Hoehnea 33(3): 349-357, 5 tab., 4 fig., 2006

Melhoramento genetico de Pleurotus ostreatus (Jacq. : Fr.) Kumm.por cruzamentos multisporicos visando a obten~ao de

isolados resistentes ao calor

Regina Helena Marino l,3, Augusto Ferreira da Eira2 e Elvio Queiroz Cardos02

Recebido: 13.09.2005; aceito: 14.06.2006

ABSTRACT - (Genetic breeding ofPleurotus ostreatus (Jacq. : Fr.) Kumm. by multisporic crossing aiming to obtain resistantneat strains). The cultive of Pleurotus ostreatus requires low temperature for basidioma induction and development. Theaim of this work was genetic breeding seeking P ostreatus heat resistance. Parental isolates were composed of seven darklineages that are fruitful in low temperature and a white lineage that is fruitful in high temperature. Genetic breeding wasperformed using multisporic crossings and genetic stability was evaluated in three re-isolation cycles. From 533 crossings,32.9% fructified at 28°C. Sixteen isolates were selected with gray pileus at 28 °C precocious and high biological efficiency.Parental isolates were improved concerning heat resistance (28 0q, pileus coloration, primordial formation precocity,biological efficiency and handling resistance.Key words: edible mushrooms, genetic breeding, Pleurofus

RESUMO - (Melhoramento genetico de Pleurotus ostreatus (Jacq. : Fr.) Kumm. por cruzamentos multisp6ricos visandoa obtenyao de isolados resitentes ao calor). 0 cultivo de Pleurofus osfreafu exige baixa temperatura para induyao edesenvolvimento dos basidiomas. Com 0 objetivo melhorar geneticamente P oSfreafus visando a resistencia ao calor foramutilizados como parentais sete isolados que frutificam a baixa temperatura e uma linhagem branca que frutifica atemperaturaelevada. 0 melhoramento genetico foi realizado por cruzamentos multisp6ricos e a estabilidade genetica avaliada em tresciclos de reisolamentos. Dos 533 cruzamentos, 32,9% frutificaram a 28°C. Dezesseis isolados que apresentaram pileo cinzaa 28°C, precocidade elevada e eficiencia biol6gica, foram selecionados. Os isolados parentais foram melhorados quanta aresistencia ao calor (28 0q, colorayao do pileo, precocidade na formayao dos prim6rdios e colheita, eficiencia biol6gica eresistencia ao manuseio.Palavras-chave: cogumelos comestiveis, melhoramento genetico, Pleurofus

Introdu~ao

Pleurotus ostreatus e um cogumelo comestivel

com grande interesse biotecnol6gico devido a sua

habilidade decompositora de inumeros residuos

agricolas e pela produc;;ao de basidiomas de alta

qualidade organoleptica (Rajarathnam & Bano 1987).No Brasil, este cogumelo vern ganhando

importiincia, principalmente no Estado de Sao

Paulo, com a introduc;;ao de isolados provenientes

do Japao. Entretanto, estes isolados sao adaptados

a zona temperada, onde as especies selvagensnormalmente sao cultivadas no outono, pelosistema axenico (substrato autoclavado), por

apresentar uma produc;;ao mais regular e mais

precoce, quando comparado com 0 sistema natural,

que utiliza substrato compostado e pasteurizado

(Eira 2004).Por outro lado, hei relatos de uma variedade

de P ostreatus, a var.jlorida, capaz de frutificar emtemperaturas acima de 25°C (Eger et al. 1978) e urnisolado da Tailiindia tambem resistente a temperaturaelevada (Kinugawa et al. 1997). Eger et af. (1978) eKinugawa et al. (1997) relataram que os cogumeloscultivados em temperatura elevada apresentam pileobranco. No Brasil, os principais consumidores destetipo de cogumelo exigem basidiomas de colorac;;aocinza a cinza-chumbo.

