ESTUDIO FITOQUÍMICO DE Piper pesaresanum Y Piper ...

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ESTUDIO FITOQUÍMICO DE ESTUDIO FITOQUÍMICO DE Piper pesaresanum Piper pesaresanum Y Y Piper Piper crassinervium crassinervium (Piperaceae) (Piperaceae) ANGÉLICA GIRALDO ARICAPA ANGÉLICA GIRALDO ARICAPA DIRECTOR DEL PROYECTO DIRECTOR DEL PROYECTO JAIME NIÑO OSORIO JAIME NIÑO OSORIO

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Piper pesaresanum Piper pesaresanum Y Y Piper Piper crassinerviumcrassinervium (Piperaceae)(Piperaceae)
ANGÉLICA GIRALDO ARICAPAANGÉLICA GIRALDO ARICAPA
DIRECTOR DEL PROYECTODIRECTOR DEL PROYECTO
JAIME NIÑO OSORIOJAIME NIÑO OSORIO
CONTENIDO DE CONTENIDO DE
PiperaceaePiperaceae
•• OBJETIVOSOBJETIVOS
•• RESUMENRESUMEN
FAMILIA PiperaceaeFAMILIA Piperaceae
FAMILIA PiperaceaeFAMILIA Piperaceae
Reino: PLANTAE Reino: PLANTAE
Piper crassinerviumPiper crassinervium
FAMILIA PiperaceaeFAMILIA Piperaceae
FAMILIA FAMILIA
Piperaceae Piperaceae
PiperPiper PiperPiper
GÉNERO GÉNERO PiperPiper
FITOQUÍMICOS DE LAS ESPECIES DEL FITOQUÍMICOS DE LAS ESPECIES DEL
GÉNERO GÉNERO PiperPiper
FITOQUÍMICOS DE LAS ESPECIES DEL FITOQUÍMICOS DE LAS ESPECIES DEL
GÉNERO GÉNERO PiperPiper ALCALOIDES Y ALCALOIDES Y
AMIDASAMIDAS LIGNANOSLIGNANOS LIGNANOSLIGNANOS PROPENILFENOLESPROPENILFENOLES PROPENILFENOLESPROPENILFENOLES
TERPENOSTERPENOS TERPENOSTERPENOS ESTEROIDESESTEROIDES ESTEROIDESESTEROIDES FLAVONOIDESFLAVONOIDES FLAVONOIDESFLAVONOIDES
β-Pinone-Piper nigrum
JUSTIFICACIÓN DEL JUSTIFICACIÓN DEL
ACTIVIDAD ACTIVIDAD ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA
FITOQUÍMICOSFITOQUÍMICOS
Especie Actividad biológica Referencia
Piper hispidum Antifúngico contra
Piper tuberculatum Antifúngico contra
Piper sarmentosum Analgésico, antiinflamatorio,
Piper dilatatum Antifúngico contra
Piper chaba Hepatoprotectiva Matsuda et al., 2009
Rama et al., 2011
Piper longum Insecticida - acaricida Park et al., 2002
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
RESISTENCIA DE RESISTENCIA DE Escherichia coli Escherichia coli A A
ALGUNOS ANTIBIÓTICOSALGUNOS ANTIBIÓTICOS
PORCENTAJE DE RESISTENCIA A LOS PORCENTAJE DE RESISTENCIA A LOS
ANTIBIÓTICOS DE ANTIBIÓTICOS DE Staphylococcus aureusStaphylococcus aureus
0
10
20
30
40
50
60
70
80
% d
ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA
EFECTOS EFECTOS
CONTROLES CONTROLES
ANTIFÚNGICOS SINTÉTICOS
EFECTOS EFECTOS
CONTROLES CONTROLES
NEGRANEGRA
año).
afectada la salud del
NATURALNATURAL
• Evite la germinación de ascosporas de M. fijiensis
• Disminuya el costo de su tratamiento por año.
