A INFLUNCIA DO CONSUMO DE LCOOL DURANTE A GESTAO E LACTAO NA APRENDIZAGEM DE FILHOTES

A INFLUNCIA DO CONSUMO DE LCOOL DURANTE A GESTAO E LACTAO NA APRENDIZAGEM DE FILHOTES.

Liliane Maria da SilvaGraduanda em Psicologia, FAI Adamantina- SP.*Bolsista FAI/CNPqAgostinha Mariana Costa de AlmeidaProfessora Doutora Faculdades Adamantinenses Integradas - FAIRESUMOO presente trabalho tem como objetivo comparar o desempenho de filhotes de gestantes submetidas ao uso de lcool com o de filhotes de mes sem uso de lcool, em tarefas de aprendizagem em discriminao complexa utilizando estmulos luz e som. O mtodo utilizado o experimental, sendo que na 1 fase do experimento foram utilizados 8 ratos Wistar fmeas, primparas e adultas pesando em mdia 250 gramas. Os grupos foram divididos em experimental que recebeu soluo com lcool e o controle que recebeu gua, nesta fase h a dependncia do lcool, ocorrendo a ingesto da soluo alcolica at a fase de lactao dos filhotes. Na segunda fase do experimento faremos os testes de aprendizagem onde comparamos os desempenhos dos grupos controle e experimental sendo retirados oito filhotes de cada grupo para tarefa de aprendizagem de discriminao complexa que ser realizada nas Caixas de Skinner, quando os filhotes estiverem com 90 dias de nascidos. Consistindo na tarefa de discriminar estmulos, sendo o estmulo x (luz) e o Y (som) quando apresentados juntos sero seguidos de reforo, quando um nico estmulo for apresentado, o animal no ser reforado. A influncia que o lcool sobre filhotes de ratas Wistar submetidas ao uso de lcool durante o processo de gestao e amamentao pode se refletir na diferena de desempenho, na maior ou menor habilidade em discriminar estmulos em procedimentos que envolvam aprendizagem em discriminao complexa. O presente estudo faz-se necessrio em modelos animais para obter dados que possam ser aprofundados sobre os malefcios causados pelo lcool em gestantes, na aprendizagem em discriminao mais complexa que envolva memria retrospectiva para executar tarefas. Palavras-chave: aprendizagem; discriminao, ratas Wistar, filhotes e lcool.

ABSTRACT

This paper aims to compare the performance of pups of pregnant women who use alcohol with the offspring of mothers without alcohol, in discrimination learning tasks in complex stimuli using light and sound. The method is experimental, and the 1st phase of the experiment was used 8 female Wistar rats were primiparous and adult weighing on average 250 grams. The groups were divided into experimental receiving solution with alcohol and control that received water at this stage there is alcohol dependence, occurring intake of alcoholic solution to the lactation of the pups. In the second phase of the experiment will make the learning tests where we compared the performances of the control and experimental groups being removed eight pups from each group to discrimination learning task complex which will be held in Skinner boxes, when the puppies are born with 90 days of. Consisting in the task of discriminating stimuli, and the stimulus x (light) and Y (sound) when presented together will be followed by reinforcement, when a single stimulus is presented, the animal will not be enhanced. The influence of alcohol on the offspring of female rats subjected to alcohol use during pregnancy and breastfeeding may be reflected in the difference in performance, in greater or lesser ability to discriminate stimuli in procedures involving complex discrimination learning. This study is necessary in animal models to obtain data that can be deepened about the harm caused by alcohol in pregnancy, in discrimination learning involving more complex to perform retrospective memory tasks.Key-words: learning, discrimination, female Wistar rats, chicks and alcohol.