I. Universidade Federal de Sergipe, Departamento de Engenharia Agronomica, 49100-000 Sao Crist6vao, Sergipe, Brasil2. Universidade Estadual Paulista, Faculdade de Ciencias Agronomicas, Departamento de Produ<;ao Vegetal, Caixa Postal 237, 18610-307

Botucatu, SP, Brasil3. Autor para correspondencia: rehmarino@yahoo.com

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Material e metodos

Tabela I. Caracterizac;:ao dos isolados parentais de Pleura/usas/rea/us usados nos cruzamentos, quanto atemperatura de fru­tificac;:ao'. I Fonte: Marino e/ al. (2003); n.f. - nao frutificou.

Desta forma, e desejavel 0 melhoramento geneticovisando aobtenyao de isolados de P ostreatus resistentesao calor, com pHeo cinza a cinza-churnbo, mais adaptadosao clima tropical e subtropical e ao cultivo axenico,podendo propiciar 0 cultivo em periodos mais amplos enao apenas no invemo, com maior produtividade e custosde produyao reduzidos. Isto possibilitara ao consumidorter maior oferta e acesso a um alimento rico em proteinas,representando urn avanyo na produyao e comercializayaodeste tipo de cogumelo.

Origem dos isolados parentais - Os isolados usadosneste estudo estao listados na tabela I.Produyao de basidiomas dos isolados parentais- Os isolados foram multiplicados em meio decultura SDA (59,8% de serragem de Eucalyptus spp.suplementada com 20% de farelo de trigo, 20% defarelo de arroz e 0,2% de calcaria; 109 dextrose; 13 gagar), segundo a metodologia de Eira & Minhoni(1997) e incubados a 25 ± I °C por uma semana.Em seguida, foram cultivados em substrato a basede serragem de Eucalyptus spp. suplementada comfarelos na mesma proporyao descrita para 0 meiode cultura. A produyao foi realizada em camaracl imatizada, a temperatura de 15 ± 5°C, comluminosidade de 26 x 106 fluxo m2

, fotoperiodo de12 he umidade relativa de 85-90%.

A induyao de prim6rdios foi realizada ap6s acompleta colonizayao do substrato (30 dias), pelaretirada da tampa e pelo acrescimo de uma laminad'agua de 2 a 3 cm de espessura, durante 4 horas. Emseguida, foi retirado 0 excesso de agua e os frascostransferidos para camaras de frutificayao.

Cruzamentos multisp6ricos - Os basidiomasdesenvolvidos foram transferidos, individualmente,para placas de Petri, previamente autoclavadas.Posteriormente, em condiyoes assepticas, osesporos foram coletados segundo a metodologiade Fritsche (1978). A partir dos esporos obtidos,foram feitas suspensoes, utilizando-se 2 mL deagua destilada autoclavada e, em seguida, foramrealizados os cruzamentos. Fixou-se 0 isolado F(Pos 98/37), por ser 0 unico a frutificar a 28°Ce apresentar polimorfismo genetico atraves deanalise previa de RAPD (Marino et al. 2003). Oscruzamentos foram realizados atraves da misturade 1 mL da suspensao de esporos do isolado Fcom 1 mL da suspensao do isolado a ser cruzadoe, com auxilio de uma alya em "0", foi transferidauma gota desta suspensao mista para 0 centrode uma placa de Petri com SDA e incubados poruma semana a 28 ± 1°C, no escuro. Durante 0

periodo de colonizayao formaram-se setores comcrescimento micelial diferente, que foram isoladose identificados por urn numero seqiiencial ap6sa letra do isolado (A a H) seguido pela letra F(isolado fixo, Pos 98/37).Avaliayao dos cruzamentos em condiyoes delaborat6rio - Os cruzamentos foram avaliados,quanta a induyao de prim6rdios, em camarasde crescimento com temperatura de 28 ± 5°C,intensidade luminosa de 26 x 106 fluxo m2

