sistemática de - HSR: Hospital Santa Rosa · PROCEDIM ENT O OPERACIO NAL PADRÃO POP-BSG-03 NORMA:...

P R O C E D I M E N T O O P E R A C I O N A L P A D R Ã O POP-BSG-03

NORMA: Realização de Exames Pré-Transfusionais

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ELABORAÇÃO REVISÃO Nº03 EMISSÃO 01

DATA: 08/02/2008 DATA: 17/02/2012 DATA: 22/02/2012

Encaminhamos pela presente, Norma e Procedimento que implanta e define a

sistemática de Realização de Exames Pré-Transfusionais do HOSPITAL SANTA ROSA.

Controle Nome/Cargo Assinatura

Elaborado por: Givanildo Vieira da Cunha

Coordenador técnico

Revisado por: Givanildo Vieira da Cunha


Aprovado por: Carmen Aparecida de A. Neves

Diretora Técnica



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I – A P R E S E N T A Ç Ã O

1. Objetivo:

1.1. Estabelecer normas e procedimentos para Realização de Exames Pré-

Transfusionais em pacientes do Hospital Santa Rosa, a fim de minimizar os riscos de possíveis reações transfusionais.

2. Áreas Envolvidas:

2.1. Banco de Sangue

2.2. PA

2.3. UTI’s

2.4. Centro Cirúrgico

2.5. Unidades de Internação

3. Fatores de Risco:

3.1. Contaminação da amostra colhida.

3.2. Erro na identificação da amostra colhida.

3.3. Erro na determinação dos grupos sangüíneos.

4. Considerações Gerais:

4.1. Método: Aglutinação em tubos

4.2. Amostra: Sangue total com EDTA ou heparina.

Soro ou plasma EDTA ou heparina.



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I I – R E S P O N S A B I L I D A D E S

1. Banco de Sangue

1.1. Realizar a coleta de sangue.

1.2. Conferir os dados da amostra com a solicitação médica.

1.3. Realizar os exames pré-transfusionais da amostra do receptor.

2. Pronto Atendimento

2.1. Equipe Médica

2.1.1. Preencher o formulário da guia do convênio do paciente com o produto hemoterápico a ser solicitado.

2.1.2. Preencher o formulário da Requisição de Hemocomponentes para Transfusão.

2.2. Equipe de enfermagem

2.2.1. Comunicar o banco de sangue, quando houver solicitação de hemocomponente;

2.2.2. A coleta da amostra de sangue poderá ser realizada pela Banco de sangue a amostra previamente identificada com nome completo do paciente, localização, data e hora da coleta, número do registro do paciente receptor ou data de nascimento do mesmo e rubrica da pessoa que realizou a coleta.

3. UTI’s:

3.1. Equipe Médica

3.1.1. Preencher o formulário da guia do convênio do paciente com o produto hemoterápico a ser solicitado.

3.1.2. Preencher o formulário da Requisição de Hemocomponentes para Transfusão.

3.2. Equipe de enfermagem

3.2.1. Avisar o banco de sangue, quando houver solicitação de hemocomponente;

3.2.2. A coleta da amostra de sangue poderá ser realizada pelo Banco de sangue a amostra previamente identificada com nome completo do paciente, localização, data e hora da coleta, número do registro do paciente receptor ou data de nascimento do mesmo e rubrica da pessoa que realizou a coleta.



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4. Centro Cirúrgico

4.1. Equipe Médica

4.1.1. Preencher o formulário da guia do convênio do paciente com o produto

hemoterápico a ser solicitado.

4.1.2. Preencher o formulário da Requisição de Hemocomponentes para

Transfusão.

4.2. Equipe de enfermagem:

4.2.1. Avisar o banco de sangue, quando houver solicitação de

hemocomponente;

4.2.2. A coleta da amostra de sangue poderá ser realizada pela própria equipe

de enfermagem que entrega ao Banco de sangue a amostra

previamente identificada com nome completo do paciente, localização,

data e hora da coleta, número do registro do paciente receptor ou data

de nascimento do mesmo e rubrica da pessoa que realizou a coleta.

5. Unidades de Internação:

5.1. Equipe Médica

5.1.1. Preencher o formulário da guia do convênio do paciente com o produto

hemoterápico a ser solicitado.

5.1.2. Preencher o formulário da Requisição de Hemocomponentes para

Transfusão.

5.2. Equipe de enfermagem:

5.2.1. Avisar o banco de sangue, quando houver solicitação de

hemocomponente;

5.2.2. A coleta da amostra de sangue poderá ser realizada pela equipe do

Banco de sangue a amostra previamente identificada com nome

completo do paciente, localização, data e hora da coleta, número do

registro do paciente receptor ou data de nascimento do mesmo e

rubrica da pessoa que realizou a coleta.



