UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARÁPRÓ-REITORIA DE PESQUISA E PÓS-GRADUAÇÃO

DIRETORIA DE PESQUISA

PROGRAMA INSTITUCIONAL DE BOLSAS DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA

RELATÓRIO TÉCNICO - CIENTÍFICO

Período: 09/2014 a 08/2015( ) PARCIAL( X) FINAL

IDENTIFICAÇÃO DO PROJETO

Título do Projeto de Pesquisa: Conservação de recursos zoogenéticos: produção in vitro de embriões de Pecari tajacu.

Nome da Orientadora: Hilma Lucia Tavares Dias

Titulação da Orientadora: Doutorado

Unidade: Campus Guamá, Instituto de Ciências Biológicas

Laboratório: Laboratório de Tecnologia Biomolecular

Título do Plano de Trabalho: Avaliação da qualidade microbiológica das carcaças de frango in natura comercializadas em diferentes pontos da cidade de Belém, PA.

Nome do Bolsista: Benedito Maia Neto

Tipo de Bolsa : ( ) PIBIC/CNPq( ) PIBIC/CNPq-AF( X ) PIBIC/UFPA( ) PIBIC/UFPA-AF( ) PIBIC/INTERIOR( ) PIBIC/FAPESPA( ) PARD( ) PARD – renovação( ) PADRC( ) Bolsistas PIBIC do edital CNPq 001/2007

Resumo do Projeto de Pesquisa: Atualmente, a Amazônia está no centro das discussões sobre a conservação

ambiental, assim como dos conflitos agrários, uma vez que o índice de

desenvolvimento humano (renda, educação e saúde) desta região é

considerado um dos mais baixos do Brasil (PUDN-ONU, 2012). Em parte,

esses problemas sócio-ambientais são reflexos da política de desenvolvimento

econômico adotado no passado para a região, a qual foi baseada

fundamentalmente em grandes latifúndios para a pecuária e no comércio da

madeira, e mais recentemente na exploração mineral. Entretanto, é possível

diminuir ou mesmo excluir alguns problemas enfrentados atualmente nesta

região, quer seja do ponto de vista ambiental, social ou econômico, por meio do

desenvolvimento e da difusão do conhecimento sobre processos/atividades

alternativos e rentáveis. Neste contexto, a exploração racional da rica

biodiversidade em benefício das comunidades é de fundamental importância.

As espécies autóctones, adaptadas as condições locais, são geneticamente

importantes e ideais para o manejo ou a criação. Em estudo sobre os produtos

florestais não madeireiros, a FAO (1999) afirma que o Brasil, em especial a

região Amazônica, possui uma grande quantidade destes recursos genéticos.

Entre esses há uma lista de animais da fauna nativa de interesse em

bioprospecção. Algumas espécies da fauna silvestre como o caititu (Pecari

tajacu), a capivara (Hydrochoerus hydrochaeris), a cutia (Dasyprocta sp.), a

paca (Cuniculus paca) e alguns quelônios são amplamente utilizados para o

consumo de carne e/ou ovos (Bonaudo et al., 2005; Pezzuti et al., 2004, 2010).

Em relação à biodiversidade de pouco adiantará possuí-la se não for possível

conhecê-la e utilizá-la em melhorias para a sociedade (Rumpf et al., 2000). O

uso da biotecnologia da reprodução possibilita a conservação da diversidade

biológica, sendo mais um recurso para evitar a perda das espécies (Barbosa,

2001). O caititu (Pecari tajacu) é um dos animais mais caçados na Amazônia

para alimentação humana e a sua criação em cativeiro é um instrumento legal

para a comercialização. Apesar do interesse na criação, há poucos dados

sobre a sua biologia, o que dificulta o aumento da produção desta espécie.

Diante do exposto, torna-se importante e necessário a aplicação de pesquisa

na área da reprodução animal que contribuam para o aumento na oferta

produtiva, e auxiliem o desenvolvimento sustentado da Amazônia.