,

fotoperiodo de 12 h e umidade relativa de 85-90%.Foram realizadas tres repetiyoes por cruzamento.Avaliayao dos setores quanta it uniformidade dascolonias - Os setores foram avaliados, quanta ituniformidade da colonia (circular ou irregular)e possiveis setoriamentos, em meio de culturaSDA a temperatura de 28 ± 1°C, em camara decresci mento, durante ate 7 dias, com tres repetiyoes.Para tanto, as colonias foram fotografadas comcamara digital PhotoWise Agfa 1.280 na resoluyao307S de 0,81 mega pixels.Avaliayao dos setores selecionados em condiyoesde produyao - Os isolados que apresentaramcolonias circulares e resistencia ao calor foramselecionados e avaliados em camaras climatizadasde produyao, em serragem suplementada comfarelos, na mesma proporyao descrita para 0 meiode cultura. 0 cultivo foi realizado atemperatura de28 ± 5°C, com luminosidade de 3,5 x 106 fluxo m2

,

fotoperiodo de 12 h e umidade relativa de 85-90%,com 10 repetiyoes.

n.f.n.f.n.f.n.f.n.f.

pileo albinon.f.n.f.

pileo cinza a cinza-chumbopileo cinza a cinza-chumbopileo cinza a cinza-chumbopfleo cinza a cinza-chumbopileo cinza a cinza-chumbo

pileo cinzapileo cinza a cinza-chumbopfleo cinza a cinza-chumbo

15 ± 5 °C 28 ± 5 °C

Temperatura de frutificac;:ao

Pos 96/05Pos97/12Po 97/14Pos97/l5Pos 97/17Pos 98/37Pos 98/38Pos 98/40

ABCDEFGH

Sigla C6digo daMicoteca

R.H. Marino, A.F. Eira & E.Q. Cardoso: Melhoramento genetico de Pleuratus astreatus (Jacq. : Fr.) Kumm. 351

o micelio resultante dos cruzamentos, ap6s aprodu<;ao, foi cultivado durante tres ciclos sucessivos.A cada cicio de reisolamento avaliou-se a precocidadena fonna<;ao de prim6rdios e de colheita, a eficienciabiol6gica e as caracteristicas fenotipicas.Caracteriza<;ao molecular dos isolados parentaise recombinantes - Os isolados parentais e osrecombinantes de pteurotus ostreatus foramcaracterizados pelo metodo RAPD (Williams et at.1990), com extra<;ao e quantifica<;ao do DNA segundoa metodologia de Sadowsky et at. (1987) e Kuramae­Izioka (1997).

Os "primers" testados obtidos da Operonforam OPA-Ol a 20, OPB-Ol a 19, OPG-04 a 18,OPP-OI a 14,OPX-Ol a08.Asrea<;oesdeamplifica<;aoforam realizadas no tennociclador (M] research) deacordo com Williams et at. (1990). As amostrase 0 marcador molecular Ladder I Kb (Gibco BRLLife Technologies, Inc.) foram analisados em gelde agarose 1,5% em solu<;ao TBE (0, I M Tris-HCI,0,1 M acido b6rico, 0,02 mM EDTA, pH 8,0)contendo 1°flL de brometo de etidio (10 flg mL- I

). 0gel foi submetido it corrida eletroforetica em tampaoTBE, com aproximadamente 120 V por 3 horas. Osgeis foram fotografados sob luz ultravioleta.

Na analise de polimorfismo entre os parentais e osrecombinantes foram selecionados os primers OPA­03, OPB-I°e OPX-08 e construido 0 dendrograma.

Para tanto, a compara<;ao entre isolados foi realizadapara cada "primer" com base na presen<;a (1) ouausencia (0) de produtos amplificados de mesmotamanho. As bandas de mesmo tamanho foramconsideradas identicas. A similaridade geneticaentre os isolados foi calculada usando 0 programa"Numerical Taxonomy and Multivariate AnalysisSystem" (NTSYS), com 0 coeficiente "SimpleMatching" (SM) e a constru<;ao do dendrograma pelometoda UPGMA ("Unweighted Pair-Group MethodArithmetic Average").