INTRODUO

O consumo abusivo de bebidas alcolicas - um problema de sade pblica, uma vez que, de acordo com estimativas, cerca de 14% da populao preenchem os critrios para dependncia ou abuso de lcool. O hbito de beber um dos costumes mais antigos da humanidade, datando desde 6.000 A.C. e que continua atual no mbito social. Segundo Surkan et al. (2012) o consumo de lcool um importante fator de risco para a doena nos pases desenvolvidos. Alm de suscetibilidade gentica, o consumo de lcool moldado pelo ambiente social e familiar. A qualidade das relaes parentais pode ser um dado importante para o abuso de lcool. De acordo com Santos et al. (2010), o alcoolismo definido como uma sndrome multifatorial com comprometimento fsico, mental e social. Estima-se que mais de dois teros das pessoas em pases ocidentais bebem alm do que apenas ocasionalmente. Estudos apontam que nos Estados Unidos aproximadamente 10% das mulheres e 20% dos homens preenchem critrios diagnsticos para abuso do lcool, e 3% a 5% das mulheres e 10% dos homens preenchem critrios para dependncia ao longo da vida. Segundo Santos et al. (2010), o alcoolismo um problema que afeta de 1 a 2% das mulheres em idade frtil. O consumo de lcool, tanto moderado como alto, durante o incio da gravidez, pode ocasionar alteraes do crescimento e do desenvolvimento morfolgico do feto, sendo considerado, atualmente, como um problema de sade pblica. Apesar de gerar um grande custo social, ainda h carncia de estudos epidemiolgicos sobre efeitos do lcool sobre o feto no Brasil. A metabolizao do etanol feita principalmente no fgado e se inicia imediatamente aps a ingesto. O consumo de lcool por mulheres no perodo de gestao e lactao pode afetar de modo varivel de gravidade, o desenvolvimento embrionrio e fetal, como por exemplo, a prematuridade e natimortalidade. Sabe-se que o etanol causa danos nos rgos em geral e nos neurnios adultos ou em desenvolvimento e induz importantes efeitos neurotxicos no desenvolvimento do crebro (Ferreira & Silva, 2005). Gestao com lcool Santos et al. (2010) afirmam que devido a seu pequeno tamanho e suas propriedades de dissociao e polarizao, o lcool solvel em gua e relativamente solvel em solventes no polares. Por esta razo, pode atravessar as membranas celulares e se difundir por todos os lquidos e tecidos do organismo. Dessa forma, atravessa livremente a barreira placentria e se distribui pelo lquido amnitico, atingindo os tecidos do feto. Os nveis sanguneos materno e fetal so aproximadamente iguais aps a ingesto materna de lcool. A difuso passiva do lcool ocorre por gradiente de concentrao de tal maneira que os nveis materno e fetal so similares at que todo o etanol seja metabolizado. De acordo com o autor, h possveis efeitos teratognicos do lcool que se expressam em aumento da incidncia de abortos, natimortos e malformaes congnitas em recm-nascidos de mes alcoolistas. H uma associao bem documentada entre a ingesto materna de lcool e o desenvolvimento da Sndrome Alcolica Fetal (SAF), que caracterizada por dficit de crescimento, dismorfismo facial e evidncia de anormalidades do sistema nervoso central. H poucos dados sobre efeitos teratognicos do lcool. Estima-se a incidncia de alcoolismo materno em 6/1.000 gestantes e a incidncia de SAF em 1/1.000 recm-nascidos (RNs). No entanto, calcula-se que um quarto das grvidas deste pas faa uso espordico de bebida alcolica. H diversos estudos mostrando os efeitos do etanol em descendentes de ratas nas quais foi administrado lcool durante a gestao, claramente demonstrando a associao entre alcoolismo na gravidez e defeitos teratognicos encontrados nos fetos. A comparao entre os achados em descendentes humanos expostos ao etanol durante a vida uterina bastante consistente e justifica a escolha de roedores para os estudos animais. Ainda de acordo com o autor o estudo dos efeitos do lcool em condies controladas torna-se importante para se reconhecer os diferentes efeitos dessa substncia sobre o organismo. No entanto, sabe-se que a suscetibilidade fetal ao lcool modulada por quantidade ingerida, poca da exposio, estado nutricional e capacidade de metabolizao materna e fetal. Segundo Guerri e Sanchis (1985) o etanol atravessa livremente a barreira da placenta, mas existe um gradiente de concentrao de acetaldedo entre me e feto que varia com a idade de gestao. De acordo com Travis et al. (1995) o consumo crnico de lcool em ratas grvidas produziu um acmulo de etanol elevado em fluidos fetais e alteraes na atividade do fgado, (ADH, enzima lcool-desidrogenase), dependendo da situao fisiolgica (gravidez, desenvolvimento, estado virgem).Discriminao Complexa Segundo Bueno et al. (2007), vrios estudos envolvendo condicionamento Pavloviano e operante, em procedimentos de discriminao