Pdt+aspirina

TERAPIA FOTODINÂMICA EM COMBINAÇÃO COM ÁCIDO ACETILSALICÍLICO

Licenciatura em Bioquímica

Nuno Almeida

Terapia Fotodinâmica

A absorção de luz pelo PS leva à sua transição para um nível energético superior, sendo que após o decaimento energético ocorre transferência de energia para diferentes substratos, havendo a formação de espécies reactivas de oxigénio.

Introdução Objectivo Métodos Resultados Conclusões Perspectivas

Mecanismos de acção da PDT

• Reacção do tipo I: formação de 1O₂ através de intermediários• Reacção do tipo II: formação directa de 1O₂


Retirado de Dolmans et al. 2003

PDT + Acido acetilsalicílico

A utilização de ácido acetilsalicílico em combinação com a PDT potencia a morte celular por apoptose.


Objectivo

Verificar se o ácido acetilsalicílico potencia a PDT baseada no fotossensibilizador ACS881F1 in vitro.

+ =


Materiais e Métodos WiDR OE19

DMEM RPMI

PS

Aspirina



ENSAIO CLONOGÉNICOSobrevivência

ENSAIO MTTProliferação

ENSAIO SRBConteúdo Proteico

Proliferação celular após tratamento com aspirina

ResultadosWiDr OE19


n≥4 n≥4

A aspirina sozinha apresenta baixa citotoxicidade nas concentrações testadas

A linha celular OE19 é mais susceptivel que a linha celular WiDR

ENSAIO MTT

*** *** ****** *** *** **

******

Proliferação celular após tratamento com AA+PDT

WiDr1mM AA 2,5mM AA


a) 3H AA + PS

1 2 3 4 5 6 70

20

40

60

80

100

120 (a) (b) (c)

Prol

ifera

çao

(%)

Concentraçao (log(pM))

1 2 3 4 5 6 70

20

40

60

80

100

120 (a) (b) (c)

Prol

ifera

çao

(%)


b) 6H AA + PS c) 24H PS + AA

Obtenção de Curvas de Dose-Resposta

ENSAIO MTT

n≥4 n≥4

Proliferação celular após tratamento com AA+PDT

OE191mM AA 2,5mM AA


a) 3H AA + PS b) 6H AA + PS c) 24H PS + AA

Obtenção de Curvas de Dose-Resposta

1 2 3 4 5 6 70

20

40

60

80

100

120 (a) (b) (c)

Prol

ifera

çao

(%)

Concentraçao (log(pM))1 2 3 4 5 6 7

0

20

40

60

80

100

120 (a) (b) (c)

Prol

ifera

çao

(%)


ENSAIO MTT

n≥4n≥4

IC50WiDR OE19


Parece haver sinergia na associação de PDT + AAMais evidente na linha celular OE19

1mM 2,5mM

3H AA+PS44,01nM

[36,04; 53,74]33,53nM

[28,51; 39,43]

6H AA+PS10,18nM

[7,04; 14,72]51,41nM

[48,29; 54,73]

24H PS+AA28,79nM

[26,83 ;30,90]24,24nM

[23,65; 24,85]

1mM 2,5mM

3H AA+PS6,47nM

[5,25; 7,98]8,05nM

[7,21; 8,99]

6H AA+PS7,23nM

[5,63; 9,33]6,37nM

[5,64; 7,20]

24H PS+AA7,26nM

[6,37; 8,27]1,90nM

[1,42; 2,54]

ACS881F1

WiDr 58,5nM

OE19 35,0nM

ENSAIO MTT

*↑ [AA] associada a maior inibição da proliferação

Conteúdo ProteicoWiDR


AA sozinho não tem efeito na viabilidade

1mM AA 107,0 ± 3,10

PS 44nM 7,86 ± 1,54

PS+AA 3,81 ± 1,32

ENSAIO SRB

3H 1mM AA + 44 nM PS

*** ***

[

***

***

[ *

PDT + AA reduz a viabilidade significativamente em relação a PDT

n≥4

Sobrevivência


Não há diferenças significativas em relação ao controlo

1mM AA 47,9 ± 4,33

PS 44nM 40,6 ± 10,0

PS+AA 39,4 ± 30,2

ENSAIO CLONOGÉNICO

WiDR3H 1mM AA + 44 nM PS

Limitação devido ao baixo numero de experiências

n≥2

Conclusão

A combinação de AA com a PDT parece ser promissora podendo existir sinergia.