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I I I – D E S C R I Ç Ã O D A A T I V I D A D E

1. Materiais e Reagentes necessários

a) Albumina bovina;

b) Caneta pilot para marcação em tubos;

c) Dispenser (repipetador automático);

d) Estantes;

e) Hemáceas testes A1 e B;

f) Papel absorvente;

g) Pinças;

h) Pipetas com volume de 50 microlitros;

i) Ponteiras para pipetas automáticas;

j) Relógio;

k) Óculos;

l) Máscaras;

m) Luvas de procedimento;

n) Jaleco;

o) Solução salina isotônica (0,9%) à temperatura ambiente;

p) Soro anti-A,B

q) Soro anti-A;

r) Soro anti-B;

s) Soro anti-D;

t) Soro anti-humano;

u) Crhccontrole de Rh

v) Soro coombs;

w) Biopeg;

x) Albumina bobina 22%;

y) Tubos de ensaio 10x75mm ou 12x75mm;

2. Equipamentos necessários

a) Aglutinoscopio;

b) Banho Maria;

c) Centrífuga sorológica;

d) Temporizador analógico;

e) Capela de fluxo Laminar;

1. Procedimento Técnico para Determinação do Grupo ABO - Direta:

1.1. Realização da suspensão de hemácias a 5%:

1.1.1. Em um tubo de hemólise devidamente identificada, colocar 1,0 ml de solução salina 0,9%, usando o dispensador;



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1.1.2. Adicionar no tubo, 01 gota (50 microlitros) do concentrado de hemácias;

1.1.3. Homogeneizar delicadamente;

1.2. Tipagem direta do grupo sanguíneo ABO:

1.2.1. Identificar 03 tubos A, B e AB;

1.2.2. Pingar 01 gota de soro anti-A no tubo A, 01 gota de soro anti-B no tubo B e 01 gota de soro anti-A, B no tubo AB;

1.2.3. Pipetar 01 gota (50 microlitros) da suspensão de hemácias a 5% em cada tubo;

1.2.4. Agitar lentamente;

1.2.5. Centrifugar 15 segundos entre (1000 – 1500G);

1.2.6. Ressuspender delicadamente o botão de hemácias;

1.2.7. Fazer a leitura;

1.3. Tipagem ABO e Rh em sangue de cordão e sangue de Rn:

1.3.1. Identificar 04 tubos A, B, AB e Rh;

1.3.2. Pingar 01 gota de soro anti-A no tubo A, 01 gota de soro anti-B no tubo B e 01 gota de soro anti-A, B no tubo AB e uma gota de Rh (D) no tubo Rh;


1.3.4. Agitar lentamente;

1.3.5. Centrifugar 15 segundos entre (1000 – 1500G);

1.3.6. Ressuspender delicadamente o botão de hemácias.

1.4. Discrepância entre a tipagem ABO direta e reversa:

1.4.1. Identificar 03 tubos: A, B e AB;


1.4.3. Lavar as hemácias 03 vezes utilizando soro fisiológico 0,9%;



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1.4.4. Pingar uma gota do soro anti–A no tubo A, uma gota do soro anti–B no tubo B e uma gota do soro anti–AB no tubo AB;

1.4.5. Agitar lentamente e centrifugar 15 segundos entre 1000 e 1500g;

1.4.6. Ressuspender delicadamente o botão de hemácias;

1.4.7. Considerar a tipagem direta proveniente desse processo;

1.4.8. Proceder ao teste de coombs indireto.

2. Procedimento Técnico para Determinação do Grupo ABO - Reversa:

2.1. Repetir a Tipagem direta e Reserva com nova Diluição;

2.2. Persistindo a Discrepância, deve-se colher uma nova amostra do paciente;

2.3. Persistindo a Discrepância, deve-se encaminhar a amostra para o laboratório de apoio para conclusão do caso;

2.4. Comunicar o médico Assistente;

2.5. Selecionar Hemocomponente O- negativo em sistema de emergência;

2.6. Aguardar o resultado definitivo do Laboratório de Apoio;

3. Procedimento Técnico para Determinação do Fator RH:

3.1. Identificar 02 tubos D(Rh) e CRh;

3.2. Pingar 1 gota de soro anti-D (Rh) no tubo D e 01 gota do reagente controle de Rh no tubo CRh;

3.3. Pipetar 1 gota (50 microlitros) da suspensão de hemácias a 5% em cada tubo;

3.4. Agitar lentamente;

3.5. Centrifugar 15 segundos entre (1000-1500 G);

3.6. Ressuspender delicadamente o botão de hemácias;

3.7. Fazer a leitura;

4. Procedimento Técnico para Variante D’fraco (Qdo RH Negativo):

4.1. Preparar uma suspensão de 5% das hemacias a serem classificadas;

4.2. Identificar 02 tubos D (Rh) e CRh;



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4.3. Pingar 01 gota de soro anti-D (Rh) no tubo D e 01 gota do reagente controle de Rh no tubo CRh;