Resultados e Discussao

Foram obtidos 533 cruzamentos e desses12 foram perdidos por contamina<;ao. Dessescruzamentos multisp6ricos 59,4% fonnaram coloniasuniformes circulares com crescimento micelialdiferenciado entre os recombinantes (figuras I, 2).Este comportamento tambem foi observado porHorgen et Cli. (1996), com isolados de Agaricusbisporus originarios de culturas multisp6ricas.

Elliott & Langton (1981) mencionaram que asele<;ao de novos isolados nao deve ser prontamentecomercializada a partir de resultados em placas dePetri, pois 0 crescimento micelial nesta fase nao estacorrelacionado com 0 potencial de produ<;ao. Noentanto, 0 acompanhamento do crescimento micelial

Figura I. Col6nias estaveis e circulares dos recolllbinantes, obtidas dos cruzamentos mllitisp6ricos entre isolados de Pleura/us as/rea/us(Isolados parentais: A - Pos 96/05; D - Pos 97/15; E - Pos 97/17; F - Pos 98/37).

Figura 2. Col6nias dos recombinantes, apresentando setores obtidas dos cruzamentos 1ll1litisp6ricos entre isolados de Pleura/us as/rea/us(Isolados parentais: A - Pos 96/05; C - Pos 97/14; D - Pos 97/15; F - Pos 98/37).

produzir cogumelos a 28°C, apresentou apenas50% de similaridade genetica com os parentaisescuros (figura 3).

o sucesso dos cruzamentos multisp6ricos, emtermos geneticos, pode ser evidenciado pelo fato deque 32,9% dos recombinantes induziram prim6rdiosa 28°C e apresentaram similaridade genetica comos parentais entre 57 a 72% (tabela 3, figura 3), ou

Figura 3. Dendrograma gerado pelo agrupamento UPGMA,baseado no Coeficiente "Simple Matching", a partir das bandasobtidas por RAPD com os "primers" OPA-03, OPB-I 0 e OPX-08,em amilises de isolados de Pleuratus astreatus Isolados parentais:A - Pos 96/05; B - Pos 97/12; C - Pos 97/14; 0 - Pos 97/15; E- Pos 97/17; F - Pos 98/37; G - Pos 98/38 e H - Pos 98/40) erecombinantes (Isolados recombinantes com pileo branco resis­tentes ao calor: FF08, FF 19, FF22, FF76; Isolados recombinantescom pileo cinza a cinza-chumbo resistentes ao calor: AF48, AF74,BF24, DF02, OF03, OF I6, DF43, DF50, EF28, EF58, EF60,GF34, GF54, HF08 e HF 19) selecionados obtidos por cruzamentosmultisp6ricos.

f-Cy

I- I

III

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em placas de Petri e importante na selec;:ao de isoladosque nao apresentem setores, fato que pode afetar aprodutividade e morfologia dos cogumelos devido arecombinac;:ao somatica (Li et ai. 1994), heranc;:a extra­cromossomica (Matsumoto & Nakai 1996), perda dea1e10s ou polimorfismo genetico (Labarere et ai. 1991,Chen et ai. 1996). Neste experimento, observou-se que22,7% dos cruzamentos desenvolveram colonias queformaram setores (tabela 2, figura 2), atestando quepode haver uma significativa instabilidade geneticadentro de setores aparentemente homogeneos. Estainstabilidade e desfavoravel na produc;:ao comercialde inoculantes obtidos de esporos sem uma avaliac;:aoem condic;:oes de laborat6rio e de produc;:ao, talcomo mencionado por Fritsche (1978). Li et ai.(1994) sugeriram que os setores podem influenciar aproduc;:ao, formar cogumelos deformados ou ate naoformarem basidiomas.

Em termos de variabilidade genetica, osrecombinantes AF48 e DF02 apresentaram 72% desimilaridade com os parentais escuros, confirmando 0comportamento observado em condic;:oes de produc;:ao,uma vez que foram mais tardios na induc;:ao deprim6rdios, similar aos isolados parentais escuros. Jaos recombinantes mais bern adaptados atemperaturade 28°C apresentaram 57% de similaridade com 0parental albino F, resistente ao calor (figura 3).

