Faculdade de Medicina daUniversidade de Coimbra

Seminário Orientado nº3

7-10-2009

Mestrado Integrado em Medicina – Bioquímica I

Ana SousaFilipa Sousa

Filipa CarvalhoFilipa Sotero

Filipa ReisAna Lopes

Ana MoreiraAna Augusto

Filipa Figueiredo

1. Analisar diferentes métodos para extracção de lípidos em amostras biológicas;

2. Discutir diferentes métodos de análise de lípidos, incluindo a sua identificação;

3. Explicar exemplos do estudo de lípidos para o diagnóstico em Medicina.

Aspectos a ter em conta: As características dos lípidos facilitam a separação de proteínas e açúcares;

A polaridade dos grupos químicos do lípido condiciona a polaridade do solvente; lípidos com grupos polares são mais solúveis em álcoois do que em hexano.

Pode ser necessário quebrar ligações com outros componentes da molécula.

Preparação das amostras para extracção: Evitar as condições oxidantes no armazenamento (oxigénio, luz e temperatura);

Pré-secagem;

Moagem;

Hidrólise ácida.

Extracção contínua: Método de Goldfish

Extracção semicontínua: Método de Soxhlet

Extracção descontínua: Método de Mojonnier e Método de Roese-Gottlib

Extracção de alta pressão:

Extracção acelerada com solventes

Extracção com fluidos supercríticos

Método de Bligh-Dyer e Método Reed et al.

Solventes mais comuns

éter etílico;

éter de petróleo;

hexano;

pentano;

clorofórmio;

acetona;

benzeno.

Lípidos apolares solventes apolares (hexano, éteres)

Lípidos polares misturas de solventes polares e apolares (metanol, clorofórmio)

Características ideais do solvente:- Grande poder solvente;

- Não solubilizar proteínas, aminoácidos e hidratos de carbono;

- Evaporar rapidamente;

- Penetrar rapidamente nas partículas da amostra;

- Não inflamável;

- Atóxico;

- Baixo custo;

- Não higroscópico (sem capacidade de reter água).

MÉTODO DE GOLDFISH Utiliza refluxo de solvente para extracção;

Processo de extracção contínuo, logo, mais rápido;

Pode ser utilizado somente com amostras sólidas.

Vantagem: utiliza menos solvente e é mais rápido,

pois, sendo contínuo, faz com que a amostra esteja

permanentemente em contacto com o solvente.

Desvantagem: o contacto do solvente muito quente

com a amostra pode levar à degradação da gordura.

% Lípidos = peso final balão – peso inicial balão x 100 peso amostra

Adap

tado

de

Inar

Cas

tro,

200

6 (F

ac. C

iênc

ias F

arm

, Uni

vers

idad

e Sã

o Pa

ulo)

.

MÉTODO DE SOXHLET Utiliza refluxo de solvente para extracção;

Processo de extracção intermitente;

Só pode ser utilizado com amostras sólidas;

A quantidade de solvente é maior para que o volume

total seja suficiente para atingir o sifão do equipamento.

Vantagem: a amostra não fica em contacto directo com o

solvente em ebulição, evitando-se a decomposição dos

lípidos.

Desvantagem: possível saturação do solvente o que

dificulta a extracção.

gian

garlo

scie

ntific

.com

Legenda:

(1) recipiente do solvente

(2) recipiente de extracção

(3) funil

(4) condensador

MÉTODO DE BLIGH-DYER

Utiliza uma mistura a frio de três solventes: clorofórmio, metanol e água;

As amostras são avaliadas quanto ao nível de peroxidação e perfil de ácidos gordos;

Pode ser usada para qualquer tipo de amostra (seca ou húmida).

Procedimento:

Adaptado de Inar Castro, 2006 (Fac. Ciências Farm, Universidade São Paulo).

Métodos de Babcock e de Gerber:

Digestão com ácido

Adição de álcool isoamílico (Gerber)

Colocação em recipiente de medida

Centrifugação e leitura

Métodos instrumentais:

Ressonância magnética nuclear

Medida da constante dieléctrica

Espectroscopia de infravermelho

Medidas de densidade

Medidas da velocidade do som

Método colorimétrico (reacção com o ácido hidroxâmico)

MÉTODO DE GERBER

Apenas utilizado em leite e produtos lácteos.

Estrutura do leiteEmulsão

x1

x1000

X10000

Filme proteico

Digestão proteica(libertar gordura)

Ácido sulfúrico / álcool isoamílico

Centrifugação directa no butirómetro a 71ºC

Leitura final no butirómetro

Método físico-químico de separação baseado na migração diferencial dos componentes

de uma mistura devido a diferentes interacções entre uma fase móvel e outra

estacionária.

Cromatografia Gasosa

Cromatografia Líquida de Alta Eficiência

Cromatografia em Camada Fina

Crom. gás-sólido ou de partição

Crom. gás-líquido ou de

absorção

Crom. Gasosa de alta resolução

Cien

ciam

ao.if

.usp

.br

Permite fazer a análise do teor lipídico de amostras biológicas, incluindo alimentos:

Padrões de identificação e rotulagem;

Investigação e diagnóstico.

Horti

bras

il.or

g.br

ESTUDO DOS LÍPIDOS E DIAGNÓSTICO EM MEDICINA

Hipo ou Hipertiroidismo a glândula da tiróide exerce controlo sobra a concentração de

lípidos no plasma sanguíneo. Hipotiroidismo – lipaemia; Hipertiroidismo – lipopenia;

Doenças do sistema nervoso central a desregulação do metabolismo dos lípidos pode

influenciar distúrbios neurológicos: bipolaridade e esquizofrenia, e doenças neurodegenerativas:

Alzheimer, Parkinson e Niemann Pick;

Fibrose cística relacionada com dislipidemia hipertrigliceridemia, diminuição da ácidos

gordos essencias (hipocolesterolemia normalmente) ;

Hipercolesterolemia familiar deficiência do metabolismo lipídico, nomeadamente o

transporte e metabolismo do colesterol .

NELSON, David L.. COX, Michael M.. Lehninger: Principles of Biochemistry. Nova Iorque: W. H. Freeman and Company. Fifth Edition.

SILVA, Ana. (2008). Notas de campo. Disciplina de Bioquímica. (Não publicado)

MURRAY, Robert K.. GRANNER, Daryl K. et all.(1998). Bioquímica de Harper. México: El Manual Moderno. 11ª edição.

Suporte informático

http://www.uac.pt/~barreto/bqm_prat/prot04aExt_lipidos_introd.pdf

http://www.gipescado.com.br/arquivos/met_fis-qui_ial/cap25.pdf

http://www.sitebiomedico.hpg.ig.com.br/proteinas.htm

http://ojs.c3sl.ufpr.br/ojs2/index.php/alimentos/article/view/7489/5359

http://www.aapsj.org/view.asp?art=aapsj080236

Suporte escrito