• Reducir el impacto ambiental y el riesgo de enfermedades por la exposición a los fungicidas
OBJETIVOSOBJETIVOS
extractosextractos dede laslas especiesespecies PiperPiper crassinerviumcrassinervium yy PiperPiper pesaresanumpesaresanum
(Piperaceae)(Piperaceae) yy lala determinacióndeterminación dede lala
actividadactividad antibacterianaantibacteriana contracontra
yy antifúngicaantifúngica contracontra MycosphaerellaMycosphaerella fijiensisfijiensis MoreletMorelet
dede loslos extractosextractos dede hexano,hexano, diclorometano,diclorometano, metanolmetanol yy
metanolmetanol––aguaagua ((99::11),), dede lala parteparte aéreaaérea dede PP..
pesaresanumpesaresanum yy PP.. crassinerviumcrassinervium..
metabolitosmetabolitos secundariossecundarios enen loslos extractosextractos dede hexano,hexano,
diclorometano,diclorometano, metanolmetanol yy metanolmetanol--aguaagua ((99::11),), dede laslas
MycosphaerellaMycosphaerella fijiensisfijiensis MoreletMorelet y/oy/o antibacterianaantibacteriana
cromatografíacromatografía dede columnacolumna..
y/oy/o bactericidabactericida contracontra EE.. colicoli yy SS.. aureusaureus dede laslas
fraccionesfracciones dede mayormayor pesopeso obtenidasobtenidas dede loslos extractosextractos dede
hexano,hexano, diclorometano,diclorometano, metanolmetanol yy metanolmetanol--aguaagua ((99::11))
actividadactividad antifúngicaantifúngica y/oy/o antibacterianaantibacteriana..
EXPERIMENTALEXPERIMENTAL
MATERIAL MATERIAL VEGETALVEGETAL DE DE Piper Piper pesaresanum pesaresanum Y Y Piper crassinerviumPiper crassinervium
Fue recolectado en el Parque Regional Fue recolectado en el Parque Regional
Natural UcumaríNatural Ucumarí
Santa Rosa Pereira
W 075W 075°° 32’ 53,0’’32’ 53,0’’
con una altura de 2020 con una altura de 2020
msnm msnm
W 075W 075°° 32’ 53,0’’32’ 53,0’’
con una altura de 2063 con una altura de 2063
msnm msnm
MATERIAL MATERIAL VEGETALVEGETAL DE DE Piper Piper pesaresanum pesaresanum Y Y Piper crassinerviumPiper crassinervium
ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE
P. pesaresanum P. pesaresanum Y Y P. crassinerviumP. crassinervium
OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE
EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS
ANALISISANALISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANALISISANALISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS
OBTENCIÓN DE EXTRACTOS OBTENCIÓN DE EXTRACTOS
MATERIAL VEGETALMATERIAL VEGETAL MATERIAL VEGETALMATERIAL VEGETAL SECADOSECADO SECADOSECADO MATERIAL MOLIDOMATERIAL MOLIDO MATERIAL MOLIDOMATERIAL MOLIDO
MASERACIÓN MASERACIÓN
Piper Piper pesaresanumpesaresanum
••557 g557 g
Piper Piper crassinerviumcrassinervium
Y MOLIDOY MOLIDO
OBTENCIÓN DE EXTRACTOSOBTENCIÓN DE EXTRACTOS
((ExtExt con 2L HEX ) x 3con 2L HEX ) x 3 ((ExtExt con 2L HEX ) x 3con 2L HEX ) x 3
((ExtExt con 2L DCM) x 3con 2L DCM) x 3 ((ExtExt con 2L DCM) x 3con 2L DCM) x 3
((ExtExt con con ) x 3) x 3 ((ExtExt con con 2LMeOH2LMeOH) x 3) x 3
((ExtExt en Soxhlet) x 48 Horasen Soxhlet) x 48 Horas ((ExtExt en Soxhlet) x 48 Horasen Soxhlet) x 48 Horas
ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE
P. pesaresanum P. pesaresanum Y Y P. crassinerviumP. crassinervium
OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE
EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS
ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS
EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD
ANTIBACTERIANA POR DIFUSIÓN EN ANTIBACTERIANA POR DIFUSIÓN EN POZOSPOZOS
SOLUCIÓNSOLUCIÓN ADICIONAR M. O.ADICIONAR M. O. ADICIONAR EL AGARADICIONAR EL AGAR ADICIONAR EL AGARADICIONAR EL AGAR
REALIZAR 7 POZOSREALIZAR 7 POZOS REALIZAR 7 POZOSREALIZAR 7 POZOS ADICIONAR EXTRACTOS ADICIONAR EXTRACTOS ADICIONAR EXTRACTOS ADICIONAR EXTRACTOS
Y CONTROLESY CONTROLES LECTURALECTURA
INHIBITORIA (ICINHIBITORIA (IC5050))
y = 38.563x - 52.967 R² = 0.9923
48
53
58
63
68
73
78
83
88
% d
ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE
P. pesaresanum P. pesaresanum Y Y P. crassinerviumP. crassinervium
OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE
EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS
ELUCIDACIÓNELUCIDACIÓN ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ELUCIDACIÓNELUCIDACIÓN ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS
ACTIVIDAD
Mycosphaerella fijiensisMycosphaerella fijiensis Morelet Morelet
EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD
ANTIFÚNGICA CONTRA ANTIFÚNGICA CONTRA M. M. fijiensis fijiensis MoreletMorelet
Fase sexualFase sexual
germinativogerminativo
••Crecimiento Crecimiento ••Crecimiento Crecimiento radialradial
ESTADÍO 1 ESTADÍO 2 ESTADÍO 3 ESTADÍO 4 ESTADÍO 5 ESTADÍO 6
PREPARACIÓN DE LA CÁMARA PREPARACIÓN DE LA CÁMARA
HÚMEDA PARA ACTIVACIÓN DE HÚMEDA PARA ACTIVACIÓN DE
ASCOSPORASASCOSPORAS
ELONGACIÓN DEL TUBO ELONGACIÓN DEL TUBO
GERMINATIVOGERMINATIVO
en agua destilada por 5 minutos
Retirar el exceso de agua sin
tocar las hojas de plátano
infectadas.
