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XXVI ENCONTRO DE JOVENS PESQUISADORES VIII MOSTRA ACADÊMICA DE INOVAÇÃO E TECNOLOGIA
DETERMINAÇÃO DA VIABILIDADE DE CÉLULAS DE QUERATINÓCITOS HUMANOS ASSOCIADOS A EXTRATOS DE PRÓPOLIS VERMELHA
SIGLA DO PROJETO: PRÓPROLIS / PROBIC - FAPERGS
Lorenzet G¹; Garcia CSC¹; Roesch-Ely M¹; Henriques JAP¹.
¹Laboratório de Proteômica, Genômica e Reparo de DNA, Instituto de Biotecnologia, Universidade de Caxias do Sul, RS, Brasil.
A própolis vermelha é encontrada na região Nordeste brasileira. Este tipo de própolis tem-se mostrado bem tolerada pelo organismo, comraros incidentes de alergia e baixa ou nenhuma toxicidade. Além disso, apresenta atividade antimicrobiana, anti-inflamatória e regenerativa,sendo uma excelente candidata para o tratamento de lesões em queimados.
Os resultados observados nestes ensaios evidenciam que o extrato de própolis vermelha nas concentrações de 25μg/mL e 50μg/mLapresentam prevalência de viabilidade e migração celular. Assim, possivelmente, há uma grande perspectiva de que o extrato deprópolis, nessas concentrações, possa ser aplicada em áreas que seja necessária a regeneração de tecidosqueimados, por estimulação e remodelamento da matriz do leito da ferida.
Verificar a viabilidade celular através do método clonogênico e avaliar a migração celular, ambos ensaios com células HaCat (não tumorais de queratinócitos humanos) após tratamento com extratos da própolis vermelha.
No ensaio clonogênico observou-se que houveformação de colônias das células tratadas comprópolis vermelha somente nas concentrações de25µg/mL e 50µg/mL, além do controle negativo. Jánas concentrações de 100µg, 200µg e controlepositivo não houve formação das colônias em quase100% dos tempos testados (figura 1).
No ensaio de migração celular observou-se quehouve migração através da fenda realizada nasconcentrações de 25µg/mL, 50µg/mL e no controlenegativo. Já nas concentrações de 100µg/mL,200µg/mL e no controle positivo não houve migraçãocelular, permanecendo a estrutura da fendasemelhante desde o dia 0 (figura 2).
100 100 100 100
29
0 0 0
8678 89 86
5850
6351
4 1 0 03 0 0 00
20
40
60
80
100
1 DIA 2 DIAS 3 DIAS 7 DIAS
% v
iab
ilild
ade
Tempo
Viabilidade celular - Ensaio ClonogênicoContNeg PosCont 25 µg 50 µg 100 µg 200 µg
FIGURA 1: Concentrações de 25, 50, 100 e 200µg/mL, controle positivo e controle negativo testados em 1, 2, 3 e 7 dias.
2. Avaliação da migração celular:
FIGURA 2: Respectivamente de A a F concentrações de 25, 50, 100, 200 µg/mL e controles positivo e negativo do dia O. Respectivamente de G a L concentrações de 25, 50, 100, 200 µg/mL econtroles positivo e negativo do dia 7.
A B C D E F
G H I J KL
1. Verificação da viabilidade celular pelo método clonogênico:
Inoculo de 350 células/mL em placa de 6 poços.
Fixação com metanol e coloração com cristal violeta
Contagem das colônias de células
Inoculo 4x104 células/mL e incubou-se em placas de 24 poços.
Formação de fenda
Visualização da migração celular.
Microscópio óptico
HaCat
APÓS 96h
Tratamento das células
25, 50, 100 e 200ug/mLControle PositivoControle Negativo
APÓS 10
dias
HaCat25, 50, 100 e 200ug/mL
Controle PositivoControle Negativo
24h
48h
72h
168h
APÓS 96h
24h
48h
72h
168h
PROBIC/FAPERGS