Introdução

No processo de produção de aves de corte é aplicado metodologias,

para promoção de crescimento e tratamento de infecções, utilizando

antibióticos. Há problemas sérios desencadeados devido a isso, pois a

utilização deles gera, por processos evolutivos, a resistência de micro-

organismos patogênicos, o que é altamente problemático para saúde animal e

humana (Loddi et al, 2000 ). Essa correlação entre uso de antibióticos e

resistência foi evidenciada, por análise comparativa, entre amostras de carcaça

de franco orgânico, criado sem utilização de antibióticos, e convencional,

mostrando que a ocorrência de enterobactérias resistentes isolados das ultimas

é maior que o das primeiras (ROSSA et al, 2013).

Há diversos estudos mostrando a existência perda de sensibilidade.

Cardoso et al.(2002) analisando a sensibilidade de cepas de Escherichia coli

constatou que mesmo os antibióticos de ampla ação estão se tornando

ineficazes contra esse patógeno. Algo certamente prejudicial à produção de

aves de corte, quanto à saúde humana. A ocorrência de genes produtores de

resistência como, por exemplo, o blaKpc vem crescendo progressivamente em

bactérias gram-negativas, demonstrando a gravidade do atual panorama (Alvez

e Behar, 2013).

Para a avaliação microbiológica dos alimentos, o International Committe

on Microbiological Specification for Foods (ICMSF, 1978) recomenda a análise

de microrganismos patogênicos, que compreendem as bactérias de

importância em saúde pública (Freitas et al., 2001).

O processo de contaminação está relacionado à condição de higiene da

granja como a procedência do lote; condição higiênico-sanitária dos

abatedouros, contaminação cruzada ocorrida nas áreas de depenagem,

lavagem e embalagem (Tirolli e Costa, 2006). Então, pode-se deduzir que a

maior porcentagem das amostras contaminadas será daquelas obtidas de

feiras populares, onde os procedimentos de abate e embalagem são

artesanais; em comparação as de supermercados.

Os procedimentos de obtenção das amostras seguiram recomendações

estabelecidas pela Resolução RDC n° 12, de 02 de janeiro de 2001. Já a

análise foi realizada de acordo com o protocolo fornecido pelo Ministério da

Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA).

Nesse trabalho foram selecionas para estudo as bactérias

Staphylococcus spp, Coliformes fecais, Escherichia coli e Salmonella spp.

Devido ser importantes agentes indicadores de contaminação e relacionadas a

infecção alimentar.

Justificativa

Desde a introdução em 1937 dos primeiros agentes antimicrobianos

eficazes, isto é, as sulfonamidas, ocorreram o desenvolvimento de mecanismos

de resistências específicos que tornaram ineficiente o uso terapêutico delas. O

uso de antibióticos, dessa maneira, mesmo utilizado com critério, induz o

surgimento de linhagens resistentes. O Monitoramento, porém, do uso de

antibióticos e do surgimento de organismos resistentes é importante para

conter a origem e disseminação de patógenos resistentes. Há, pois, uma forte

correlação entre a frequência de utilização dessas substâncias e o surgimento

de cepas que resiste a elas (Davies e Davies, 2010).

A atualização dos dados sobre resistência microbiana é de importância

clinica e necessária para manter os profissionais da saúde informados, melhor

direcionando o diagnóstico e tratamento de possíveis vítimas.

Há também a possibilidade de se aplicar o conhecimento a fim de

executar medidas preventivas como, por exemplo, a regulação do uso de

promotores de crescimento para aves, assim como o uso pela medicina animal

e humana. Há evidências de que o tratamento indiscriminado de animais, com

antibióticos, tornem seus produtos e derivados, fonte para resistência aos

antibióticos na espécie humana (MOTA et al. 2005).

Uma vez que se originam genes provedores de resistência, pode ocorrer

uma cascata de transferência dessa adaptação, devido ao grande potencial

para mobilidade de informação genética entre as bactérias, podendo gerar

graves problemas a saúde humana. Isso é favorecido por concentrações

subterapêuticas de antimicrobiano, as quais atuam como fator seletivo de

cepas menos sensíveis, que podem transferir os genes por conjugação ou

transdução (JAWETZ, et al., 2001).

A alimentação é uma das principais conexões entre os patógenos que

afetam humanos e animais. Técnicas higiênico-sanitárias são importantes

barreiras profiláticas, não somente a infecção, como também a disseminação

de enterobactérias resistentes.