condicional, tm sido utilizados com o objetivo de melhor entender os processos envolvidos no estabelecimento das associaes entre seus elementos primrios: estmulo, resposta e reforo. Em outras palavras, Pavlov descobriu que estmulos podem controlar respostas reflexas quando h pareamento e associaes entre um estmulo neutro e o estmulo incondicionado (US), e com isso, o estmulo neutro adquire a propriedade de estmulo condicionado (CS). O estmulo CS capaz de ativar a representao do US. Ainda segundo o autor, as respostas dadas durante as prticas, sugerem que o repertrio comportamental do animal modulado pelo procedimento na distribuio do tempo pelos estmulos presentes no decorrer da prtica: respostas condicionadas em prticas de discriminao condicional positiva/negativa. Em outras palavras, a apresentao de estmulos compostos, nos procedimentos de discriminao condicional, envolve um arranjo temporal entre os estmulos, cujo arranjo ir interferir na forma como o animal responde aos estmulos. Este processo considerado de especial importncia para o estudo da aprendizagem complexa. Segundo Skinner apud Feliciano (2006) diferentemente de uma situao de discriminao simples definida como aprendizagens que derivam de processos de controle de estmulos mais simples, em que se estabelece uma relao constante entre um estmulo antecedente e uma resposta, nas discriminaes condicionais essa relao muda de acordo com o contexto, isto , o papel de um estmulo depende de outros que forneam o contexto para ele (CATANIA, 1999, p. 163). Em uma discriminao condicional deve-se reforar uma resposta a um determinado estmulo especfico apenas na presena de outro estmulo. Ainda segundo o autor, outros autores descrevem esses tipos mais complexos de discriminao como se um estmulo (o condicional) funcionasse como um seletor de discriminaes, mais do que seletor de respostas individuais. Respostas a um estmulo discriminativo especfico (SD1) e no outro (SD2) seria seguido de reforo apenas se estiver presente um estmulo condicional especfico (SC1). Alm disso, para Cumming e Berryman (1965), o estmulo condicional teria uma funo seletiva que momentaneamente fortalece uma discriminao especfica. Segundo Bueno (1997), o fator temporal pode afetar os processos associativos subjacentes ao comportamento do animal, dependendo das variaes com que ele ocorre, ou seja, o animal parece ser capaz de armazenar em sua memria uma representao temporal dos estmulos, e utiliz-la como estratgia de soluo para os problemas que seu meio coloca. Esta possibilidade se estende a procedimentos de aprendizagem complexa, incluindo a representao da durao do tempo no imaginrio animal. O presente trabalho foi delineado a partir de um piloto para dar direo para a futura pesquisa a ser desenvolvida. Objetivo: Comparar o desempenho de filhotes de mes submetidas ao uso de lcool, durante o perodo de gestao e lactao com o de filhotes de mes sem uso de lcool, em tarefas de aprendizagem em discriminao complexa utilizando estmulos compostos, luz e som. MATERIAIS E MTODOS1 fase Materiais e mtodos Sujeitos: Os sujeitos utilizados nesta fase do experimento foram 8 ratos Wistar fmeas, mantidos no Biotrio Central, das Faculdades Adamantinenses Integradas, em uma temperatura ambiente de 21 C, com idade de 90 dias e peso aproximado de 250 Kg. Mtodo O mtodo utilizado o experimental, com diviso dos sujeitos em grupo experimental, com ingesto de soluo alcolica e o grupo controle, com ingesto de gua. Materiais necessrios: lcool (etanol) - A soluo alcolica composta inicialmente de 10 ml de lcool e 490 ml de gua por 2 dias, aumentando para 20 ml de lcool e 480 ml de gua por 6 dias, depois para 40 ml de lcool e 420 ml de gua por 7 dias e estabilizando em 50 ml de lcool e 450 ml de gua no restante da pesquisa.gua Procedimento Os sujeitos foram divididos em dois grupos, controle e experimental, ambos com quatro fmeas cada, mantidas em dupla por caixa, a troca da maravalha foi feita trs vezes por semana, e em cada troca foi feito a pesagem dos sujeitos (sendo que a manipulao dos sujeitos teve durao de 10 minutos). Os sujeitos foram identificados por C1 e C2 do grupo controle e E1 e E2 do grupo experimental. Esses sujeitos foram submetidos a uma dieta diferenciada, onde o grupo controle recebeu gua e rao, disponibilizando 500 ml de gua todos os dias para cada dupla de ratas durante todo o experimento e o grupo experimental recebeu rao e soluo de gua e lcool 70%, disponibilizando 500 ml de soluo para cada caixa, sendo que a proporo de lcool em soluo com gua foi aumentada gradativamente de 2% a 10% nos 15 primeiros dias, onde foi estabilizada a proporo de lcool em 10% at o fim do experimento. De acordo com tabela abaixo:Protocolo de Pesquisa lcool 2012Qtde de diasProtocoloDia