agar durante 8 a 10 horas
Continua…
(2%)(2%)
CONCENTRACIÓN DE
SOLUCIÓN MADRE
GERMINATIVOGERMINATIVO
en agua destilada por 5 minutos
Retirar el exceso de agua sin
tocar las hojas de plátano
infectadas.
agar durante 8 a 10 horas
Continua…
ELONGACIÓN DEL TUBO ELONGACIÓN DEL TUBO GERMINATIVOGERMINATIVO
Retirar los discos e incubar a 26°C durante 24 a 48 horas
Determinar el porcentaje de ascosporas con: GN:
Germinación normal, GD: Germinación deforme, GC:
Germinación corta y NG: No germinada
Realizar el conteo de 150 ascosporas en 3 campos diferentes
distribuidos en las 2 cajas de petri correspondientes,
… Continuación
SEXUALSEXUAL
A) Germinación normal B) No germinados A) Germinación normal B) No germinados
C) Germinación corta y D) Germinación deformeC) Germinación corta y D) Germinación deforme
CRECIMIENTO RADIAL
CRECIMIENTO EN 14 A 20 CRECIMIENTO EN 14 A 20
DÍASDÍAS
CONTRA CONTRA Mycosphaerella fijiensis Mycosphaerella fijiensis Morelet FASE ASEXUALMorelet FASE ASEXUAL
ElEl análisisanálisis estadísticoestadístico
ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE
P. pesaresanum P. pesaresanum Y Y P. crassinerviumP. crassinervium
OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE
EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS
ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS
CROMATOGRAFÍA DE CAPA CROMATOGRAFÍA DE CAPA
DELGADA (CCD)DELGADA (CCD)
HEXANO DCM, MeOH y
Terpenos y
Flavonoides Kaempferol Tricloruro de aluminio Intensas fluorescencias
Taninos Ácido gálico y
Lactonas Cumarina Cloruro de
en etanol.
color rosa pálido y luego se
tornan de color café.
Amidas Formamida Cloruro de
ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE
P. pesaresanum P. pesaresanum Y Y P. crassinerviumP. crassinervium
OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE
EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS
ELUCIDACIÓNELUCIDACIÓN ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ELUCIDACIÓNELUCIDACIÓN ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS
ANÁLISIS HPLCANÁLISIS HPLC--MS DE LOS EXTRACTOS MS DE LOS EXTRACTOS
ACTIVOS DE ACTIVOS DE P. pesaresanum P. pesaresanum y y
P. crassinervium P. crassinervium (Scott et al., 2005)(Scott et al., 2005)
Condiciones del análisis
CH3CN- H2O
Detector DAD
Modo Ion positivo
Longitud de onda para
ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE
P. pesaresanum P. pesaresanum Y Y P. crassinerviumP. crassinervium
OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE
EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS
ANÁLISIS ESTRUCTURALANÁLISIS ESTRUCTURAL
ANÁLISIS ESTRUCTURALANÁLISIS ESTRUCTURAL
ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS
SEPARACIÓN DE EXTRACTOS ACTIVOS SEPARACIÓN DE EXTRACTOS ACTIVOS
DE DE P. pesaresanum P. pesaresanum y y P. crassinervium P. crassinervium POR CROMATOGRAFÍA DE COLUMNAPOR CROMATOGRAFÍA DE COLUMNA
SOPORTE SÍLICA GEL
SISTEMA DE ELUCIÓN
Gradiente de polaridad
SEPARACIÓN DE EXTRACTOS ACTIVOS SEPARACIÓN DE EXTRACTOS ACTIVOS
DE DE P. pesaresanum P. pesaresanum y y P. crassinervium P. crassinervium POR CCDPOR CCD--PP
Cromatoplacas:Cromatoplacas: sílica sílica
gel de 20x20 cm y gel de 20x20 cm y
1.5mm de espesor.1.5mm de espesor.
