AST citoplasmticamitocondrialIsoenzimas da lactato desidrogenase O contedo da isoenzima LDH varia por tecido. A figura mostra as formas especficas de LDH em tecidos adultos de rato.

mix aps IAM

2 cadeias polipeptdicas diferentes H: heart / M: muscle

LD

LD-1 (cardaca) LD-5 (heptica

RESUMO - DISTRIBUIO DAS ENZIMAS DE IMPORTNCIA DIAGNSTICAENZIMA ALT/TGP AST/TGO FONTES PRINCIPAIS Fgado, msculo esqueltico, corao Fgado, msculo esqueltico, corao, rim, hemcias Fgado, osso, mucosa intestinal, placenta, rim Fgado, rins Glndulas salivares, pncreas, ovrios Pncreas; mucosas gstrica, pulmonar e intestinal; glndulas da lngua Msculo esqueltico, crebro, corao, msculo liso Corao,fgado,msculo esqueltico, hemcias, plaquetas, linfonodos PRINCIPAIS APLICAES CLNICAS Doena heptica parenquimatosa Infarto do miocrdio, doena heptica parenquimatosa, doena muscular Doenas sseas, doenas hepatobiliares Doenas hepatobiliares; alcoolismo Doenas pancreticas Doenas Pancreticas

Enzima mix aps IAM CK CK-3 (MM) CK-2 (MB) CK-1 (BB)

t (horas)12 20 10 3