2 diasExperimental = incio etanol 2% (v/v)Controle = gua1 ao 2

6 diasExperimental = incio etanol 4% (v/v)Controle = gua3 ao 8

7 diasExperimental = incio etanol 8% (v/v)Controle = gua9 ao 15

At o final da 1 faseExperimental = incio etanol 10% (v/v)Controle = gua16 at o final

A soluo com lcool foi preparada diariamente e oferecida aos animais no mesmo horrio. Sendo anotada a quantidade ingerida e calculado a ingesto mdia diria. Aps 30 dias do incio do experimento, onde as fmeas do grupo experimental j se encontram alcoolistas, foram postas pra cruzar, com um macho para cada duas fmeas. Uma semana aps o incio do cruzamento as fmeas foram separadas, sendo colocada uma em cada caixa. Lembrando que durante o cruzamento, a gestao e a amamentao, as fmeas continuaram recebendo a soluo com lcool. O desmame foi feito 21 dias aps o nascimento, onde as fmeas mes e as fmeas que nasceram foram sacrificadas com dixido de carbono. Assim restando 8 ratos Wistar machos.2 fase Materiais e Mtodos Sujeitos Os sujeitos utilizados nesta fase foram 8 ratos Wistar machos remanescentes da prole das fmeas da primeira fase, com idade de 90 dias e uma mdia de peso de 250 gramas. Materiais O material utilizado foi uma Caixa de Skinner, contendo uma barra e um bebedouro, sendo esta uma caixa de madeira com sistema de ventilao contendo uma cmara de acrlico internamente onde se encontram a barra e o bebedouro: gua como estmulo reforador e luz 25% e som como estmulos condicionados. Procedimentos Os sujeitos foram divididos em grupos experimentais e controle e mantidos em duplas por caixa, no Biotrio Central, das Faculdades Adamantinenses Integradas, em uma temperatura ambiente de 21 C com uma dieta padro de gua e rao. Inicialmente, os sujeitos foram submetidos s sees de manipulao at que chegassem idade de 90 dias e ao peso ideal. Com a idade de 90 dias, os sujeitos foram levados para o biotrio do Laboratrio de Psicologia Experimental, onde se iniciou o processo de modelagem, treino ao bebedouro, onde o sujeito foi retirado do biotrio com privao de 48 horas, que foi realizado em 7 sesses de 40 minutos, com todos os sujeitos, depois de modelados os sujeitos foram submetidos a uma tarefa de discriminao condicional complexa, com dois estmulos discriminativos, luz sendo x e som sendo y, esta tarefa foi realizada em 16 sesses. Antes de iniciar o procedimento de discriminao com o animal, o mesmo foi retirado do biotrio do Laboratrio de Psicologia Experimental, das Faculdades Adamantinenses Integradas com privao de 48 horas. Verificado o funcionamento da caixa de Skinner e colocado o animal na mesma. Ento iniciamos o procedimento de discriminao condicional complexa, o bebedouro ficou na posio manual e o sujeito, ainda sem estmulo, ficou sem reforo, logo depois foram apresentados dois estmulos para ele (xy) e a chave do bebedouro colocada em posio automtica, reforando as suas respostas, depois retiramos um dos estmulos e colocamos novamente a chave em posio manual e assim sucessivamente. Tarefa Na tarefa de discriminao condicional complexa, o sujeito teve que discriminar entre dois estmulos luz (x) e som (y), sendo que ele receber o estmulo reforador gua - somente quando os dois estmulos (xy) forem apresentados juntos, quando apenas um estmulo discriminativo for apresentado (x) ele no receber o reforo. A resposta esperada do animal a presso barra da Caixa de Skinner, apenas quando os estmulos forem apresentados juntos.RESULTADOS