Diante do conhecimento da patogenicidade das bactérias

Staphylococcus aureus, Coliformes fecais, E. coli e Salmonella spp para o

homem e outros animais e de sua resistência a determinadas drogas

antimicrobianas, este projeto tem como objetivo avaliar a qualidade

microbiológica da carne de frango e testar a sensibilidade e resistência das

diferentes amostras.

Objetivos

Objetivo Geral

Determinar a qualidade microbiológica da carne de frango comercializada

na região metropolitana de Belém-PA

Objetivos Específicos

Identificar e quantificar Coliformes a 35 °C, Coliformes a 45 °C, E. coli,

Staphylococcus ssp. e Salmonella spp.;

.

Determinar o perfil de sensibilidade e resistência de bactérias isoladas

das carcaças de frango;

Verificar a adequação microbiológica destas amostras a legislação

vigente.

Materiais e Métodos

Foram obtidas 15 amostras para o estudo, em feiras livres e

supermercados da cidade de Belém, realizando-se três coletas alternadas em

cada estabelecimento. Foram selecionados cortes de franco como coxa,

sobrecoxa, asa e peito, devidamente armazenados em cubas isotérmicas,

cobertas com gelo reutilizável e transportados ao laboratório para o

processamento. Todas as condições de assepsia foram atendidas, seguindo

procedimentos estabelecidos na Resolução RDC ANVISA n° 12, de 2 de

janeiro de 2011 (BRASIL, 2001).

Pesquisa de Staphylococcus aureus

Para isolamento de Staphylococcus aureus foram seccionados partes

superficiais da amostra até a massa de 25 g e homogeneizado em solução

peptonada 0,1%. Dessa mistura realizaram-se as diluições seriadas até 10 -3,

fazendo uso da proporção de 1 mL da diluição anterior para 9 mL de solução

peptonada 0,1%.

Foram transferidas alíquotas de 0,1 mL de cada diluição para placas

correspondentes, em duplicata, e distribuídas uniformemente com uma alça de

Drigaslski estéril. O meio utilizado nessas placas foi o Baird Parker (BP) com

5% de solução de gema de ovo com telurito. Ele é um meio seletivo e

diferencia que possibilita a identificação de atividade proteolítica e lipolítica do

Staphylococcus aureus, através do surgimento de um halo de transparência e

outro de precipitação em torno da colônia; além disso, Staphylococcus

coagulase positivos tem a capacidade de reduzir o telurito, formando colônias

negras.

As placas foram incubadas a 37 °C por 48 horas e as colônias típicas

(presença dos dois halos e colônias negras) e atípicas(ausência ou presença

de apenas um halo, com colônias negras ou cinza) foram contadas para

obtenção da unidade formadora de colônias(UFC). Placas que apresentaram

menos que 20 e mais que 200 colônias foram ignoradas na contagem. A

fórmula utilizada para contagem segue abaixo:

R = a x 10b UFC/g ou mL

R = resultado

a = os dois primeiros algarismos significativos, números de 0 a 9

b = expoente em módulo da diluição usada (0 a 10)

UFC = unidade formadora de colônias

g = grama e mL= mililitro

Após a seleção química e tintorial, foram realizados os testes da catalase,

da coagulase e a coloração de Gram. A primeira tem como base a identificação

da presença da enzima catalase, a qual decompõe peróxido de hidrogênio,

produzindo gás oxigênio, visível pela formação de bolhas. A prova é executada

adicionando uma colônia da bactéria a ser testada e adicionando peróxido de

hidrogênio a 3% e observando a reação.

A coagulase permite a distinção de Staphylococcus patogênicos e não

patogênicos, sendo ótimo indicador de S. aureus. A capacidade de coagular o

plasma de coelho utilizado no teste demonstra resultado positivo para presença

da enzima. O método utilizado foi a prova em lâmina na qual é adicionado, em

uma lâmina, duas gotas de solução salina a 0,85%, uma colônia do

microrganismo e uma gota do plasma de coelho, respectivamente.

A coloração de Gram permite a distinção morfológica e tintorial dos

microrganismos. Sendo os Staphylococcus Gram-positivos e possuindo formas

circulares (cocos). O processo diferencial se deve a diferença constitucional da

parede celular das bactérias, com as positivas retendo o corante cristal violeta

durante o tratamento com etanol.