Os parentais escuros (A, B, C, D, E, G e H)apresentaram 85% de similaridade entre si, apesarde terem origens distintas. Esta alta similaridadetambem foi observada em isolados comercias dep. ostreatus (Larraya et ai. 1999) enquanto 0isolado parental branco (F), 0 unico capaz de

0.18 0.6+ 0.80 0.96 100Ef58tt'OB1T:l:lEr2llef24IT5()En46f54~IS

Pf741T031T13Er601T16FfiSFF08rF22FF76FPf191T02ABCoHES

Tabela 2. Dados medios da unifonnidade (circular ou irregular) das col6nias repicadas de cada setor e presenc;a de setoriamento noscruzamentos multisp6ricos de Pleuratus astreatLls, em camara de crescimento. IIsolados parentais: A - Pos 96/05; B - Pos 97/12; C - Pos97/14; 0 - Pos 97/15; E - Pos 97/17; F - Pos 98/37; G - Pos 98/38 e H - Pos 98/40; 2 umero de setores isolados dentro do grupo decruzamento; 3Porcentagem de col6nias sem setoriamento (estaveis); 4Porcentagem de col6nias circulares (diametro unifonne);5Porcentagemde col6nias irregulares (diametro desuniforme); 6Porcentagem de col6nias com setoriamento (instaveis).

Cruzamento I Numero de Estavel3e Estavel e In tavel6 e Instavel e Somat6riasetores2 circular4 irregula~ circular irregular

AF 81 59,3 9,9 13,6 17,3 100BF 76 27,6 43,4 0,0 28,9 100CF 32 53,1 12,5 0,0 34,4 100OF 49 73,5 14,3 0,0 12,2 100EF 75 61,3 20,0 0,0 18,7 100FF 79 74,7 7,6 0,0 17,7 100GF 91 68,1 3,3 2,2 26,4 100HF 38 57,9 15,8 0,0 26,3 100

Media 59,4 15,8 2,0 22,7

R.B. Marino, A.F. Eira & E.Q. Cardoso: Melhoramento genetico de Pleura/us as/rea/us (lacg. : Fr.) Kumm. 353

seja, houve recombinayao genetica com obtenyao deisolados resistentes ao calor.

Rajarathnam & Bano (1987) mencionaram quenos cruzamentos monosporicos apenas 25% aosexual mente compativeis podendo ou nao induzirprimordios, no caso de especies de basidiomicetoscom heranya sexual tetrapolar, a exemplo deP ostreatus. Entre os cruzamentos com primordios,apenas 12,6% apresentaram cogumelos desenvolvidosa 28 QC em camara de crescimento e 0 restante abortouou paralisou 0 desenvolvimento (tabela 3).

Estudos sobre 0 processo genetico de indur;:ao deprimordios e formar;:ao de basidiomas foram relatadospara Agaricus bisporus (Ospina-Giraldo et al. 2000),Lentinula edodes (Ohga & Royse 2001, Miyazakiet al. 2002), Volvariella volvacea (Chen et al. 2004)e Pleuratus ostreatus (Suguimoto et al. 2002, Houet al. 2004, Rodriguez et al. 2004, Sunagawa &Magae 2005).

Suguimoto et al. (2002) descreveram que aindur;:ao de primordios de P ostreatus foi estimuladapelo aumento de veratril alcool. Ferraz (2004)cita que veratril alcool esta correlacionada coma atividade da lacase, uma importante enzima noprocesso de decomposir;:ao de material vegetal porfungos de podridao branca, como P ostreatus. Porsua vez, Hou et al. (2004), Rodriguez et al. (2004)e Sunagawa & Magae (2005) observaram que nasfases de induyao de primordios e desenvolvimentode basidiomas de P ostreatus, a atividade da lacaseaumentou significativamente, em comparar;:ao como crescimento vegetativo.

Outro fator a ser considerado e 0 efeito datemperatura na formayao e desenvolvimento dosprimordios, uma vez que isolados nao adaptadosao cultivo em temperaturas elevadas abortamou paralisam seu desenvolvimento, tal comoobservado neste trabalho (tabela 3) e como relatadopor Chang et al. (1995) em seus experimentos comLentinula edodes.