Segue- se abaixo grfico com a modelagem dos grupos controle e experimental:

Grfico 1 Modelagem dos grupos Treino de ida ao bebedouro

Conforme podemos verificar no grfico o desempenho dos grupos na modelagem de treino de ida ao bebedouro e depois de presso barra os grupos tiveram desempenhos nivelados. Foram realizados 7 sesses de treino com uma durao de 40 minutos, onde o animal era colocado na Caixa de Skinner privado de gua (48 horas) para realizao dos treinos, que num primeiro momento a descoberta do bebedouro e depois focado em que o animal desempenhe a tarefa de pressionar a barra para receber o estmulo reforador que a gua. Aps a realizao da modelagem, iniciamos o treino da discriminao complexa, que consistiu em 16 sesses de treino de 40 minutos com cada animal. Segue abaixo, grfico com o desempenho dos grupos controle e experimental: Grafico 2 Discriminao Quantidade de presses a barra nos estmulos xy em 16 sesses de treino

De acordo com os grficos possvel observar a maior a frequncia de presso barra, no grupo controle quando a condio era pressionar no momento de apresentao dos dois estmulos XY comparado com a do grupo experimental. Estes dados mostram um desempenho inferior do GE em relao ao GC. Os dados sugerem, assim que pode haver uma relao entre a ingesto de lcool durante a gestao e lactao e prejuzos na aprendizagem, principalmente em processo que envolva discriminar entre estmulos compostos em procedimentos em que se requeira uma memria retrospectiva. O animal no s deve pressionar a barra, mas sim no momento da apresentao dos dois estmulos (xy luz e som), para obteno de gua, quando privado dela. O grupo controle apresentou uma mdia de 729 contra uma mdia de 585 do grupo experimental, o desvio do grupo controle foi de 1309 contra um desvio de 922 do grupo experimental. A diferena dos desvios de 387, portanto significativa demonstrando que o grupo experimental apresentou um menor ndice de aprendizagem da tarefa comparado com o grupo controle. Os coeficientes de varincia so de 17,9% do grupo controle para 15,8% do grupo experimental, revelando que os dados do grupo controle apresentam mais disperso comparada mdia que o grupo experimental, isso indica a variao dos dados durante os treinos. Discusso

A diferena de desempenho encontrada nos grupos indica que o grupo experimental apresenta um dficit na aprendizagem se comparada com o grupo controle, demonstrando desempenho inferior em realizar a tarefa de forma adequada. Verificou-se no experimento que os animais do grupo experimental tiveram dificuldade de associao de estmulos, por vezes no reconhecendo o momento de realizar a tarefa para receber o reforo (gua). De acordo com Holland apud Moreira & Bueno (1994) se sugere que predomina a utilizao de estratgias mais simples de associao primria entre X(estmulo) e o US (estmulo incondicionado), o estmulo caracterstica X transfere as suas propriedades de modulao do desempenho do animal para um estmulo novo. No decorrer do experimento observou-se que os animais experimentais apresentaram pouca memria da tarefa, sendo que em alguns treinos demoravam a comear a desempenhar a tarefa. Moreira & Bueno (1994) apontam que foi a partir de estudos que se levantou a hiptese de que o hipocampo uma estrutura cerebral com papel importante na mediao de processos de aquisio de discriminao condicional. Ainda segundo os autores o hipocampo essencial para a recuperao condicional, o que envolve o uso de uma dica de categoria para definir uma srie de memrias potencialmente relevantes, da qual uma segunda dica local ativa uma memria particular. Segundo Feliciano (2006) h dificuldades de estabelecer discriminaes condicionais em ratos, sendo necessrio o desenvolvimento de equipamentos que consigam estudar discriminaes simples e condicionais como uma tentativa para avaliar processos mais complexos de aprendizagem. No estudo realizado constatou-se que animais cujas mes apresentaram dependncia de lcool, houve dano na memria retrospectiva que mediada pelo hipocampo, ocasionando falhas no desempenho do animal gerando erros para desempenhar a discriminao de estmulos ou a no execuo da tarefa. A memria retrospectiva importante no desempenho de tarefas que tenham associaes, pois fazendo uso dela que o animal aprende a discriminar o momento em que deve realizar a tarefa Nos ltimos treinos o grupo experimental apresentou um baixo ndice de acertos na tarefa.