4.4. Pipetar 01 gota (50 microlitros) da suspensão de hemácias a 5% em cada tubo;

4.5. Agitar lentamente;

4.6. Incubar o tubo D (Rh) e CRh em banho Maria a 37 ºC entre 15 a 30 minutos;

4.7. Após a incubação, lavar os tubos 03 vezes em solução salina a 0,9%, decantando o sobrenadante;

4.8. Após a última lavagem, decantar totalmente o sobrenadante.;

4.9. Pingar 02 gotas de soro de Coombs (Antiglobulina humana monoespecífico, ou Anti-humano poliespecífico);

4.10. Homogeneizar e centrifugar por 15 segundos entre (1000-1500G);

4.11. Ressuspender delicadamente o botão de hemácias;

4.12. Fazer a leitura;

4.13. Para confirmação do teste negativo é valido adicionar células sensibilizadas por imunoglobulinas IgG e centrifugar entre (1000 – 1500 G) durante 15 segundos e observar a glutinação.

Nota: Se o teste for negativo após a adição do controle de hemácias, o teste é invalido e deverá ser repetido.

5. Procedimento Técnico para Pesquisa de Anticorpos Irregulares:

1ª Etapa: Meio salino em temperatura ambiente.

Finalidade: Detectar anticorpos salinos da classe IgM das imunoglobulinas, reativos em temperatura ambiente.

a) Ressuspender gentilmente os glóbulos vermelhos das hemácias sensibilizadas I e II, invertendo os frascos pelo menos 10 vezes. Não agitar.

b) Colocar em cada um dos dois tubos de ensaio previamente identificado I e II, 50 microlitros (1gota) do soro sob triagem para anticorpos irregulares.

c) Acrescentar uma gota de suspensão de hemácias sensibilizadas ao tubo I ao tubo II respectivamente misturar bem.

d) Centrifugar ambos os tubos durante 15 segundos entre (1000 – 1500 G).

e) Ressuspender delicadamente o botão de hemácias em cada tubo.



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f) Registrar a presença ou a ausência de aglutinação ou hemólise.

2ª Etapa: Meio protéico em temperatura ambiente.

Finalidade: Detectar anticorpos salinos (IgM) que possui uma ação intensificada em meio protéico e anticorpos incompletos albumínicos mais potentes (anticorpos da classe IgG).

a) Adicionar aos tubos I e II, 02 gotas de albumina bovina 22% e homogeneizar bem.

b) Centrifugar ambos os tubos durante 15 segundos entre (1000 – 1500G)

c) Ressuspender delicadamente o “botão” de hemácias em cada tubo observando a presença ou ausência de aglutinação ou hemólise.

Nota: Nos exames em que soro BioPEG substituir a albumina bovina o tempo de incubação diminui de 30 para 15 minutos, sendo também desnecessário a centrifugação logo após a adição desse soro. Prosseguir diretamente para incubação 37ºC.

3ª Etapa: Meio protéico em temperatura de 37ºC.

Finalidade: Detectar anticorpos incompletos albumínico reativos a 37ºC, como os anticorpos do sistema Rh.

a) Incubar os tubos em banho Maria a 37ºC durante 30 minutos.

b) Após a incubação centrifugar todos os tubos durante 15 segundos entre 1000 – 1500 G

c) Ressuspender delicadamente o “botão” de hemácias em cada tubo.

d) Registrar a presença ou a ausência de aglutinação ou hemólise.

4ª Etapa: Teste de antiglobulina humana (Coombs indireto).

Finalidade: Detectar anticorpos incompletos reativos pelo teste de Coombs indireto (anticorpos de classe IgG e anticorpos fixadores de componentes do complemento à membrana celular.)

a) Lavar as hemácias dos tubos três vezes com solução fisiológica a 0,9%. Na última lavagem desprezar a salina e secar as bordas do tubo com papel absorvente para retirar toda a salina.

b) Acrescentar uma gota do soro anti-humano nos tubos I e II e homogeneizar bem.

c) Centrifugar os tubos entre (1000 – 1500G) durante 15 segundos.



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d) Ressuspender delicadamente o botão de hemácias e verificar a presença ou ausência de aglutinação e/ou hemólise.

e) Adicionar a cada tubo com resultado negativo, uma gota de hemácias sensibilizadas do grupo O como controle de qualidade da técnica.

f) Homogeneizar e centrifugar os tubos entre 1000 – 1500G por 15 segundos. Nesses tubos no qual foi adicionado o controle de hemácias, deve ser observada aglutinação. Se não houver aglutinação, deve-se repetir o teste desde a primeira etapa.