Sistema de elución: Sistema de elución:
CloroformoCloroformo--metanol metanol
ButanolButanol
ANÁLISIS POR CGANÁLISIS POR CG--EM DE LOS EM DE LOS
EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS
Condiciones del análisis
espesor.
Temperatura de
Temperatura de
280°C
ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE
P. pesaresanum P. pesaresanum Y Y P. crassinerviumP. crassinervium
OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE
EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS
ANÁLISIS ANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANÁLISIS ANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS
ANÁLISIS ESTRUCTURALANÁLISIS ESTRUCTURAL
RESONANCIA MAGNÉTICA RESONANCIA MAGNÉTICA NUCLEAR NUCLEAR –– BRUKER 300 HzBRUKER 300 Hz
ESPECTROMETRÍA DE ESPECTROMETRÍA DE MASASMASAS
•• HPLCHPLC--MSMS
OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE
SECUNDARIOSSECUNDARIOS
ANALISISANALISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANALISISANALISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS
OBTENCIÓN DE EXTRACTOSOBTENCIÓN DE EXTRACTOS
RESULTADOS Y DISCUSIÓN RESULTADOS Y DISCUSIÓN
OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE
SECUNDARIOSSECUNDARIOS
ANÁLISIS ANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANÁLISIS ANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE
Piper crassinerviumPiper crassinervium
Hexano X X
Diclorometano X X
Metanol X X
Piper pesaresanum
Hexano X X
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA CONTRA ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA CONTRA
S. aureus S. aureus DEL EXTRACTO DE DEL EXTRACTO DE DICLOROMETANO DE DICLOROMETANO DE P. pesaresanumP. pesaresanum
EXTRACTO CRUDO DE
48
53
58
63
68
73
78
83
88
% d
ICIC5050 parapara elel extractoextracto
ESPECIES DEL GÉNERO ESPECIES DEL GÉNERO Piper Piper CON CON
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANAACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
CONTRA E. coli
OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE
SECUNDARIOSSECUNDARIOS
ANALISISANALISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANALISISANALISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS
ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA
crassinerviumcrassinervium Piper Piper
ELONGACIÓN DEL TUBO GERMINATIVO ELONGACIÓN DEL TUBO GERMINATIVO
DE DE M. fijiensis M. fijiensis CON EXTRACTOS DE CON EXTRACTOS DE P. P. crassinervium crassinervium
CRECIMIENTO RADIAL DE CRECIMIENTO RADIAL DE M. fijiensis M. fijiensis CON EXTRACTOS DE CON EXTRACTOS DE P. crassinerviumP. crassinervium
PORCENTAJE DE INHIBICIÓN DE LOS EXTRACTOS DE P. crassinervium
EXTRACTO PORCENTAJE DE
ELONGACIÓN DEL TUBO GERMINATIVO ELONGACIÓN DEL TUBO GERMINATIVO
DE DE M. fijiensis M. fijiensis CON EXTRACTOS DE CON EXTRACTOS DE P. P. pesaresanumpesaresanum
CRECIMIENTO RADIAL DE CRECIMIENTO RADIAL DE M. fijiensis M. fijiensis CON EXTRACTOS DE CON EXTRACTOS DE P. pesaresanumP. pesaresanum
PORCENTAJE DE INHIBICIÓN DE LOS EXTRACTOS DE P. pesaresanum
EXTRACTO PORCENTAJE DE INHIBICIÓN
CON ACTIVIDAD ANTIFÚNGICACON ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA
ESPECIE FAMILIA EXTRACTO FASE DE
REPRODUCCIÓN % DE
Phenax rubra Urticaceae Metanol
Piper pesaresanum Piperaceae
Hexano Asexual 100
OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE
SECUNDARIOSSECUNDARIOS
ANÁLISIS ANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANÁLISIS ANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS
CARACTERIZACIÓN FITOQUÍMICACARACTERIZACIÓN FITOQUÍMICA
Nombre científico Extracto
Metabolitos secundarios analizados
GÉNERO GÉNERO PiperPiper
Piper sarmentosum Alcaloides Zakaria et al., 2010; Zainal et
al., 2009
Piper
dilatatum
Rama et al., 2011
ENFOQUE DEL ESTUDIO ENFOQUE DEL ESTUDIO
Piper crassinerviumPiper crassinervium Piper crassinerviumPiper crassinervium Elongación del tubo germinativoElongación del tubo germinativo
CrecimientoCrecimiento radialradial ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Hexano X X
Diclorometano X X
Metanol X X
EXTRACTOS DE P. crassinervium
ENFOQUE DEL ESTUDIO ENFOQUE DEL ESTUDIO Piper pesaresanumPiper pesaresanum Piper pesaresanumPiper pesaresanum
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Hexano X X
CrecimientoCrecimiento radialradial
DE P. pesaresanum
EXTRACTO PORCENTAJE DE
OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE
SECUNDARIOSSECUNDARIOS
ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS
PIPERAMIDAS IDENTIFICADAS CON LA PIPERAMIDAS IDENTIFICADAS CON LA
METODOLOGÍA A 205 Y 340 METODOLOGÍA A 205 Y 340 nmnm Especie donde
se encuentra Piperamida
(100)
201.0(40); 135.0(25)
0)
5);135.0(5)
(10); 234.1(5); 135.0(25)
ACTIVOS DE ACTIVOS DE P. pesaresanumP. pesaresanum EXTRACTO DE DICLOROMETANOEXTRACTO DE DICLOROMETANO EXTRACTO DE DICLOROMETANOEXTRACTO DE DICLOROMETANO EXTRACTO DE METANOLEXTRACTO DE METANOL EXTRACTO DE METANOLEXTRACTO DE METANOL
254 nm
340 nm
205 nm
280 nm
254 nm
340 nm
205 nm
280 nm
DE P. pesaresanum
COMPUESTO IDENTIFICADO Y LA PIPERCIDA COMPUESTO IDENTIFICADO Y LA PIPERCIDA
(Amida insaturada de (Amida insaturada de Piper Piper nigrumnigrum))
PIPERCIDA
COMPUESTO
DICLOROMETANO Y METANOL
OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE
SECUNDARIOSSECUNDARIOS
ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS
SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS
SECUNDARIOS DEL EXTRACTO DE SECUNDARIOS DEL EXTRACTO DE DICLOROMETANO DE DICLOROMETANO DE Piper pesaresanumPiper pesaresanum
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE LAS ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE LAS
FRACCIONESFRACCIONES Fracción
Concentraciones en ppm (Cp) Concentraciones en ppm (Cp)
1000 500 250 75 62,5 250 1000 500 250 75 62,5 250
DCM-Pp-2
X X X X X 18 X X X X X 16
X X X X X 18 X X X X X 18
X X X X X 14 X X X X X 17
DCM-Pp--3
X X X X X 18 X X X X X 16
X X X X X 18 X X X X X 14
X X X X X 18 X X X X X 15
DCM-Pp--4
13 11 X X X 16 X X X X X 16
15 12 X X X 18 X X X X X 16
14 11 X X X 18 X X X X X 15
DCM-Pp--5
14 12 X X X 18 14 12 X X X 17
14 11 X X X 19 14 11 X X X 15
14 11 X X X 19 14 11 X X X 16
DCM-Pp--6
17 X X X X 19 17 X X X X 16
X X X X X 19 X X X X X 16
X X X X X 22 X X X X X 16
DCM-Pp--7
X X X X X 20 X X X X X 16
X X X X X 18 X X X X X 16
X X X X X 18 X X X X X 17
DCM-Pp--8
X X X X X 18 X X X X X 15
X X X X X 18 X X X X X 15
X X X X X 17 X X X X X 15
DCM-Pp--9
18 16 12 10 8 18 12 10 8 X X 15
19 14 12 11 9 18 12 9 7 X X 14
17 14 12 10 9 19 11 8 8 6 X 15
DCM-Pp--10
14 12 10 9 8 16 12 10 8 6 X 15
13 11 9 9 7 16 12 8 7 6 X 14
14 11 9 9 8 15 13 11 8 6 X 16
DCM-Pp--11
22 18 16 14 11 16 21 19 16 12 11 16
19 17 14 13 11 18 22 19 18 14 12 15
19 16 13 13 11 14 15 14 12 11 9 14
CONCENTRACIÓN MEDIA CONCENTRACIÓN MEDIA INHIBITORIA (ICINHIBITORIA (IC5050))
FRACCIÓN DCM 9 FRACCIÓN DCM-Pp-9
y = 30.299x - 5.735 R² = 0.9461
45
55
65
75
85
95
FRACCIÓN DCM FRACCIÓN DCM-Pp-10
50
60
70
80
90
100
FRACCIÓN DCMFRACCIÓN DCM-Pp-11
50,0
70,0
90,0
110,0
% d