A linha celular OE19 é mais sensivel ao tratamento que a linha celular WiDr.

A avaliação do conteúdo proteico confirmou que o abaixamento da proliferação está relacionado com diminuição da viabilidade.

A PDT, sozinha ou em combinação com AA, é uma terapêutica promissora que deve continuar a ser investigada.


Perspectivas para o futuro

Realizar os ensaios SRB e clonogénicos na linha celular WiDr tendo em conta a condição 6H 1mM AA+PS.

Realizar os mesmos estudos na linha celular OE19 na condição 24H PS + 2,5mM AA.

Realizar estudos de citometria de fluxo para avaliar viabilidade celular e tipos de morte, espécies reactivas de oxigénio e defesas antioxidantes.

Realizar estudos de microscopia de fluorescência para avaliar se o AA influencia a distribuição do PS na célula.


BibliografiaDas imagens:http://www.ondineblog.com/wp-content/uploads/2011/10/preclinical-data-periowave.jpghttp://t3.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcRJ7SHL_GMLFBUktS_oSiuFSIATZ8dCAG1dOC0SwWE1nOooFNIw4Ahttp://www.nature.com/nrc/journal/v3/n5/images/nrc1071-f2.jpghttp://t3.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcRHF3VIe425Qi8AxDy5a9jmFRE9NInyneHyKWfLh9pTufokdFP_http://us.123rf.com/400wm/400/400/radiantskies/radiantskies1212/radiantskies121200128/16629179-abstract-word-cloud-for-photodynamic-therapy-with-related-tags-and-terms.jpghttp://www.discoverymedicine.com/Diana-M-Tacelosky/files/2012/04/discovery_medicine_no_71_brian_m_barth_figure_1.pnghttps://d2dct7y3250e4n.cloudfront.net/ht-staging/user_answer/reference_image/3071/large/Aspirin.jpeg?1350074265http://3.bp.blogspot.com/_7xzZi5UF2yw/TQTsjb9VSFI/AAAAAAAAAC8/HWQsOkiUmAQ/s1600/Aspirin+picture.pnghttp://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/9/91/MTT_Plate.jpg/200px-MTT_Plate.jpghttp://www.nature.com/nprot/journal/v1/n5/images/nprot.2006.339-F1.jpg

Dos artigos:Braga, M., 2012. Terapia Fotodinâmica em Associação com o Ácido Ascorbico. Chiaviello, a, Paciello, I., Postiglione, I., Crescenzi, E., Palumbo, G., 2010. Combination of photodynamic therapy with aspirin in human-derived lung adenocarcinoma cells affects proteasome activity and induces apoptosis. Cell proliferation 43, 480-93.Datki, Z., Juhász, A., Gálfi, M., Soós, K., Papp, R., Zádori, D., Penke, B., 2003.Method for measuring neurotoxicity of aggregating polypeptides with the MTT assay on differentiated neuroblastoma cells. Brain Research Bulletin 62, 223-229. Dikshit P, Chatterjee M, Goswami A, Mishra A, Jana NR (2006) Aspirin induces apoptosis through the inhibition of proteasome function. J. Biol. Chem. 281, 29228 – 29235. Dolmans DE, Fukumura D, Jain RK (2003) Photodynamic therapy for cancer. Nat. Rev. Cancer 3, 380–387.H. Papazisis, K. A. Kortsaris, K. T.Geromichalos, G. D. Dimitriadis, Optimization of the sulforhodamine B colorimetric assay. Journal of

Immunological Methods, 1997; 208(2):151-8. Laranjo, M., 2010. Acção Intracelular da Terapia Fotodinâmica.Robertson, C.A., Evans, D.H., Abrahamse, H., 2009. Photodynamic therapy (PDT): a short review on cellular mechanisms and cancer research

applications for PDT. Journal of photochemistry and photobiology. B, Biology 96, 1-8.

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