6. Procedimento Técnico para Coombs Direto:

a) Em um tubo de ensaio devidamente identificado, lavar 03 vezes com salina, 250 microlitros do concentrado de hemácias.

b) Após a última lavagem, desprezar bem o sobrenadante, invertendo o tubo e enxugando as bordas do tubo com papel absorvente.

c) Preparar uma suspensão a 5% das hemácias lavadas, usando 1,0 ml de salina do repipetador e (50 microlitros) das hemácias já lavadas.

d) Marcar 02 tubos de ensaio com CP (coombs poliespecífico) e CM (coombs monoespecífico).

e) Adicionar em cada tubo (50 microlitros) da suspensão de hemácias a 5%.

f) Adicionar ao tubo CP, duas (02) gotas de soro anti-humano poliespecífico e ao tubo CM duas (02) gotas de soro de coombs (soro anti-gama globulina humana monoespecífico).

g) Homogeneizar delicadamente e centrifugar os tubos entre (1000 – 1500G) por 15 segundos.

h) Ressuspender o botão de hemácias delicadamente e verificar a presença ou não de aglutinação.

i) Se os resultados forem negativos nos 2 tubos incubar por 15 minutos em banho maria a 37ºC e depois centrifugar por 15 segundos entre (1000 a 1500 G). Verificar a presença ou ausência de aglutinação após ressuspender o botão. Se houver aglutinação pode indicar a presença de frações do complemento, sendo considerado então, coombs direto positivo.

j) Quando o coombs direto for positivo, avisar o médico assistente.

7. Procedimento Técnico de Auto Controle

1ª Etapa: Meio protéico em temperatura ambiente



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Finalidade: Detectar anticorpos salinos (IGM) que possui uma ação intensificada em meio protéico e anticorpos incompletos albumínicos mais potentes (anticorpos da classe IgG).

a) Lavar as hemácias do paciente três vezes com salina;

b) Preparar uma suspensão de hemácias a 5% em salina;

c) Marcar dois tubos de ensaio: A (auto–controle);

d) Colocar 50 microlitros do soro ou plasma do paciente;

e) Adicionar 50 microlitros da suspensão de hemácias lavadas do paciente;

f) Adicionar 02 gotas de albumina bovina 22% ;

g) Homogeneizar e centrifugar entre 1000 – 1500 G durante 15 segundos;

h) Com movimentos suaves, deslocar o botão de hemácias no fundo do tubo e avaliar de houve ou não hemólise;

i) Incubar o tubo em banho – Maria a 37ºC durante 30 min.;

j) Centrifugar conforme o item g;

l) Efetuar leitura conforme item h;

m) Lavar o tubo com salina três vezes, e decantar bem a salina da última lavagem;

n) Adicionar 02 gotas de soro Anti – humano ou soro de coombs;

o) Centrifugar conforme o item g;

p) Efetuar leitura conforme item h.

Nota: Nos exames em que o soro Bio PeG substituir a albumina bovina 22% o tempo de incubação diminuir de 30 para 15 minutos, sendo também desnecessários a centrifugação logo após a adição desse soro.



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8. Procedimento Técnico Prova Cruzada:

1ª Etapa: Meio Protegido em Temperatura Ambiente

Finalidade: Detectar anticorpos salinos (IGM) que possui uma ação intensificada em meio protéico e anticorpos incompletos albumínicos mais potentes (anticorpos da classe IgG)

a) Realizar expressão do “macarrão” da bolsa fazendo com que todo o

sangue do conector seja introduzido na bolsa, garantindo assim uma

amostra homogênea.

b) Preparar uma suspensão de hemácias a 5% em salina.

c) Marcar dois tubos de hemólise “S” e “A”.

d) Colocar 50 microlitros de soro do receptor nos tubos “S” e “A”.

c) Adicionar 50 microlitros da suspensão de hemácias a 5% nos tubos “S” e

“A”.

f) Adicionar duas gotas de albumina bovina 22% no tubo “A”.

g) Homogeneizar e centrifugar os dois tubos a 1000 – 1500 G durante 15

segundos.

h) Com movimentos suaves, deslocar o botão de hemácias do tubo e avaliar

se houve ou não hemólise ou aglutinação.

i) Incubar os tubos a “S”e “A” em banho-maria a 37 ºC por 30 minutos.

Nota: Nos exames em que o soro Bio PeG substituir a albumina bovina 22% o

tempo de incubação diminuir de 30 para 15 minutos, sendo também

desnecessários a centrifugação logo após a adição desse soro.