CONCLUSES

Conclui-se com base no experimento que h influncia do consumo de lcool na aprendizagem de descendentes, quando estes so expostos intra- tero e durante a lactao. Os animais do grupo experimental apresentaram baixo desempenho na tarefa de discriminao sendo observado que estes no conseguiam discernir os estmulos (que eram X= Luz e Y = Som) no pressionando a barra ou a pressionando quando s havia o estimulo da luz. Tambm tivemos uma amostra pequena (somente 8 animais), mas estudos no projeto piloto (que continham 16 animais) tambm apresentaram diferenas de aprendizagem dos grupos, corroborando para confirmar a hiptese levantada no objetivo desta pesquisa. As amostras foram compostas de oito animais, sendo 4 animais para cada grupo. Por esta razo h necessidade de replicar o experimento com maior nmero de sujeitos para um exame mais detalhado dos resultados.

REFERNCIAS

BUENO, J.L.O. (1997). O Imaginrio Animal. Psicologia USP. Vol. 8, n. 2, pgs. 165-180.

BUENO, Jos Lino Oliveira, WAGATSUMA, Alexandre, MARTINS, Mateus Russomanno Estimao de Tempo em Ratos Submetidos a um Procedimento de Discriminao Condicional. Revista Psicologia: Reflexo e Crtica, v. 20 n. (2), pg. 238-245, 2007.

FELICIANO, E.A. DE OLIVEIRA. Discriminaes simples e complexas: efeitos da desnutrio protica e da estimulao Tese (Doutorado) Faculdade de Filosofia, Cincias e Letras de Ribeiro Preto, Universidade de So Paulo, Ribeiro Preto, 2006.

FERREIRA, Tales Alexandre Aversi, SILVA, Nilson Penha. Efeitos do Etanol Sobre a Migrao Neuronial na Formao do Neocrtex Cerebral. Biosci. J.Uberlndia, v.21, n.1, p. 151-157, Jan. /Abril 2005.GUERRI, Consuelo, SANCHIS, Rosa. Acetaldehyde and alcohol levels in pregnant rats and their fetuses. Alcohol. Volume 2,(2), 267-270,1985.MOREIRA, Rita de Cassia M., BUENO, Jos Lino Oliveira. Discriminao Complexa e Leso Hipocampal Induzida por Radiao Ionizante. Universidade de So Paulo Rib. Preto. Temas em Psicologia, 1994, n 3.

SANTOS, Ariane Melare Ramos dos; MOTTA, Clber de Moraes; SOUZA, Elen Cristiane Augusto de; MORAES, Suzana Guimares de. Anlise Histomorfolgica do Fgado de Ratas e de seus Fetos Expostos ao lcool Durante a Gestao. Rev. Fac. Cincias Mdicas. Sorocaba, v. 12, n. 4, p. 10-14, 2010SURKAN, Pamela J., MILLER, Rebecca Fielding, MELCHIOR, Maria Parental.Addictive Behaviors. Volume 37, (3), 313-317.2012.

TRAVES, Carmem, LAURA, Camps, TEJERO, Dolores Lpez .Liver alcohol dehydrogenase activity and ethanol levels during chronic ethanol intake in pregnant rats and their offspring. Pharmacology, Biochemistry and Behavior. Volume 52, (1), 93-99, 1995.