O fluxograma a segui ilustra a sequência utilizada para identificação de S.

aureus

Fonte: Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA), 2010.

Pesquisa de Coliformes e Escherichia coli.

A partir dos cortes de frango foi obtido massa de 25 gramas,

adicionada a 225 mL de solução peptonada 0,1% e homogeneizada. Dessa

solução realizaram-se diluições seriadas utilizando-se a proporção de 1 mL da

diluição anterior para 9 mL de solução peptonada 0,1%, formando a diluição

subsequente. Esse processo se repetiu até obter-se a diluição de 10-4.

Para obtenção do número mais provável de Coliformes Totais e

Termotolerantes foram realizadas duas provas em meios seletivos. Na

primeira, foi realizada incubação das diluições, em séries de três tubos de

ensaio contendo caldo lauril sulfato de sódio, o qual apresenta um agente

surfactante aniônico que atua na membrana citoplasmática de microrganismos

Gram positivos, inibindo o seu crescimento. O meio foi mantido incubado na

estufa a 35 °C até 48 horas e verificando-se em seguida a formação de gás em

tubos de Durham invertidos previamente adicionados.

Na segunda etapa os tubos com turvação e formação de gás,

características positivas para Coliformes totais, foram repicados para tubos

correspondentes contendo caldo verde brilhante bile lactose 2%, com tubo de

Durhan invertidos, e incubados em estufa a 37 °C por 24 horas, para

confirmação de Coliformes Totais. Esse meio apresenta em sua composição

bile bovina e um corante derivado do trifenilmetano, responsáveis pela inibição

dos microrganismos Gram positivos.

O mesmo procedimento foi executado para confirmação de Coliformes

termotolerantes, utilizando como meio seletivo o caldo EC, o qual apresenta em

sua composição uma mistura de fosfatos que lhe confere poder tamponante,

impedindo a sua acidificação, e sais biliares, responsáveis pela inibição dos

microrganismos Gram positivos. A temperatura de incubação de 45 °C é um

dos principais fatores de diferenciação, pois favorece a proliferação de

Coliformes termotolerantes, em detrimento dos demais. Os positivos foram

identificados pela presença de turvação e formação de gás, contido dentro do

tubo de Durhan.

Com os resultados foi realizada a quantificação do NMP (Número Mais

Provável) utilizando a tabela fornecida pela Bacteriological Analytical Manual

Online, 2001 para inóculo de 1,0, 0,1 e 0,01 mL e intervalo de confiança de

95%.

Os microrganismos que cresceram no caldo EC foram semeados em

EMB (Ágar eosina-azul-de-metileno) para isolamento e identificação de E. coli.

Os corantes de anilina (eosina e azul-de-metileno) desse meio atuam como

inibidores do crescimento de gram-positivas e algumas gram-negativas e

apresenta reação com precipitação de corante sobre bactérias produtoras de

ácidos fortes, que passam a apresentar coloração negro-esverdeadas com

brilho metálico. A bactéria E. coli sendo intensa fermentadora de lactose,

acidifica o meio apresentando a cor diferencial citada. Os resultados

bioquímicos esperados estão apresentados na tabela número 1.

Pesquisa de Salmonella spp.

Foram extraídos, e pesados, 25 gramas das amostras e adicionas em

225 mL de solução peptonada 1% tamponada, para cada amostra. Deixadas

uma hora em temperatura ambiente e posteriormente incubadas a 36 °C

durante período de 16 horas.

Seguiu-se com o enriquecimento seletivo. Pipetaram-se alíquotas de 0,1

mL das amostras pré-enriquecidas para tubos contendo 10 mL de caldo

Rappaport Vassiliadis, com incubação de dois tubos a 41 °C em banho-maria,

por 24 horas. Em outro tubo, pipetaram-se alíquotas de 1 mL das amostras

pré-enriquecidas em tubos contendo 10 mL de caldo selenito cistina e

incubadas juntamente com o Rappaport. Esses caldos possuem substâncias

inibitórias que caracterizam a seletividade do meio, como verde malaquita e

cloreto de magnésio, no primeiro caldo e, selenito de sódio o qual atua no caldo

selenito cistina inibindo o crescimento de coliformes e enterococos. A

temperatura também atua na seleção.