2ª Etapa: Meio Protéico a 37ºC

Finalidade: Detectar anticorpos incompletos albumínicos reativos a 37ºC, como os

anticorpos do sistema Rh.

a) Incubar os tubos “S” e “A” em banho Maria a 37ºC por 30 minutos.

b) Centrifugar os dois tubos a 1000 – 1500G durante 15 segundos

c) Com movimentos suaves, deslocar o botão de hemácias do tubo e

avaliar se houve ou não hemólise ou aglutinação.

d) Lavar os tubos “S” e “A” com salina em abundância 03 vezes decantar

bem a última lavagem.

3ª Etapa: Teste de antiglobulina humana (Coombs Indireto)



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Finalidade: Detectar anticorpos incompletos reativos pelo teste de coombs Indireto (anticorpo da classe IgG e anticorpos fixadores de componentes do complemento a membrana celular).

a) Acrescentar em cada um dos tubos 02 gotas de soro de coombs ou antí-

humano. homogeneizar bem.

b) Homogeneizar e centrifugar os dois tubos a entre (1000 a 1500 G)

durante 15 segundos.

c) Com movimentos suaves, deslocar o botão de hemácias do tubo e


d) Se o resultado for negativo (sem aglutinação), adicionar 01 gota de

controle de hemácias sensibilizada do grupo O.

e) Homogeneizar e centrifugar os dois tubos a entre (1000 a 1500 G)

durante 15 segundos.

f) Com movimentos suaves, deslocar o botão de hemácias do tubo e


OBS: Prova Cruzada Incompatível, deverá ser realizada até o final (até a 3ª

etapa), pois a fase em que a incompatibilidade se manifestar com maior

intensidade direcionara o técnico na sua resolução. Diante de uma

incompatibilidade, deve ser feito um protocolo, registrando as reações

observadas graduando – as em cruzes.

Nota: Na prova incompatível, deve–se ainda, contatar o médico solicitante, a fim

de informá-lo da situação e realizar também os testes abaixo:

a) Auto – Controle

b) Coombs Direto

c) Pesquisa de Anticorpos Irregulares



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I V – A N E X O S

1. DETERMINAÇÃO DO GRUPO ABO - DIRETA

VALORES DE REFERÊNCIA:

GRUPOS FENOTIPAGEM DIRETA

Soro Anti-A Soro Anti-B Soro Anti-AB

A + 0 +

B 0 + +

AB + + +

O 0 0 0

OBS: + = Presença de Aglutinação

0 = Ausência de aglutinação

TABELA PARA INTERPRETAÇÃO DE GRAU DE AGLUTINAÇÃO

NAS REAÇÕES IMUNOHEMATOLÓGICAS

ESCORE INTERPRETAÇÃO

4 Presença de único Grumo sólido, com sobrenadante claro. Reação positiva.

3 Presença de vários Grumos grandes, com sobrenadante claro. Reação positiva.

2 Presença de Grumos menores, com sobrenadante róseo. Reação positiva.

1 Presença de vários Grumos bem pequenos, com sobrenadante róseo. Reação positiva.

1/2 Presença de poucos Grumos bem pequenos, com sobrenadante róseo. Reação duvidosa.

O Ausência de Grumos. Reação negativa



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2. DETERMINAÇÃO DO GRUPO ABO - REVERSA

VALORES DE REFERÊNCIA:

+ = Presença de Aglutinação

O = Ausência de Aglutinação

TABELA PARA INTERPRETAÇÃO DE GRAU DE AGLUTINAÇÃO NAS REAÇÕES

IMUNOHEMATOLÓGICAS








FENOTIPAGEM REVERSA

GRUPO HEMACIAS A1 HEMACIAS B

A O +

B + O

AB O O

O + +

Material Plasma o Soro Plasma ou Soro

Reagente Hemácias Padronizadas Hemácias Padronizadas



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3. DETERMINAÇÃO DO FATOR RH










VALORES DE REFERÊNCIA


Soro Coombs (Anti globulina humana) CRh

RH Positivo (D) + 0

RH Negativo (D) 0 0

OBS1: + = Presença de Aglutinação

0 = Ausência de Aglutinação



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4. VARIANTE D’FRACO












Soro Coombs (Anti globulina humana) CRh

RH Positivo (D) + 0

RH Negativo (D) 0 0

OBS: + = Presença de aglutinação

0 = Ausência de aglutinação



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5. PESQUISA DE ANTICORPOS IRREGULARES


Aglutinação Ausente: Pesquisa de anticorpos irregulares negativa

Aglutinação presente: Indica a presença de anticorpos livres no soro do paciente os

quais correspondem a um ou mais antígenos presentes nas

hemácias usadas no teste.

