Tcnicas e mtodos utilizados
- Tcnica do DNA recombinante: A tecnologia do DNA Recombinante foi
desenvolvida em 1973 e permite a transferncia do material gentico de um organismo
para o outro de forma efetiva e eficiente. Consiste em induzir um organismo e
amplificar a sequencia de DNA de interesse, em sistemas que permitem uma fcil
purificao e recuperao do referido fragmento de DNA. Para isso, so utilizados
vetores de clonagem (plasmdeos ou vrus) nos quais a sequncia de DNA de interesse
inserida, utilizando a enzima DNA ligase. Quando necessrio, o fragmento de DNA de
interesse pode ser libertado do vetor por meio de enzimas de restrio. Uma vez isolado
o gene de interesse, estes fragmentos de DNA (genes) so incorporados (por meio das
tcnicas de Engenharia Gentica) no Genoma do organismo alvo, resultando da um
OGM, cuja caracterstica adquirida passa a ser hereditria.
- Mtodo de bombardeamento: micropartculas de um metal (tungstnio ou ouro) so
revestidas por fragmentos de DNA contendo os genes selecionados. Atravs de um
aparelho ("canho de genes"), as partculas so aceleradas a altas velocidades e
bombardeiam o tecido vegetal que vai sofrer a transformao. As partculas penetram
nas clulas e libertam os fragmentos de DNA. As clulas da planta assimilam os genes e
alguns passam a integrar o genoma.
- Mtodo de infeco por bactrias: O mtodo de infeco por bactrias, em vez do
bombardeamento de genes, usa bactrias para infectar a planta a ser modificada e
transportar os novos genes para o seu genoma. O que os cientistas fazem substituir os
genes infectados, que ficam no plasmdeo Ti (T-DNA) da bactria, pelos genes
selecionados. Clulas de embries da planta que se quer modificar so colocadas em
contato com uma suspenso contendo as agrobactrias (so bactrias do solo com
capacidade de se associarem espontaneamente a algumas plantas e transferir
naturalmente alguns dos seus genes para elas). Ao infectar os embries, elas transferem
para o genoma da nova planta os genes com as instrues para dar as caractersticas
desejadas.
- Eletroporao de protoplastos e clulas vegetais: Protoplastos so clulas vegetais,
desprovidas de parede celular. Para a transformao, so incubados em solues que
contm os genes a serem transferidos e, em seguida, um choque elctrico de alta
voltagem aplicado por curtssimo tempo. O choque causa uma alterao da membrana
celular, o que permite a penetrao e eventual integrao dos genes no genoma.
- Biobalstica: Tcnica introduzida no incio da dcada de oitenta. Baseia-se na
utilizao de microprojteis de ouro ou tungstnio cobertos com os genes de interesse.
Os microprojteis so acelerados com plvora ou gs em direo aos alvos que, neste
caso, so os tecidos vegetais. Os genes e o projtil entram nas clulas juntos de maneira
no-letal, localizando-se aleatoriamente nas organelas celulares. Em seguida, o DNA
dissociado das micropartculas pela ao do lquido celular, ocorrendo o processo de
integrao do gene exgeno no genoma do organismo a ser modificado. A velocidade
alcanada pelos microprojteis atinge cerca de 1500.
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