Nutrição e crescimento Nutrição microbiana – Componentes necessários às células – Meios...
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nutrição e crescimento
• Nutrição microbiana– Componentes necessários às células– Meios de cultura– Condições ambientais
• Crescimento populacional– Velocidade de crescimento– Tempo de geração– Controle do crescimento
Para o cultivo laboratorial (in vitro) são utilizados meios de cultura que simulam e
até melhoram as condições naturais.
Os elementos químicos principais para o crescimento das células incluem C, N, H,
O, S e P e são denominados de macronutrientes.
• O carbono é um dos elementos mais importantes para o crescimento microbiano
(todos requerem carbono)
• Os compostos orgânicos são os que contém carbono (Exceção para CO2)
Nutrição - Características Básicas dos Meios de Cultura
NUTRIÇÃO MICROBIANA
MACROnutrientes: - Necessários em grande quantidade.
- Tem papel importante na estrutura e metabolismo.
MICROnutrientes: - Necessários em quantidades mínimas.
- Funções enzimáticas e estruturais das biomoléculas
Uma célula típica
Matéria seca
Água
C
N
H
P, S, K, Na ...
Componentes necessários às células
• Fonte de Carbono
Compostos orgânicos (microrganismos heterotróficos):- Carboidratos
- Lipídeos - Proteínas
Deles se obtém energia e unidades básicas para o crescimento celular.
Utilização de CO2 (microrganismos autotróficos)
É a forma mais oxidada do carbono, assim a fonte de energia provém da luz.
• Fonte de Nitrogênio
- É elemento mais abundante depois do C, cerca de 12%
(constituinte das proteínas, ácidos nucléicos, etc.)
► Moléculas orgânicas (aminoácidos, proteínas, etc.)
► Moléculas inorgânicas (NH3, NO3-, N2)
Componentes necessários às células
• Hidrogênio- Principal elemento dos compostos orgânicos e de diversos inorgânicos (água, sais e gases)
• Função do H:
– Manutenção do pH– Formação de ligações de H entre moléculas – Serve como uma fonte de energia nas reações de oxi-redução da respiração
Componentes necessários às células
• Oxigênio
- Elemento comum encontrado nas moléculas biológicas (aminoácidos, nucleotídeos, glicerídeos ...)
- É obtido a partir das proteínas e gorduras.
► Na forma de oxigênio molecular (O2), é requerido por muitos para os processos de geração
de energia.
• P – Sínese de ácidos nucléicos, ATP;
• S – Estabilidade de aminoácidos, componente de vitaminas;
• K – Atividade de enzimas;
• Mg – Estabilidade dos ribossomos;
• Ca – Estabilidade da parede celular
• Na – Requerido em maior quantidade por microrganismos marinhos;
• Fe – Papel-chave na respiração, componente dos citocromos e das
proteínas envolvidas no transporte de elétrons.
Componentes necessários às células
Outros macronutrientes:
• Metais são em quantidades muito pequenas (traço) necessários na composição
de um meio de cultura:
Zn, Cu, Mn, Co, Mo e B
► Exercem função estrutural em várias enzimas
- Nem sempre sua adição é necessária
- Meios sintéticos com compostos de alto grau de pureza e água ultra
pura podem apresentar deficiências desses elementos.
Requisitos nutricionais - Micronutrientes
• Água
- Componente absolutamente indispensável
(com exceção dos protozoários que englobam partículas sólidas)
► Laboratório: destilada, filtrada, deionizada
• Outros aditivos Funções: evitar precipitação de íons, controlar a espuma, provocar inibição,
estabilizar o pH.
►Quelantes: na autoclavagem ocorre a precipitação dos fosfatos metálicosEx.: EDTA, ácido cítrico, polifosfatos
Água e outros aditivos
► Tampões
- Carbonato de cálcio- Fosfatos- Proteínas (peptona)
►Inibidores
Ex: produção de ácido cítrico por Aspergillus nigerUtiliza-se Fosfato e pH < 2 para reprimir o ácido oxálico
Outros aditivos
►Indutores
- A maioria das enzimas de interesse comercial precisa de indutores.