Geralmente, os anticorpos frios da classe IgM reagem

inicialmente na fase salina e podem desaparecer nas fases

seguintes. Anticorpos quentes de classe IgG geralmente não

reagem na fase salina, mas suas reações são intensificadas nas

fases seguintes, principalmente após incubação a 37ºC e após a

adição da anti-globulina humana. Os anticorpos frios não têm

importância clínica, enquanto que os anticorpos quentes são de

grande importância clínica.












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6. COOMBS DIRETO


a) Ausência de aglutinação nos tubos CP (poli) e CM (mono): Coombs direto

negativo

b) Presença de aglutinação nos 02 tubos CP e CM: Coombs direto positivo.

c) Presença de aglutinação no tubo CP e ausência de aglutinação no tubo CM:

coombs direto positivo.

d) Presença de aglutinação no tubo CM e ausência de aglutinação no tubo CP repetir

a reação, pois isso não deverá ocorrer.





3 Presença e vários Grumos grandes, com sobrenadante claro. Reação positiva.





Usar o controle de hemácias em todos os tubos em que ocorram resultados negativos a fim de comprovar a exatidão da técnica.



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7. AUTO CONTROLE


Reação com o Soro mono ou Poloespecífico Auto – Controle

+ Positivo

O Negativo

+ Presença de Aglutinação (Teste Positivo)

O Ausência de Aglutinação (Teste Negativo)












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8. PROVA CRUZADA

Se houver aglutinação no tubo “S” ou “A”, em quaisquer fases, os resultados serão de

incompatibilidade, e a bolsa não deverá ser transfundida. Existem exceções, como no

caso de anemias hemolíticas auto – imunes, porém isto deverá ser discutido com o

médico assistente do paciente e hemoterapeuta responsável pelo serviço.

+ Presença de aglutinação (teste positivo)

O Ausência de aglutinação (teste Negativo)








½ Presença de poucos Grumos bem pequenos, com sobrenadante róseo. Reação duvidosa.


Reação com o soro ou mono

especifica

Teste de Compatibilidade

+ Positivo

O Negativo



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I V – F L U X O G R A M A

Procedimento Técnico para Determinação do Grupo ABO – Direta

colocar 1,0 ml de solução

salina 0,9% em um tubo de

hemólise

Adicionar no tubo, 01 gota

(50 microlitros) do

concentrado de hemácias

Realização da

suspensão de

hemácias a 5%:

Início

Tipagem direta do

grupo sanguíneo ABO

Identificar 03 tubos A, B e AB

Pingar 01 gota de soro anti-A

no tubo A, 01 gota de soro

anti-B no tubo B e 01 gota de

soro anti-A, B no tubo AB

Pipetar 01 gota (50

microlitros) da suspensão de

hemácias a 5% em cada tubo

Agitar lentamente

Centrifugar 15 segundos

entre (1000 – 1500G);

Lavagem das

hemácias

Ressuspender delicadamente

o botão de hemácias

realizar a lavagem prévia do

sangue de cordão e sangue

de RN, devido à presença da

geléia de WORTON

Centrifugar a amostra de

sangue entre (1000 – 1500G)

por 05 minutos

Separar o plasma ou o soro

das hemácias, transferindo-o

para outro tubo;

Colocar um volume arbitrário

do concentrado de hemácias

em um tubo limpo

devidamente identificado

(pode ser 01 ml);

Adicionar solução salina

isotônica (0,9%) até 01 cm da

borda do tubo e vedar com

papel para filme ou outro;

Homogeneizar por inversão e

centrifugar por 2 minutos

entre (1000 –1500G);

Desprezar o sobrenadante

Repetir os três últimos

processos por mais duas

vezes

Deixar o tubo vedado até o

uso

Tipagem ABO e Rh

em sangue de cordão

e sangue de Rn

Identificar 04 tubos A, B, AB e

Rh

Pingar 01 gota de soro anti-A

no tubo A, 01 gota de soro

anti-B no tubo B e 01 gota de

soro anti-A, B no tubo AB e

uma gota de Rh (D) no tubo

Rh;

Pipetar 01 gota (50


hemácias a 5% em cada

tubo;

Agitar lentamente;

Centrifugar 15 segundos

entre (1000 – 1500G);


o botão de hemácias

Discrepância entre a

tipagem ABO direta e

reversa

Repitir a Tipagem Direta a

reversa com nova deluição

Colher do Paciente

Pingar uma gota do soro

anti–A no tubo A, uma gota

do soro anti–B no tubo B e

uma gota do soro anti–AB no

tubo AB

Agitar lentamente e

centrifugar 15 segundos entre

1000 e 1500g;


o botão de hemácias;

Considerar a tipagem direta

proveniente desse processo

Proceder ao teste de coombs

indiretoFim

Fazer Leitura

Fazer Leitura



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Procedimento Técnico para Determinação do Grupo ABO - Reversa

