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CÂNCER DE PULMÃO NÃO –

PEQUENAS CÉLULAS

Clarissa Baldotto

II CURSO DE BIOLOGIA MOLECULARII CURSO DE BIOLOGIA MOLECULAR

27 DE AGOSTO DE 2011

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xxxO MARCO MOLECULAR

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xxxO QUE O CLÍNICO PRECISA SABER?

IDENTIFICAR UM ALVO DE ONCOGÊNESE

ENCONTRAR UM BIOMARCADOR

ESTABELECER A EFICÁCIA

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xxxBIOLOGIA MOLECULAR DO CÂNCER DE PULMÃO

• EGFR– Descrição da via

– Como interpretar o laudo

– Perguntas mais frequentes (qual mutação buscamos, onde buscá-las,)

– Resistência aos TKIs (EGFR, cMET)

• EML4-ALK– Descrição

– Métodos de diagnóstico

• BRAF e etc

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VIA DO EGFR

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ATIVAÇÃO DO EGFR

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ALTERAÇÕES TESTADAS DO EGFR

EXPRESSÃO DA PROTEÍNA POR IMUNOHISTOQUÍMICA

NÚMERO DE CÓPIAS DO GENE EGFR POR FISH

STATUS MUTACIONAL DO EGFR POR SEQUENCIAMENTO

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QUAL TESTE UTILIZAR?

VALIDAÇÃO EM ESTUDO

CLÍNICO

CAPACIDADE DE

PREDIÇÃO

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xxxEGFR – QUAL É O MARCADOR PREDITIVO?

Kobayashi S. NEJM 2006; 352: 786.

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xxxEGFR – QUAL É O MARCADOR PREDITIVO?

INTEREST – Pacientes com FISH +

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xxxEGFR – Resultados moleculares IPASS

• SLP

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xxxEGFR – Resultados moleculares IPASS

FISH pos/ EGFR mut FISH pos/ EGFR selvagem

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xxxEGFR – Resultados moleculares IPASS

FISH neg / EGFR mut FISH neg/ EGFR selvagem

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MUTAÇÕES DE EGFR

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MUTAÇÕES DE EGFR

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DECIFRANDO O CÓDIGO

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MUTAÇÕES DE EGFR

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xxxEGFR – Desmistificando o laudo

Exon 21

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xxxEGFR – Desmistificando o laudo

Exon 21

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xxxEGFR – Desmistificando o laudo

Aminoácido 3 letras 1 letra

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EXEMPLO

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xxxTIPOS DE MUTAÇÕES DE EGFR

CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM A SENSIBILIDADE AO TKI

ALTA SENSIBILIDADE

Deleções exon 19 L858R (exon 21) L861Q (exon 21) G719S (exon 18)

SENSIBILIDADE INTERMEDIÁRIA (erlotinibe > gefitinibe?)

D761Y (exon 19) L747S (exon 19)

RESISTÊNCIA T790M (exon 20) Inserções no exon 20

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xxxMÉTODOS DE DETECÇÃO DA MUTAÇÃO

MÉTODOS TECNOLOGIAS DE SCREENING

DETECÇÃO POR MUTAÇÃO ESPECIFICA

PCR/ Sequenciamento ✔

Nested PCR/ Sequenciamento ✔

PCR/HRMA/dHPLC (MELT) ✔

ARMS ✔

PNA/LNA Clamp ✔

SNAPSHOT ✔

ME PCR/ Sequenciamento ✔

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xxxO QUE O CLÍNICO PRECISA SABER? - EGFR

IDENTIFICAR UM ALVO DE ONCOGÊNESE

ENCONTRAR UM BIOMARCADOR

ESTABELECER A EFICÁCIA

EGFR É UM DRIVER DA ONCOGÊNESE

A PESQUISA DE MUTAÇÃO DE EGFR É O PADRÃO OURO

VÁRIOS ESTUDOS DE FASE III

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• QUEM BIOPSIAR

• ONDE BIOPSIAR

• E QUANDO TUDO FALHAR?

DÚVIDAS CRUÉIS

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xxxEM QUEM PESQUISAR?

Não tabagista

Tabagista

Ex-tabagista

Homens

Mulheres

Frequência de mutação de EGFR por (A) carga tabágica e (B) sexo

JClinOncol 2011; DOI: 10.1200/JCO.2010.32.6181

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xxxO TUMOR É HOMOGÊNEO?

• Três pequenas áreas foram selecionadas nos 50 tumores– Sem diferença de mutEGFR

• Cinco tumores foram dissecados

em 100 ou mais partes– Sem diferença de mutEGFR

Yatabe Y. J Clin Oncol 29:2972-2977

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xxxPSEUDO-HETEROGENEIDADE TUMORAL

• MASI

Yatabe Y. J Clin Oncol 29:2972-2977

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xxxRESISTÊNCIA AOS EGFR TKIS

Primária(< 10%)

Precoce Tardia

Mecanismodesconhecido

T790M : 50%Hiperexpressão de cMet : 20%

Outros: 30%

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xxxRESISTÊNCIA AOS EGFR TKIS

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• Mutação pontual

adquirida

• Mudança de uma

treonina para

metionina no códon

790 do exon 20

xxxEGFR – Mutação T790M

Kobayashi S. NEJM 2006; 352: 786.