Dos isolados avaliados em laboratorio (quanto auniformidade da colonia) e em camara de crescimento(resistencia a 28 Qq, foram selecionados 16 (AF48,AF74, BF24, DF02, DF03, DFI6, DF33, DF43,DF50, EF28, EF58, EF60, GF34, GF54, HF08, HF 19)que induziram primordios e produziram coloniasuniformes em meio de cultura e se destacaram emtermos de produtividade e caracteristicas fenotipicas,para serem reavaliados, em condir;:oes de produr;:aocomercial, por tres ciclos de re-isolamento.

Os isolados, nos tres ciclos de re-isolamento,nao apresent1ram variayoes quanta ao periodo deindur;:ao de pnmordios, colheita, eficiencia biologicae caracteristicas fenotipicas. Dois se destacaram, 0

isolado EF58 e 0 EF60, pela eficiencia biologica,precocidade e caracteristicas fenotipicas tais como acolorar;:ao do pileo e resistencia ao manuseio (tabela4, figura 4).

Portanto, atraves dos isolados obtidos peloscruzamentos multisporicos sugere-se 0 estabele­cimento do melhoramento genetico quanto aprecocidade na induyao de primordios e realizayaoda colheita, numero de ciclos de frutificar;:ao semchoque termico, resistencia ao calor e ao manuseio,

Tabela 3. Porcentagem media de induc;:iio e desenvolvimento de primordios a 28°C dos isolados multisporicos de Plellrotlls ostreatlls,apos hidratac;:iio por 4 horas, 30 dias de incubac;:iio e em camara de crescimento. Iisolados parentais: A - Pos 96/05; B - Pos 97/12;C - Pos 97/1 4; D - Pos 97/1 5; E - Pos 97/17; F - Pos 98/37, G - Pos 98/38 e H - Pos 98/40; 2Ausencia: setores que niio induziramprilllordios a 28°C; J Abortados: setores que apresentaram paralisac;:iio do crescilllento dos primordios, estagio de "cabec;:a de alfinete";4Selll desenvolvimento: setores que apresentaram paralisac;:iio do desenvolvimento dos cogumelos.

% de setores em relac;:iio it frutificac;:iio

Cruzamento' umero de setores Ausencia2 Abortado J Sem desenvolvimento4 Desenvol vidos

AF 81 83,7 7,0 2,1 7,0BF 76 77,6 5,7 9,6 7,0CF 32 60,4 6,2 18,7 14,6DF 49 52,4 17,1 4,8 25,8EF 75 81,8 7,6 7,5 3,1FF 79 27,0 24,5 22,8 25,7GF 91 89,7 2,9 1,5 5,9HF 38 64,0 23,7 0,9 11,4

Media 67,1 II ,8 8,5 12,6

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Tabela 4. Periodo de formac;;ao de primordios (dias), colheita (dias), eficiencia biologica - EB (%), colorac;;ao do pileo (am\lise visual) eresistencia ao manuseio dos isolados selecionados obtidos por cruzamentos multisporicos de Pleura/us as/rea/us, no terceiro cicio derei olamento, em camara de frutificac;;ao a 28 ± 5 0c. 'Isolados selecionados obtidos por cruzamentos multi poricos; 2.3Dados medios apos30 dias de incubac;;ao; comparac;;6es entre as medianas, na mesma col una, seguidas por letras distintas que diferem entre si pelo Teste deDunn (p < 0,05), com 10 repetic;;6es; 4Comparac;;6es entre as medias, na mesma col una, seguidas por letras distintas que diferem entre sipelo Teste de Tukey (p < 0,05), com 10 repetic;;6es; 5Siglas: b - branco; c - cinza; cc - cinza-claro; ch - cinza-chumbo; ce - cinza-escuro;6Resistencia ao manuseio: avaliada pela presenc;;a de pileo fnigil (quebradic;;o) ou fimle quanto Ii manipulac;;ao.