A partir dos caldos seletivos de enriquecimento, repicou-se sobre a

superfície previamente seca das placas, com cada meio sólido seletivo,

estriando de forma a se obter colônias isoladas. Dessa forma foram obtidas

duas placas de Ágar Verde Brilhante Vermelho de Fenol Lactose Sacarose

(BPLS), uma originária do caldo Rappaport Vassiliadis e outra do caldo selenito

cistina e duas placas do Agar Xilose Lisina Desoxicolato (Agar XLD), obtidas do

mesmo modo. Incubaram-se todas as placas, invertidas, em estufa a 36 °C por

24 horas. No BPLS há a presença de novobiocina a qual inibe o crescimento

de Proteus spp.a bile bovina e o corante verde brilhante inibem microrganismos

Gram-positivos. Já o XLD é um meio seletivo e diferencial, sua seletividade se

deve a presença principalmente de desoxicolato de sódio e diferenciação por

um sistema de indicador de H2S, o qual permite a visualização do sulfeto de

hidrogênio produzido.

As colônias positivas apresentam-se incolores ou de cor rosada, entre

translúcidas a ligeiramente opacas no BPLS. No XLD elas aparecem vermelho-

amareladas com centros pretos. A confirmação foi realizada pelos testes

bioquímicos listados na tabela 1.

Tabela 1- Perfil Bioquímico e de Motilidade

TESTE BÍOQUIMICO RESULTADO

Salmonela Escherichia coli

Presença de gás sulfídrico (H2S) Positivo Negativo

Presença de gás V Positivo

D-glicose Positivo Positivo

D-sacarose Negativo Positivo ou negativo

D-lactose Negativo Positivo

VM Positivo Positivo

VP Negativo Negativo

Indol (IDL) Negativo Positivo

L-triptofano(fenilalanina desamilase) Negativo Negativo

L-lisina (LDC) Positivo Positiva ou Negativa

Motilidade Positivo Positiva ou Negativa

Citrato Positivo Negativo

Urease Negativa

Fonte: Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA), 2010.

Antibiograma

As bactérias isoladas e identificadas como Staphylococcus aureus,

Salmonela spp. e E. coli foram utilizadas na realização do antibiograma, para

analisar o perfil de resistência.

O meio aplicado foi o Agar Mueller Hinton que é o recomendado pelos

padrões estabelecidos pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária, norma

M2-A8, Vol 23, N° 1 de janeiro de 2003 (ANVISA, 2003). Utilizado no

procedimento de difusão de disco para obtenção de resultados de sensibilidade

dos microrganismos aos agentes antimicrobianos.

Esse meio permite a difusão através de Agar em gel dos agentes

antimicrobianos impregnados em discos de papel. A concentração de cada

substância testada é padronizada com a finalidade de se obter uma correlação

adequada entre o diâmetro do halo de inibição formado, em meio com bactéria

sensível, com a concentração mínima inibitória. A quantidade de bactérias

utilizadas como inoculo é padronizada também, e a determinação da

sensibilidade, resistência intermediária ou resistência é executada através da

comparação das dimensões das zonas de inibição formadas com as tabelas 2A

a 2D no documento M100(M2) do CLSI. OS antibióticos testados para cada

bactéria estão listados na tabela 2.

Tabela 2. Antimicrobianos aplicados no teste

Microrganismo / AntimicrobianoStaphycoccus Salmonela spp Escherichia coli

Bacitracina Acido Nalidixico(30 µg)

Acido Nalidixico (30 µg)

Cloranfenicol(30 µg )

Nitrofunantoína(300 µg)

Nitrofunantoína(300 µg)

Cefalexina(30 µg )

Cloranfenicol(30 µg )

Cloranfenicol (30 µg)

Vancomicina(30 µg )

Amoxilina (10 µg )

Amoxilina(10 µg )

Penicilina (10 UI)

Estreptomicina (10 µg )

Estreptomicina (10 µg )

Tobramicina (10 µg )

Eritromicina (15 µg )

Eritromicina (15 µg )

Oxacilina(1 µg )

Sulfonamidas(300 µg )

Sulfonamidas (300 µg )

Amoxilina(10 µg )

Tetraciclina(30 µg )

Tetraciclina (30 µg )

Norfloxacin NorfloxacinNovobiocina Novobiocina

Acido nalidixico(30 µg )