Ex: celulose induz a celulase pectina induz a pectinase amido induz a amilase
►Antiespumantes
- Cultivos com aeração ocorre a produção de espuma
• Remoção de células, perda do produto, contaminação;• Redução do volume do meio
• Um antiespumante reduz a tensão superficial das bolhas
(álcoois, ácidos graxos, silicones, poliglicóis, ... )
Outros aditivos
Meios de Cultura
Conjunto de substâncias, formuladas de maneira adequada, capazes de promover o cresc. bacteriano, em condições de laboratório.
- A maioria das bact. pode ser cultivada em laboratório, utilizando-se meios nutrientes;
- Diferentes espécies de bactérias, variam extensivamente quanto as exigências mínimas de substâncias nutrientes;
Microbiologia Clínica
Introdução
Classificação dos Meios de Cultura:De acordo com seu conteúdo químico, os meios de cultura podem ser sintéticos ou complexos.
1. Meio de Enriquecimento:
Geralmente líquido, de composição química rica em nutrientes, com a
finalidade de permitir que as bactérias contidas em uma amostra clínica
aumentem em número.
Ex.: Caldo Brain Heart Infusion (BHI) e Caldo Tetrationato.
Microbiologia Clínica – Meios de cultura
Sintéticos (sais, compostos orgânicos purificados, água)
Complexos (utilizam hidrolisados – caseína, carne, soja, levedura)
Introdução
2. Meio de Transporte:
Consiste em um meio isento de nutrientes, contendo um agente redutor
(Tioglicolato ou cisteína). Geralmente mantém o pH favorável, previne a
desidratação de secreções durante o transp. e evita a oxidação e auto-destruição
enzimática dos patógenos presentes.
Ex.: Meio de Stuart, Meio de Cary-Blair e Caldo Tioglicolato.
Microbiologia Clínica
Introdução
3. Meio Seletivo
A finalidade deste tipo de meio é selecionar as espécies que se deseja isolar e
impedir o desenvolvimento de outros germes (adição de corantes, antibióticos e
outras substâncias com capacidade inibitória para alguns germes. Ex.: Agar
Manitol Salgado e Agar SS
Microbiologia Clínica
Introdução
4. Meio Diferencial
Possibilita a distinção entre vários gêneros e espécies de microrganismos, por
possuir substâncias que permitem uma diferenciação presuntiva, evidenciada na
mudança de coloração ou na morfologia das colônias.
Ex.: Agar Eosin Methilene Blue (EMB), Agar McConkey e Agar Hektoen.
Microbiologia Clínica – Meios de cultura
Introdução
5. Meio Indicador
É utilizado no estudo das propriedades bioquímicas das bactérias, auxiliando,
assim, sua identificação. O mais simples é aquele usado no estudo das reações de
fermentação.
Ex.: Agar Triple Sugar Iron (TSI) e Agar Citrato de Simmons
Microbiologia Clínica – Meios de cultura
Introdução
Seleção dos Meios de Cultura:
A escolha dos meios de cultura, para o processamento inicial das amostras é muito
importante e está condicionada à flora patogênica desse local;
Em geral é usado mais de um tipo de meio, no sentido de fornecer condições de
crescimento a todos os patógenos possíveis de estarem presentes
Para cada caso em particular, existem os meios utilizados rotineiramente na
semeadura primária;
Atualmente, o procedimento mais utilizado é a aquisição de meios pré-fabricados e
fornecidos de forma desidratada, onde é necessário apenas a pesagem criteriosa da
quantidade necessária ao volume desejado, seguido de dissolução e esterilização.