Isolados 1 Primordios (dias)2 Colheita (dias)3 EB4(%) Cor (visual)5 Resistencia ao manusei06

AF48 3,7 b 5,8 a 27,0 abc ce firmeAF74 3,3 a 8,9 a 23,9 bcd c firmeBF24 4,8 b 7,8 a 14,7 cd ce firmeDF02 5,8 b 7,1 a 9,3 cd ce fimleDF03 6,0 b 8,8 a 12,3 cd ce fimleDFI6 4,8 b 6,8 a 19,0 bcd ce firmeDF33 3,8 b 8,4 a 33,7 abcd ce fnigilDF43 4,3 b 8,5 a 20,7 abcd ce firmeDF50 6,0 b 8,8 a 11,3 cd ce - ch firmeEF28 5,0 b 6,9 a 21,4 cd ce firmeEF58 2,7 a 6,9 a 43,3 a ce fimleEF60 2,7 a 7,4 a 38,4 ab cc - ce firmeGF34 7,9 c 10,4 b 6,6 d ce firmeGF54 8,0 c 10,0 b 12,7 bc ce firmeHF08 5,3 b 9,8 b 32,3 bcd ce firmeHFI9 5,8 b 7,3 a 17,2 bcd ce firme

F 2,0 a 7,0 a 35,8 abcd b fnigil

Tabela 5. Caracteristicas dos isolados melhorados de Pleura/us as/rea/us em relac;;ao aos parentais, em condic;;6es de produc;;ao comercia!.'Isolados melhorados: AF48, AF74, BF24, DF02, DF03, DF 16, DF43, DF50, EF28, EF58, EF60, GF34, GF54, HF08 e HF 19; 2Fonte:Marino (2002); 31solados parentais necessitam tambem de choque termico a 5 °C por 24 h; 4Ciclos de frutificac;;ao sem hidratac;;ao echoque termico;5Apenas os isolados AF74, DF33, DF43, EF28, EF58, EF60 e HF08 produziram 0 segundo cicio, com desenvolvimentode primordios remanescentes da colheita e/ou induc;;ao de primordios sem hidratac;;ao ou choque termico;6Siglas: b - branco; cc - cinza­claro; ce - cinza-escuro; ch - cinza-chumbo; cr - creme.

Caracteri licas

Induc;;ao de primordiosPeriodo para formac;;ao de primordiosPerlodo para inicio da colheita

umero de ciclos de frutificac;;aoCicio de produc;;aoEficiencia biologica (%)Resistencia ao calorColorac;;ao do pileo6

Resistencia ao manuseio

lsolados melhorados 1

hidratac;;ao1 a 8 dias

6 a 10 dias2 ciclos 4.5

13 dias6a44%

Simcc - chFirme

Isolado parental

Fa 28°Chidratac;;ao

2 dias7 diasI cicio15 dias35,8%

SimB - crFnigil

Isolados parentais

(A a H)2 a 15°Chidratac;;ao3

8 a II dias13al5dias

1 cicio15 dias

II a25%nao, exceto a F

ce - chfirme

adequada colorac;;ao do pileo e eficiencia biol6gica.Essas caracteristicas podem beneficiar os produtoresde cogumelos que poderao cultivar os isolados EF58e EF60 durante todo 0 ano, com custos menores e eminstalac;;oes simples.

Agradecimentos

o primeiro autor agradece aFundac;;ao de AmparoaPesquisa do Estado de Sao Paulo (FAPESP), pelabolsa outorgada (processo 97/14675-5).

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I

II

y. 2

DF03

III

GF14

Figura 4. Basidiomas dos isolados parentais (I, II) e recombinantes (III) de Pleurotus ostreatus [I - Isolados parentais cultivados atemperatura de 15°C (A - Pos 96/05, B - Pos 97/12, C - Pos 97/14, 0 - Pos 97/15, E - Pos 97/17, F - Pos 98/37, G - Pos 98/38 eH - Pos 98/40); II - Isolado parental F cultivado a 28°C; III - Isolados recombinantes resistentes a 28°C].

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