Acido nalidíxico(30 µg )

Tetraciclina (30 µg )

Tetraciclina (30 µg)

Azitromicina (15 µg)

Azitromicina (15 µg )

Sulfonamidas (300 µg )

Sulfonamidas(300 µg )

Resultados e Discussão

Das 15 amostras coletadas seis foram positivas para Staphylococcus

spp. (40%) e quatro para Staphylococcus aureus (26,67%). Cinco delas

apresentaram presença de Salmonella spp. (33,3%) e de nove foi possível

isolar cepas de Escherichia coli (60%). O resultado das contagem de colônias

de Staphylococcus em unidade formadora de colônia (UFC), o número mais

provável (NMP) de Coliformes totais e termotolerantes, assim como os

resultados para Salmonella spp. encontram-se dispostos na tabela 3.

Nesse trabalho 33,3% das amostras poderiam ocasionar solmonelose,

caso ingerido. Estudo realizado por Torolli e Costa (2006) avaliou a presença

de Salmonella spp. em carcaça de frango, na cidade de Manaus-AM e,

obtiveram 50% de presença do microrganismo. Pires et al (2009) analizando 24

amostra de frango encontrou 0% de bactérias do gênero Salmonella. Esses

resultados discrepantes provavelmente estão relacionados à manipulação do

alimento; condições higiênicas sanitária dos abatedouros, contaminação

cruzada nas áreas de depenagem, lavagem, resfriamento e embalagem. Além

de contaminação ocorrida durante a manipulação do comerciante e transporte

(Corry et al 2002; Mikolajczyk e Radkowski, 2002).

Tabela 3- Resultados encontrados para presença de microrganismos indicadores em cortes de carcaça de frango, na região metropolitana de Belém-PA.Amostra Coliformes

totais ( NMP/g)

Coliformes termotolerantes

(NMP/g)

Staphylococcus

(UFC/g)

Salmonella spp.

*S1 46 46 <20 Presente

*S2 240 46 8,4 x 10 2 Ausente

*S3 460 0 4,3 x 10 3 Presente

**S4 3 3 <20 Presente

**S5 46 4,3 2,5 x10 3 Ausente

**S6 2,3 0 5,9 X 10 2 Ausente

***F1 >1100 >1100 1,21 x 104 Ausente

***F2 1100 240 9,6 x 10 2 Ausente

***F3 >1100 >1100 1,12 x 10 4 Ausente

*F4 >1100 >1100 <20 Presente

*F5 3 <3 <20 Ausente

*F6 110 110 9 x102 Ausente

*F7 9,3 9,3 <20 Presente

*F8 240 <3 1,86 x103 Ausente

*F9 >1100 24 3 x102 Ausente

*Resfriado, **congelado, ***in natura. S = supermercado, F= feira livre.

Há Coliformes totais em todos os cortes de frango analisados, sendo

impróprio para consumo 9/15 (60%) das amostras por estarem fora do padrão

(100 NMP/g). Resultado diferente foi encontrado por Delú et al (2006) ao

avaliar as condições higiênico-sanitárias de trinta amostras de cortes de frango

resfriados, comercializados em Minas Gerais, onde 100% das amostras

apresentavam-se contaminadas por coliformes totais e fecais, contudo, de

acordo com o limite estabelecido pela legislação todas estavam próprias ao

consumo. A identificação E. coli em 60%(9/15) do material indica contaminação

de origem fecal, podendo conter a presença do enteropatógeno. Leite e Franco

(2006), trabalhando com trinta amostras de carcaça de frango, observou que

80% delas atendiam ao padrão de qualidade preconizado pela legislação

vigente e 20% apresentavam contagem superior ao permitido, sendo a maior

parte proveniente de estabelecimentos sem inspeção.

Staphylococcus estava ausente em 33,3 % (5/15) das amostras e acima

do preconizado pela legislação (104 UFC) em 13,3% (2/15), sendo as ultimas

resultado de amostras in natura, de estabelecimento não inspecionado e

regularizado. Freitas et al (2001) avaliando 15 carcaças de frangos

constataram a influência da temperatura na qualidade microbiológica, sendo a

variação de contagem 103 a 104 originária de carcaças mantidas a temperatura

ambiente.