Microbiologia Clínica
Introdução
Líquidos ou caldos: crescimento indiscriminado com turvação do meio
Sólidos: crescimento de colônias isoladas, muito utilizado para culturas puras
Semi-sólido: adição de menor quantidade de ágar, mobilidade bacteriana
Microbiologia Clínica Classificação quanto ao estado físico
Temperatura, oxigênio, pH e Pressão osmótica__________________________________________________
Condições ambientais relacionadas ao crescimento bacteriano
Efeito da temperatura no crescimento microbiano
Psicrófilos: Temperatura ótima: 15°C;Encontrados em oceanos e regiões da Ártica;
Psicrotróficos:Temperatura ótima: 20 a 30°C;crescem em temperatura de refrigeradores (4°C);
Mesófilos: Temperatura ótima: 25 a 40°C (mais encontrados); Corpo de animais (temperatura da pele);Bactérias patogênicas: temp. ótima 37°C;Degradam alimentos e são patogênicos;
Termófilos: Temperatura ótima: 50 a 60 °CAmbiente de águas termais (não crescem em temp.<45°C) Material estocado (altas temp.)=
compostagem.
Efeito da temperatura no crescimento microbiano
Aeróbio Anaeróbio Facultativo Microaerófilo Anaeróbio aerotolerante
Efeito do oxigênio no crescimento microbiano
Microrganismos aeróbios 21% de oxigênio fungos filamentosos e bactérias do gênero Mycobacterium e Legionella;
Jarra microaerófila: para microrganismos que apresentam necessidade de CO2.
Microrganismos facultativos presença do ar ou anaerobiose Enterobacteriaceae e leveduras.
Microrganismos anaeróbios podem ser mortos pelo oxigênio, não crescem em presença do ar e não utilizam oxigênio para reações de produção de energia;
Câmara de anaerobiose ou jarra de anaerobiose.
Microrganismos microaerófilos não resistem a níveis normais de oxigênio (1 a 15%).
Efeito do oxigênio no crescimento microbiano
Acidez ou Alcalinidade (pH):
Diferentes gêneros de microrganismos têm tolerâncias diferentes de pH:
- Bactérias: 4 a 9;
- Bolores e leveduras: ótimo de 5 a 6;
- Protozoários: 6,7 a 7,7;
- Algas: 4 a 8,5.
Pressão Osmótica
[A] Células em meio isotônico. [B] Células em meio hipertônico.
[C] Células em meio hipotônico.
• Em microbiologia crescimento geralmente é o aumento do número de células • Na maioria dos procariotos ocorre a fissão binária: crescimento e divisão
Varia de minutos até diasDepende muito das condições ambientais
Escherichia Coli - 20 minutosPisolithus microcarpus – 2,5 dias
CRESCIMENTO MICROBIANO
O padrão de crescimento é o exponencial
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
0 50 100 150 200 250 300
minutos
célu
las
O ciclo de crescimento
• A fase exponencial reflete apenas uma parte do ciclo de crescimento de uma população microbiana
• O crescimento de microrganismos em um recipiente fechado (batelada) apresenta um ciclo típico com todas as fases de crescimento.
1) Fase Lag
Período de adaptação da cultura
• Mudança de meio, preparação do complexo enzimático
• Reparação das células com danos.
2) Fase exponencial
Fase mais saudável das células onde todas estão se dividindo.
• A maioria dos microrganismos unicelulares apresentam essa fase, mas as
velocidades de crescimento são bastante variáveis:
- Procarióticos – crescem mais rapidamente que os eucarióticos
- Eucarióticos menores crescem mais rapidamente que os maiores
3) Fase estacionária:
Num sistema fechado (tubo) o crescimento exponencial não pode ocorrer indefinidamente.
• Ocorre a limitação por depleção de nutrientes e acúmulo de metabólitos.
Divisão = morte → crescimento líquido nulo
4) Fase de morte (declínio):
• A manutenção de uma cultura no estado estacionário por longo tempo conduz as células ao processo de morte.
- A morte celular é acompanhada da lise celular