Módulo 5

ANTIBIOGRAMAS

Testagem da resistência de isolados bacterianos a antibióticos. Método da

difusão em agar com discos (técnica de Kirby-Bauer)

Tocar com uma ansa em quatro ou cinco colónias bem isoladas, de aparência

semelhante e transferir o crescimento assim obtido para um tubo contendo 5 ml de caldo

nutritivo. Incubar o tubo a 35 °C durante 24 h. Ajustar a turvação do meio, com caldo

nutritivo esterilizado, até igualar a dum padrão McFarland 0,5 (correspondente a 106

células/ml). Inundar as placas com Agar de Mueller-Hinton com a suspensão. Esperar cerca

de 30 min para que o agar absorva algum do líquido. Deitar fora o excesso para um goblé

com lixívia (trabalhar com luvas). Secar bem as placas (1 – 2h). Os discos são aplicados por

meio de pinça esterilizada ou aplicador. Aplicam-se 6 discos por placa, com intervalos

suficientes para que não haja sobreposição das respectivas zonas de inibição (devem estar

a, pelo menos, 15 mm da borda da placa e com um espaçamento de, pelo menos, 20 mm

entre eles). Para cada isolado, preparam-se duas placas, totalizando assim 12 discos por

placa. Deixa-se secar as placas durante mais 30 min. Incuba-se a 35 ºC, por 16 – 18 h.

Medem-se as zonas de inibição por meio duma craveira digital, arredondando as leituras

até ao milímetro, incluindo o diâmetro do disco. As medições devem ser feitas a olho nu,

por visualização da parte de trás da placa, com boa iluminação, contra um fundo negro

não reflector. Para a interpretação dos resultados, consultar as tabelas disponibilizadas na

aula.