Percebe-se pelos resultados (tabela 3) que as amostragens de feiras

populares são mais susceptíveis a contaminação, comparadas as de

supermercado. Sendo que das 9 amostras acima do padrão para Coliformes,

por exemplo, 7/9 (77,8%) foram de feiras e 2/9 (22,2%) de supermercados.

Algo relacionado a manipulação inadequada do alimento, temperatura de

resfriamento e exposição ao ambiente.

Para avaliar o perfil de sensibilidade e resistência antimicrobiana foram

selecionadas quatro cepas de Staphylococcus aureus, cinco de Salmonella spp

e nove de E. coli. Os valores encontrados estão disponíveis nas tabelas 4 e 5,

respectivamente.

Pode-se observar na tabela 4 que das cepas de Staphylococcus 0%

cloranfenicol, 75% bacitracina, 100% ácido nalidixico, 50% Sulfonamida e

25% de penicilina apresentaram resistência. Freitas et al (2001) trabalhando

com resistência de cepas isoladas de carcaça de frango observou que 30/33

(91,0%) das cepas apresentaram sensibilidade ao cloranfenicol, 17/33 ( 51,5%)

a bacitracina, 14/33 (42,4%) a penicilina e 14/33 (42,4%).

A porcentagem de Salmonella spp. resistente variou de 20% (1/5) a

100% (5/5), os antimicrobianos com menor efeito inibitório foram

nitrofunantoína, cloranfenicol, estreptomicina com 20% cada. Os

antimicrobianos mais eficazes foram eritromicina, acido nalidixico e

sulfonamidas, com respectivamente 100%, 60%, 60% de cepas resistentes.

Ribeiro et al (2006) pesquisando a resistência de 22 bactérias isoladas de

carcaça de frango congelada, no estado do Rio Grande do Sul, obteve

resultado divergente para tetraciclina, com 100% das cepas resistentes. O

mesmo autor observou 4,54% de resistência a cloranfenicol, 18,8% a

nitrofurantoína, 86,36 % a ácido nalidíxico e 100% a sulfozotrim.

Tabela 4- Perfil de resistência para cepas de Staphylococcus aureus

Antimicrobian

o

Staphyloccocus aureus resistentes (%)

Bacitracina 75%

Cloranfenicol 0%

Cefalexina 0%

Vancomicina 50%

Penicilina 25%

Tobramicina 0%

Oxacilina 75%

Amoxilina 25%

Norfloxacin 25%

Novobiocina 75%

Acido Nalidixico 100%

Tetraciclina 0%

Azitromicina 50%

Sulfonamidas 50%

Tabela 5- Perfil de resistência de cepas de Salmonella spp. e E.coli

Antimicrobiano Salmonella spp. resistente (%) E.coli resistente (%)

Acido Nalidixico 60% 55,5%

Nitrofunantoína 20% 0%

Cloranfenicol 20% 22,2%

Amoxilina 40% 55,6%

Estreptomicina 20% 33,3%

Eritromicina 100% 100%

Sulfonamidas 60% 11,1%

Tetraciclina 40% 55,6%

Conclusão

Este estudo averiguou e constatou a ocorrência de Salmonella spp., E.

coli e Sthahylococcus aureus em cortes de frango, comercializados na região

metropolitana de Belém-PA. Assim como foram quantificados o número mais

provável e unidade formadora de colônia de coliformes totais e Staphyloccocus

spp, respectivamente, e presença/ausência de Salmonella spp. para averiguar

a adequação a legislação.

Como observado, é necessário um maior controle da qualidade

microbiológica, principalmente nas zonas populares e não regularizadas de

comercialização. Seria recomendada a realização de trabalho de

conscientização a esses vendedores, com relação aos fatores interferentes na

qualidade do produto, a exemplo, técnicas adequadas de refrigeração,

cuidados com a higiene pessoal e manipulação das carcaças de frango.

O teste de resistência não apontou o desenvolvimento de resistência

contra agentes antimicrobianos, fora aqueles já descritos na literatura. As não

congruências de dados coletados, com os comparados de outros trabalhos

deve-se a fatores diversos, como a temperatura na qual as amostras estavam

acondicionadas, o número de amostras, as mais diversas vias de

contaminação por manipulação e locais selecionados.

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DATA : ______/_________/________

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