Módulo I: Produção de Inóculo1. Breves Noções de Micologia: O que é um cogumelo?

2. Preparação do Laboratório e Protocolos

3. Preparação dos Meios de Cultura

4. Clonagem e Selecção de Estirpes

5. Preparação do Inóculo: Grão e Cavilhas

6. Produção do Inóculo: G2G

7. Parâmetros de Incubação

8. Contaminações

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1. O que é um Cogumelo??

As 3 Fases do Cultivo de Cogumelos

Laboratório

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2. Protocolos

Limpeza/Assepsia

Fluxo de trabalho: limpo > menos limpo, e.g.

Tempo: ciclo de autoclave > inoculação, e.g.

Inventário/Perdas

Identificação e Registo de Pontos Críticos/Reais e Potenciais Vectores de Contaminação

Resolução de Problemas

Máquinas/Equipamento/Materiais

Pesagem/Rotulagem/Registos

Limpeza/Assepsia

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3. 1 Prep. Meios de CulturaComposição: Agar + Meio nutritivo: malte, batata, dextrose, etc

Preparação:

10g de Agar

9g de Extrato de Malte

500ml Água destilada

Modus Operandi:

Capacidade do Recipiente: 1/3

Tampa ligeiramente fechada

Alumínio

Em suspensão 15min

Autoclavar 15 mins a 115ºC

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3.2 Meios de Cultura: Agar>Placas

Arrefecer no AC/CFL

Não deixar solidificar

Muito quente=condensação

Deixar placas solidificar

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4.1 Clonagem

Seleção do espécime

Abrir longitudinalmente

Retirar um pedaço do interior

Colocar no meio de cultura

Rotular

Selar com parafilme

Incubar a 15-20ºC

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4.2 Isolamento de Estirpes Seleção do espécime

Abrir longitudinalmente

Retirar pedaço do interior

Colocar no meio de cultura

Rotular

Selar com parafilme

Incubar a 15-20ºC

Repicar até rizomorfos

Testar

Registar

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5. Prep. Grão

• Limpar o grão de impurezas(água límpida)

• Demolhar o grão 6 a 16h

• Cozer durante 10 minutos (al dente)

• Escorrer/Secar Superfície

• Tampa ligeiramente fechada/Alumínio

• Esterilizar

• Arrefecer

• Inocular com cultura pura ou grão colonizado

• Tempo de colonização: 15 a 30 dias (aprox.)

6. Produção de Inóculo

• Técnica: G2G (Grain to Grain)

• Rácio aumento peso/vol: 1-20/geração

• Taxa de inoc 2-5% peso/vol

• Máx. de expansão recomendado: G3 (geração 3):

G0 (mother) – G1 – G2 – G3

• Geração óptima para substrato: G2

7. Parâmetros de Incubação

Temp: 15-20ºC

HR da Câmara: 30/40%

Luz: Ausência

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8. Contaminações

• Trichoderma, Aspergillus, etc

• Identificar vectores

• Manter Registos-Rastreabilidade

• Rever formulações, tempos,

protocolos,etc

• Remover das Instalações

• Limpeza

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Agora, mãos no grão

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