Imunofluorescência indireta

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    20-Jul-2015
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UNIVERSIDADE FEDERAL DA PAR INSTITUTO DE CINCIAS DA SADE ICS NCLEO DE MEDICINA TROPICAL

Trabalho realizado pela Acadmica de Farmcia da UFPA Thas Luiza de Almeida Correa Lima.

Caractersticas Bsicas Permite deteco e

localizao; Marcados com

fluorocromo; Anticorpos ligam-se

fluorocromos covalentemente;

Caractersticas Bsicas Teste qualitativo/ Semi-quantitativo;

Mtodo de alta sensibilidade e alta especificidade; Feita em lminas de microscopia; e Visualizao em microscpio com luz UV.

Caractersticas Bsicas FLUOROCROMOS: So empregados conjugados constitudos de anticorpos

ligados covalentemente a molculas reveladoras; Fluorocromos so substncias q absorvem luz

ultravioleta e emitem luz visvel, os seja, ficam fluorescentes.

Tipos de

Reao:

Deteco de Ag

Deteco de Ag

Deteco de Ac

DIRETA

INDIRETA

PARA A PESQUISA DE ANTGENOS Incuba-se a clula ou tecido em que se quer pesquisar o antgeno com o anticorpo especfico obtido em animal ou um monoclonal, levando formao de um imunocomplexo. Realiza-se lavagem para retirada do anticorpo no ligante excedente. A preparao incubada com um conjugado antiimunoglobulina, marcado com fluorocromo, produzido em outra espcie de animal. O preparado observado em microscpio de fluorescncia.

Y Y Y Y Y Y Y Y Y YAntgeno pesquisado

Y Y

Conjugado Anticorpo Monoclonal

PARA A PESQUISA DE ANTICORPOS Antgenos padronizados so fixados a lminas de vidro. O soro do paciente diludo, colocado sobre o antgeno e incubado para permitir a formao do complexo antgeno-anticorpo. Realizam-se lavagens para a retirada dos anticorpos no ligados. A preparao incubada com o conjugado fluorescente e, se houver anticorpo no soro, o conjugado reage com o anticorpo especfico para o antgeno.

Y Y Y Y Y Y Y Y Y YAntgeno padronizado

Y Y

Conjugado Anticorpo pesquisado

Observa-se o preparado em microscpio de fluorescncia.

VANTAGENS

Sensibilidade;Especificidade; Reprodutibilidade; De simples padronizao e execuo; O mesmo conjugado pode ser usado em sistemas diferentes; Para determinar as classes e subclasses de anticorpos so utilizados conjugados especficos.

DESVANTAGENS Necessidade de microscpio de fluorescncia;

Subjetividade na leitura;No-automao.