Início

Identificar 02 tubos de

ensaio a e b

Colocar em cada tubo

50 microlitros de soro e/

ou plasma a ser testado

No tubo a colocar 01

gota das hemácias -

teste A

No tubo b colocar 01

gota das hemácias -

teste B

Homogeneizar os tubos

Centrifugar por 15

segundos entre (1000 –

1500G)

Ressuspender

delicadamente o botão

de hemácias e anotar o

grau de aglutinação

Fim



24 / 31

Procedimento Técnico para Determinação do Fator RH

Início

Identificar 02 tubos

D(Rh) e CRh

Pingar 1 gota de

soro anti-D (Rh) no

tubo D e 01 gota do

reagente controle de

Rh no tubo CRh;

Pipetar 1 gota (50

microlitros) da

suspensão de

hemácias a 5% em

cada tubo

Agitar lentamente

Centrifugar 15

segundos entre

(1000-1500 G)

Ressuspender

delicadamente o

botão de hemácias

Fim

Fazer a Leitura



25 / 31

Procedimento Técnico para Variante D’fraco (Qdo RH Negativo)

In[icio

Preparar uma

suspensão de 5%

das hemacias a

serem classificadas

Identificar 02 tubos D

(Rh) e CRh

Pingar 01 gota de

soro anti-D (Rh) no

tubo D e 01 gota do

reagente controle de

Rh no tubo CRh;

Pipetar 01 gota (50

microlitros) da

suspensão de

hemácias a 5% em

cada tubo;

Agitar lentamente

Incubar o tubo D

(Rh) e CRh em

banho Maria a 37 ºC

entre 15 a 30

minutos

Após a incubação,

lavar os tubos 03

vezes em solução

salina a 0,9%,

decantando o

sobrenadante

Após a última

lavagem, decantar

totalmente o

sobrenadante

Pingar 02 gotas de

soro de Coombs

(Antiglobulina

humana

monoespecífico, ou

Anti-humano

poliespecífico);

Homogeneizar e

centrifugar por 15

segundos entre

(1000-1500G);

Ressuspender

delicadamente o

botão de hemácias

Para confirmação do teste

negativo é valido adicionar

células sensibilizadas por

imunoglobulinas IgG e

centrifugar entre (1000 –

1500 G) durante 15 segundos

e observar a glutinação

o teste deu negativo

após a adição do

controle de hemácias?

Teste é inválido

Repetir o teste

Fim

N

S



26 / 31

Procedimento Técnico para Pesquisa de Anticorpos Irregulares

Inicio

1ª Etapa

Meio salino em

temperatura

ambiente

2ª Etapa:

Meio protéico em

temperatura

ambiente

3ª Etapa

Meio protéico em

temperatura de

37ºC

4ª Etapa

Teste de antiglobulina

humana (Coombs

indireto).

Ressuspender gentilmente os

glóbulos vermelhos das

hemácias sensibilizadas I e II,

invertendo os frascos pelo

menos 10 vezes. Não agitar.

Colocar em cada um dos dois

tubos de ensaio previamente

identificado I e II, 50

microlitros (1gota) do soro

sob triagem para anticorpos

irregulares

Acrescentar uma gota de

suspensão de hemácias

sensibilizadas ao tubo I ao

tubo II respectivamente

misturar bem

Centrifugar ambos os tubos

durante 15 segundos entre

(1000 – 1500 G)


o botão de hemácias em

cada tubo

Registrar a presença ou a

ausência de aglutinação ou

hemólise

Adicionar aos tubos I e II, 02

gotas de albumina bovina

22% e homogeneizar bem

Centrifugar ambos os tubos

durante 15 segundos entre

(1000 – 1500G)

Ressuspender

delicadamente o “botão” de

hemácias em cada tubo

observando a presença ou


hemólise

Incubar os tubos em banho

Maria a 37ºC durante 30

minutos

Após a incubação centrifugar

todos os tubos durante 15

segundos entre 1000 – 1500

G


o “botão” de hemácias em

cada tubo

Registrar a presença ou a


hemólise

Lavar as hemácias dos tubos

três vezes com solução

fisiológica a 0,9%.

Acrescentar uma gota do

soro anti-humano nos tubos I

e II e homogeneizar bem

Centrifugar os tubos entre

(1000 – 1500G) durante 15

segundos


o botão de hemácias e

verificar a presença ou

ausência de aglutinação e/ou

hemólise

Adicionar a cada tubo com

resultado negativo, uma gota

de hemácias sensibilizadas

do grupo O como controle de

qualidade da técnica

Homogeneizar e centrifugar

os tubos entre 1000 – 1500G

por 15 segundos

Fim



27 / 31

Procedimento Técnico para Coombs Direto

Início

Em um tubo de ensaio

devidamente identificado,

lavar 03 vezes com salina,

250 microlitros do

concentrado de hemácias

Após a última lavagem,

desprezar bem o

sobrenadante, invertendo o

tubo e enxugando as bordas

do tubo com papel

absorvente

Preparar uma suspensão a

5% das hemácias lavadas,

usando 1,0 ml de salina do

repipetador e (50 microlitros)

das hemácias já lavadas

Marcar 02 tubos de ensaio

com CP (coombs

poliespecífico) e CM (coombs

monoespecífico).