Código IC50 (mg/L)
SECUNDARIOS DEL EXTRACTO DE SECUNDARIOS DEL EXTRACTO DE DICLOROMETANO DE DICLOROMETANO DE Piper pesaresanumPiper pesaresanum
SEPARACIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS
DEL EXTRACTO DE DICLOROMETANO DE DEL EXTRACTO DE DICLOROMETANO DE
Piper pesaresanumPiper pesaresanum
OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE
SECUNDARIOSSECUNDARIOS
ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS
ANÁLSIS ANÁLSIS
ESPECTRO IR DE LA FRACCIÓN ESPECTRO IR DE LA FRACCIÓN
DCMDCM--PpPp--1111--8 DEL EXTRACTO DE 8 DEL EXTRACTO DE DICLOROMETANO DICLOROMETANO P. pesaresanumP. pesaresanum
Aromaticidad
DEL EXTRACTO DE DICLOROMETANO DE DEL EXTRACTO DE DICLOROMETANO DE
Piper pesaresanumPiper pesaresanum
LA FRACCIÓN DCMLA FRACCIÓN DCM--PpPp--88--6 DEL EXTRACTO 6 DEL EXTRACTO
DE DICLOROMETANO DE DE DICLOROMETANO DE P. pesaresanumP. pesaresanum
RMN-1H COSY COSY 11HH--11HH
DCM-Pp-11-8-6 DEL EXTRACTO DE
DICLOROMETANO DE P. pesaresanum
DCM-Pp-11- 8-6 DEL EXTRACTO DE
DICLOROMETANO DE P. pesaresanum
RESULTADOS CGRESULTADOS CG--MS DE LA FRACCIÓN MS DE LA FRACCIÓN
DCMDCM--PpPp--10 DEL EXTRACTO DE 10 DEL EXTRACTO DE
DICLOROMETANO DE DICLOROMETANO DE Piper pesaresanumPiper pesaresanum
COMPUESTOS EN EL GENERO
Piper pesaresanum
El extracto de diclorometano IC50 de
468, 84 mg/L fracciones polares:
DCM-Pp-9 69,19 mg/L
DCM-Pp-10 38,93 mg/L
DCM-Pp-11 22,31 mg/L
la germinación de ascosporas y el
de diclorometano un 96%
características estructurales a la
Separaciones y análisis de IR y
RMN
separando
BIBLIOGRAFÍA
Anastasiou D. M., Morgan Margie., Ruanec P. J., Steenbergena J. N., Katza B.
D., Aldera J.D., Thornea G. M (2008). In vitro activity of daptomycin against
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Chemistry Letters. 20: 409–412
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Applications. 3Th Ed . Jhon Wiley & Sons. Ltd. 483p.
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Sampietro D., Catalan C.N., Vattuone M. A. (2009). Isolation, Identification and
Characterization of Allelochemicals/Natural Products. Published by Science
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BIBLIOGRAFÍA
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Humana Press. Totowa, New Jersey. 111p.
Wagner H., Bladt S. (1996) Plant Drug Analysis. A thin layer chromatography
atlas. 2a Edition. Springer – Verlag, Berlin, Germany.
Wei K., Li W., Koike K., Pei Y. and Nikaido T. (2004) New amide alkaloids from
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Yamaguchi L. F., Lago J. H. G., Tanizaki T. M., Mascio P. D. and Kato J. M.
(2006). Antioxidant activity of prenylated hydroquinone and benzoic acid
derivatives from Piper crassinervium Kunth. Phytochemistry 67: 1838 – 1843.
GRACIAS!!!
DIREFENCIA EN LOS TIPOS DE DIREFENCIA EN LOS TIPOS DE
IONIZACIÓN IONIZACIÓN
COMPUESTOS AISLADOS DE COMPUESTOS AISLADOS DE
Piper crassinerviumPiper crassinervium
Ácido [4-hidroxy-(3’-7’- dimetil-10-oxo-octa-2’-E- 6’-dienil)benzoico]
Ácido[4-hidroxi-3-(3’,7’- dimetil - 6’
Ácido[4-hidroxi-3-(3’,7’- dimetil-3’-hidroxi-1’-oxo- 6’-octenyl)benzoico]
1,4-dihidroxi-2-(3’,7’- dimetil octadienil)benceno
Isosakuratenina Isosakuratenina Sakuratenina Sakuratenina
ANOVAANOVA
Es una medida de la dispersión de sus datos con respecto a su media. Como establece diferencia entre las medias poblaciones; es un método matemático creado para probar la hipótesis de que las medias aritméticas de más de 2 grupos poblacionales son iguales.