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xxxRESISTÊNCIA AOS EGFR TKIS

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xxxINCIDÊNCIA DA MUTAÇÃO T790M

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• SLP MEDIANA

__T790M positiva

__T790M negativa

SIGNIFICADO DA MUTAÇÃO T90M “INICIAL”

ROSELL, ASCO 2010

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• SLP MEDIANA

– T790M positiva: 19 meses

– T790M negativa: 12 meses

SIGNIFICADO DA MUTAÇÃO T90M “ADQUIRIDA”

• SG MEDIANA

– T790M positiva: 39 meses

– T790M negativa: 26 meses

Oxnard et al. CCR publication on line Dez 2010

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xxxOPÇÕES ATUAIS DE TRATAMENTO

Continuar TKI

Continuar TKI e adicionar QT

Continuar TKI e Adicionar CETUXIMABE

Parar TKI e adicionar QT

TKI irreversível (estudo)

Estudos Clínicos

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xxxOPÇÕES ATUAIS DE TRATAMENTO

Continuar TKI

Continuar TKI e adicionar QT

Continuar TKI e Adicionar CETUXIMABE

Parar TKI e adicionar QT

TKI irreversível (estudo)

Estudos Clínicos

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xxxPROBLEMA DE RECIST

ASPIRATION STUDY

CPNPC avançado

EGFR mutado n=204

PD peloRECIST

PD por decisão médica

ERLOTINIBE ERLOTINIBE

PFS 1

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xxxOPÇÕES ATUAIS DE TRATAMENTO

Continuar TKI

Continuar TKI e adicionar QT

Continuar TKI e Adicionar CETUXIMABE

Parar TKI e adicionar QT

TKI irreversível (estudo)

Estudos Clínicos

Estudo fase II (BIBW e

Cetuximabe))

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H1650 – Deleção exon 19

xxxREVERTENDO A RESISTÊNCIA

H1975 – Exon 20 T790M

Exon 21 L858R

Mok et al. Dados não publicados. WCLC 2011.

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xxxBIBW 2992 + Cetuximabe

Jangijian et al. ASCO 2011. Abst # 7525

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BIBW 2992 + CETUXIMABE: Resposta

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xxxMet

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xxxMET - EGFR

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• Inibe a estimulação da

via pelo HGF

xxxcMet - MetMAb

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xxxMET Mab: IHQ

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xxxMET Mab em pacientes com IHQpos

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xxxO QUE O CLÍNICO PRECISA SABER? - MET

IDENTIFICAR UM ALVO DE ONCOGÊNESE

ENCONTRAR UM BIOMARCADOR

ESTABELECER A EFICÁCIA

A HIPEREXPRESSÃO DE C-MET ESTÁ ASSOCIADA A CRESCIMENTO

TUMORAL

IHQ É PROMISSORA PARA MetMab

ESTUDOS PROMISSORES DE FASE IIFASE III EM ANDAMENTO

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xxxESTUDO IDEAL

RESISTÊNCIA A TKI

BIÓPSIA MANDATÓRIA

T790M

C-MET

Outro

TKI irreversível

MetMab + TKI

Quimioterapia

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xxxTRANSLOCAÇÕES DE ALK

1)

2)

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xxxTRANSLOCAÇÕES DE ALK

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xxxTESTE PARA IDENTIFICAR ALK - FISH

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xxxTESTE PARA IDENTIFICAR ALK - FISH

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xxxTESTE PARA IDENTIFICAR ALK - FISH

CRITÉRIOS DE POSITIVIDADE

• A separação (split) de 3’ALK/5’ALK ocorre quando os sinais

verde/vermelho estão separados por um intervalo > 2 sinais

de diâmetro

• A amostra é positiva para o rearranjo de ALK quando os sinais

de split ou sinais isolados de 3’ALK estão presentes em > 15%

das células tumorais

CONSIDERAÇÕES

• Mínimo de 50 células tumorais

• Validado em estudo clínico (Kwak et al. NEJM, 2010)

• Reconhece outros parceiros de fusão

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xxxTESTE PARA IDENTIFICAR ALK – FUTURO?

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xxxSobrevida Global – Criotinibe 2a e 3a linhas

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xxxESTUDOS CLÍNICOS COM CRIZOTINIBE

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xxxO QUE O CLÍNICO PRECISA SABER? – EML4 -

ALK

IDENTIFICAR UM ALVO DE ONCOGÊNESE

ENCONTRAR UM BIOMARCADOR

ESTABELECER A EFICÁCIA

EML4-ALK É UM DRIVER DA ONCOGÊNESE

FISH É O PADRÃO OUROA IHQ É PROMISSORA

ESTUDOS DE FASE II PROMISSORESESTUDOS DE FASE III EM ANDAMENTO

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xxxBRAF

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xxxBRAF – CARACTERÍSTICAS CLÍNICAS

Paik et al. J Clin Oncol 29:2046-2051

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xxxBRAF – MUTAÇÕES

A: CPNPC B: Melanoma

Paik et al. J Clin Oncol 29:2046-2051

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xxx

“Doutor, aqui está meu

perfil molecular…”

Clarissa Baldotto | [email protected]

II CURSO DE BIOLOGIA MOLECULAR


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