Adicionar em cada tubo (50


hemácias a 5%

Adicionar ao tubo CP, duas

(02) gotas de soro anti-

humano poliespecífico e ao

tubo CM duas (02) gotas de

soro de coombs (soro anti-

gama globulina humana

monoespecífico)

Homogeneizar delicadamente

e centrifugar os tubos entre

(1000 – 1500G) por 15

segundos

Ressuspender o botão de

hemácias delicadamente e

verificar a presença ou não

de aglutinação

incubar por 15 minutos em

banho maria a 37ºC e depois

centrifugar por 15 segundos

entre (1000 a 1500 G).

Os resultados foram

negativos?

Verificar a presença ou

ausência de aglutinação após

ressuspender o botão

Há aglutinação?

pode indicar a

presença de frações

do complemento,

sendo considerado

então, coombs direto

positivo.

S

N

Fim



28 / 31

Procedimento Técnico de Auto Controle

1ª Etapa

Meio protéico em

temperatura

ambiente

Lavar as hemácias do

paciente três vezes com

salina

Preparar uma

suspensão de hemácias

a 5% em salina

Marcar dois tubos de

ensaio: A (auto–

controle)

Colocar 50 microlitros do

soro ou plasma do

paciente

Adicionar 50 microlitros

da suspensão de

hemácias lavadas do

paciente

Adicionar 02 gotas de

albumina bovina 22%

Homogeneizar e

centrifugar entre 1000 –

1500 G durante 15

segundos

deslocar o botão de

hemácias no fundo do

tubo e avaliar de houve

ou não hemólise

Incubar o tubo em banho

– Maria a 37ºC durante

30 min

Homogeneizar e


1500 G durante 15

segundos




ou não hemólise

Lavar o tubo com salina

três vezes, e decantar

bem a salina da última

lavagem

Adicionar 02 gotas de

soro Anti – humano ou

soro de coombs

Homogeneizar e


1500 G durante 15

segundos




ou não hemólise

Início

Fim



29 / 31

Procedimento Técnico Prova Cruzada

1ª Etapa

Meio Protegido

em Temperatura

Ambiente

2ª Etapa

Meio Protéico a

37ºC

3ª Etapa

Teste de

antiglobulina

humana (Coombs

Indireto)

Realizar expressão do

“macarrão” da bolsa fazendo

com que todo o sangue do

conector seja introduzido na

bolsa, garantindo assim uma

amostra homogênea

Preparar uma suspensão de

hemácias a 5% em salina

Marcar dois tubos de

hemólise “S” e “A”.

Colocar 50 microlitros de soro

do receptor nos tubos “S” e

“A”.

Adicionar 50 microlitros da

suspensão de hemácias a 5%

nos tubos “S” e “A”.

Adicionar duas gotas de

albumina bovina 22% no tubo


os dois tubos a 1000 – 1500

G durante 15 segundos

Com movimentos suaves,

deslocar o botão de hemácias

do tubo e avaliar se houve ou

não hemólise ou aglutinação

Incubar os tubos a “S”e “A”

em banho-maria a 37 ºC por

30 minutos

Incubar os tubos “S” e “A” em

banho Maria a 37ºC por 30

minutos

Centrifugar os dois tubos a

1000 – 1500G durante 15

segundos




Lavar os tubos “S” e “A” com

salina em abundância 03

vezes decantar bem a última

lavagem

Acrescentar em cada um dos

tubos 02 gotas de soro de

coombs ou antí-humano.

homogeneizar bem


os dois tubos a entre (1000 a






adicionar 01 gota de controle

de hemácias sensibilizada do

grupo O

O Resultado foi

negativo?


os dois tubos a entre (1000 a






Fim

Início

S

N



30 / 31

V – C O N T R O L E D E R E V I S Õ E S

DATA ALTERAÇÃO REALIZADA RESPONSÁVEL

23/04/2010 Sem Alteração

Givanildo Vieira da Cunha


15/10/2011 Sem Alteração



17/02/2012 Alterações na Descrição da

Atividade no Fluxograma



sistemática de - HSR: Hospital Santa Rosa · PROCEDIM ENT O OPERACIO NAL PADRÃO POP-BSG-03 NORMA:...

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