Para la correcta aplicación de ANOVA se requiere el cumplimiento de cuatro supuestos estadísticos que sustentan la validez de las conclusiones de esta prueba:
a) Respuestas normalmente distribuídas
b) Homogeneidad de varianzas
ANOVAANOVA
PARAMÉTRICOPARAMÉTRICO
Analiza los procedimientos inferenciales que se encuentran sujetos a la forma de distribución de la población y no requieren que las observaciones estén dadas en escala de intervalo.
Código
Versión
Fecha
Pagina
RazónSocial____________________________________________________________
NIT.__________________________________________________________________
Actividad: ____________________________________________________
Temperatura ambiente:________(°C)
Producción horaria en Toneladas (en términos de producto terminado) relacionada con la fuente que se está midiendo): _______________ (Tn/h)
2. UBICACIÓN SEGÚN P.O.T - E.O.T ó P.B.O.T: Zona Urbana: ____ Zona Rural: ____
3. FECHA DE LA MEDICIÓN: ____________________________________________
4. NOMBRE DEL RESPONSABLE DE LA EVALUACIÓN DE EMISIONES ACREDITADO POR EL IDEAM: ____________________________
5. LABORATORIO QUE REALIZA LOS ANÁLISIS: ___________________________________
6. CONTAMINANTES A MEDIR:
Oxigeno (O2): ____ Oxido Nítrico (NO) ____
123-LCA-FOR-004
1
11/08/2011
VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN
Código 123-LCA-FOR-005
Versión 1
Fecha 11/08/2011
Number
Fecha de emisión:
Date of issue:
Dirección: Laboratorio de Calidad del Aire de la Universidad Tecnológica de Pereira - Vereda la Julita Pereira (Risaralda). Tel: (6)3210961 ext 457
PRUEBA MEDIDA:
Test Measure
FECHA DE MEDICION:
Date of Measurement
FECHA DE SOLICITUD:
Date of Solicitation
Este certificado expresa fielmente el resultado de las mediciones realizadas. No podrá ser reproducido parcialmente, excepto cuando se haya obtenido previamente permiso por escrito del laboratorio que lo emite.
This certificate is an achúrate record of the performed measurements reults. This cetificate may not be partially or totaly reproduced, except the issuing laboratory.
Los resultados obtenidos en el presente certificado se refieren al momento y condiciones en que se realizaron las mediciones. El laboratorio que lo emite no se responsabiliza de los prejuicios que pueden derivarse del uso inadecuado en el proceso.
NÚMERO DE PÁGINAS DEL CERTIFICADO INCLUYENDO ANEXOS:
Number of pages of this Certificate and documents attached
Los certificados sin las firmas autorizadas no tienen validez.
The results of this certificate refer to the moment and conditions in wich the measurement werw made. The laboratory that issued it is not liable for the prejudice that may result from inappropriate use in the process.
Laboratorio de Calidad del Aire- Universidad Tecnológica de Pereira (Vereda la Julita) Tel: 3210961 ext 457 - Pereira (Risaralda).
VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN
CERTIFICADO DE GASES DE COMBUSTION
Código 123-LCA-FOR-005
Versión 1
Fecha 11/08/2011
El XXXXX permite un error de indicación máximo: #¡REF! mm
La incertidumbre para la XXXX es de: #¡REF! mm
RESULTADOS DE LA MEDICION
Punto de Medida del XXXX Error del instrumento mm Incertidumbre Combinada de Medición
mm
INCERTIDUMBRE DE LA MEDICIÓN
La incertidumbre de medición ha sido calculada con un nivel de confianza de 95% utilizando un factor de cobertura de K=2.
VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN
CERTIFICADO DE GASES DE COMBUSTION
0,00
0,20
0,40
0,60
0,80
1,00
1,20
E rr
o r
CERTIFICADO DE GASES DE COMBUSTION
Código
Versión
Fecha
Pagina
1
HOJA DE VIDA DEL TESTO 350 XL “Analizador de gases de combustión” 11/08/2011
1 de 2
SERVICIO
FECHA: Dia que realizo el servicio T: Traslado M: Mantenimiento
Código
Versión
Fecha
Pagina
Unidad de control
FECHA DE MANTENIMIENTO:
ESTADO GENERAL DEL EQUIPO ESTADO
HOJA DE VIDA DEL TESTO 350 XL “Analizador de gases de combustión” 11/08/2011
2 de 2
1
Oxigeno (O2): ____ Oxido Nítrico (NO) ____
HUMEDAD:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
1 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000
2 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000
3 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000
0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 Xa= 0,00000
0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 Ra= 0,00000
1 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000
2 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000
3 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000
0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 Xb= 0,00000
0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 Rb= 0,00000
1 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000
2 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000
3 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000
0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 Xc= 0,00000
0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 Rc= 0,00000
Media Observ. 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 X= 0,00000
Rp= 0,0000 Xdiff= 0,0000 Rprom= 0,0000 LSCR= #¡VALOR! D4= NO VALIDO
ELABORADO POR:
REVISADO POR:
Media Observ.: Media de observaciones, es el promedio de todas la mediciones en un punto realizadas por todos los observadores.
Rp: es el rango de la media de observaciones "Media Observ.".
Rprom: es el promedio de los tres rangos de operador ((Ra+Rb+Rc)/3).
D4: es 3,2686 para cuando se hacer dos pruebas y 2,5735 para tres.
LCSR: representa el limite para las Rs individuales (LCSR=D4*Rprom). Se deben marcar los rangos individuales que se encuentren mas allá de este límite, identificar las causas y corregirlas. Se
deben repetir las lecturas con el mismo operario e instrumento como al principio o descartar los valores y volver hacer el promedio, volver a estimar R y los valores límite para las observaciones
restantes.
Media
Rango
B
B
Rango
Media
0,0000
0,0000
0,0000
Media
C
Rango
MediaMedia
Rango
C
OBSERVADOR/
A
0,0000
0,0000A
ESTUDIO DE REPETIBILIDAD Y REPRODUCIBILIDAD
Calidad del Aire
CONTAMINANTES A MEDIR
Pruebas K1
3 3,05
AV= 0,0000 %AV= #¡DIV/0!
R&R: Repetibilidad y Reproducibilidad
Datos K3 2 3,65
5 2,08
7 1,82
8 1,74
9 1,67
#¡DIV/0!
10%<=R&R<=20% BUENO #¡DIV/0!
20%<=R&R<=30% ACEPTABLE
R&R>30% NECESITA MEJORAS
Análisis de Mediciones Unitarias % Variaciones Totales (PV)
Calidad del AireCalidad del Aire
ANÁLISIS DE DATOS
VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN
Código 123-LCA-FOR-
Diciembre Verificado
Julio Septiembre Octubre NoviembreAgosto
gases de combustión”
AÑO:
26 10 2005
5 6 2008
RESOLUCION 909 Por la cual se establecen las normas y
estandares de admision admisibles de contaminantes a la
atmosfera por fuentes fijas y se dictan otra disposiciones.
Entidades Asociadas
123-LCA-FOR-010
1
11/08/2011
VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN
1 de 1
Yo ___________________________ identificado con C.C. ________________________ de ____________________
doy fe de que me encuentro libre de cualquier presión indebida comercial, financiera u otra que pudiere influir en el criterio técnico del laboratorio,
además me comprometo a no realizar ninguna actividad que pueda poner en peligro o disminuir la confianza en la competencia, imparcialidad, criterio o
integridad operacional del laboratorio.
Acepto las sanciones legales a nivel civil y penal que correspondan en caso de cometer alguna infracción en el cumplimiento de mi deber.
Código
Versión
Fecha
Pagina
Evaluación Evaluación
Revisar los procedimientos del laboratorio Capacitación del personal en...
Ejecución de la prueba por las personas a cargo
Análisis de los resutados de la prueba
Evaluación individual con cada persona
Capacitación manejo de equipos
P C P C
Parte Teórica Parte Práctica
VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN
P: Acción Preventiva C: Acción Correctiva
Con diferencias Con diferencias Iguales
Causas Efecto Iguales
SEGUIMIENTO AL SERVICIO
Calidad del Aire
TELÉFONO CORREOEMPRESA DIRECCIÓN
Oxigeno (O2): ____ Oxido Nítrico (NO) ____
VALOR TOTAL:
ANALISTA DEL
Observaciones:
Fecha
Teléfono / Fax:
DATOS DE LA EMPRESA
Fecha
Dirección:
Código 123-LCA-FOR-O15
Versión 1
Fecha 11/08/2011
Int: Capacitación interna Ext: Capacitación externo
VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN
PROGRAMA ANUAL DE CAPACITACIÓN Y FORMACIÓN
Número Tema de Capacitación o
Formación Int Ext
CLIENTES LABORATORIO - EMPRESA