Post on 23-Jan-2019
“ASPECTOS MOLECULARES DO CHC NA DHGNA:
O QUE SABEMOS?”
José Tadeu Stefano
Laboratório de Gastroenterologia Clínica e Experimental
Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo
Taxas de Incidência do CHC
Llovet et al., Nature Reviews, 2016
Estimativa de novos casos e de mortes por cânceres nos EUA em 2018
Siegel, Miller, Jemal; CA Cancer J Clin; 2018
O CHC representará 4% dos casos de novos canceres em homens. E será o responsável por 6% dos casos de morte por câncer em homens e 3% em mulheres
GLOBOCAN 2012: Estimated Cancer Incidence, Mortality and Prevalence Worldwide in 2012. (2012). URL consulted on March 15, 2017: http://globocan.iarc.fr/Pages/fact_sheets_population.aspx.
Incidência do CHC de acordo com a região e sexo
Dyson et al., J Hepatol. 2014
Etiologias das Doenças Hepáticas Associadas ao CHC
Fassio et al., Annals of Hepatology, 2010
Distribuição do CHC na América Latina
www.cancer.org/cancer/liver-cancer/causes-risks-prevention/risk-factors.html (consulted on May 05, 2018)
Fatores de Risco para CHC - Sociedade Americana de Câncer
Gênero
Raça/ etnia
Hepatite viral crônica (B ou C)
Cirrose
Doença hepática gordurosa não alcoólica
Cirrose biliar primária
Doenças metabólicas hereditárias (hemocromatose hereditária)
Alcoolismo
Obesidade
Diabetes tipo 2
Doenças raras:
Aflatoxinas
Cloreto de vinila e Dióxido de tório
Esteroides anabolizantes
Arsênico
Infecção por parasitas (esquistossomose)
Tabaco
Pílulas anticoncepcionais (efeitos pouco claros)
- Tirosinemia
- Deficiência de alfa1-antitripsina
- Porfiria cutânea tardia
- Doenças de armazenamento de glicogênio
- Doença de Wilson
Sobrepeso, Obesidade e Risco para CHC
Rosmorduc & Fartoux, Clin Res Hepatol Gastroenterol. , 2012
Diabetes Mellitus Tipo 2 e Risco para CHC
Rosmorduc & Fartoux, Clin Res Hepatol Gastroenterol., 2012
Risco Relativo de Morte por Câncer na Presença de Sobrepeso e Obesidade
El-Serag HB & Rudolph K L, Gastroenterology, 2007
Fígado Normal
Esteato-hepatite
CHC
OBESIDADE
Acúmulo de lipídios Resistência à
insulina
EROS
Lesão DNA
Resposta Inflamatória
IL-6 TNF
STAT NF-kB
Sinais Oncogênicos
Adipocitocinas
Dieta com alto teor de frutose/lipídios
DesordensEndócrinas
Fatores hereditários
Sedentarismo
Adaptado de: Sun & Karin, Journal of Hepatology, 2011
Toffanin, Friedman, Llovet, Cancer Cell, 2010
PNPLA3TM6SF2
Fatores Metabólicos Implicados na Transição da
DHGNA para o CHC
Agosti, Sabbà, Mazzocca, BBA - Molecular Basis, 2018
AUTOR ANO N POPULAÇÃO ESTUDADA PREVALÊNCIA
Bugianesi et al 2002 641 Cirróticos com CHC 3,6%
Hashimoto et al 2009 382 População com EHNA 8,9%
Takuma et al 2010 445 CHC com tratamento curativo 2,5%
Hai et al 2006 481 CHC ressecado 0,5%
Maeda et al 2008 242 CHC ressecado 0,8%
Kawada et al 2009 1168 CHC ressecado 0,7%
Malik et al 2009 98 Transplantados por CH-EHNA 17%
Chagas et al 2009 394 CHC visto por USG 1,8%
Zoller & Tilg, Metabolism, 2016
Prevalência do CHC na DHGNA
Variabilidade População + Métodos Diagnósticos
Wong, Cheung, Ahmed, Hepatology, 2014 Hernandez-Alejandro et al., World J Gastroenterol. 2012
Diagnósticos de Pacientes Submetidos a Transplante Hepático
Estudo retrospectivo
42 pacientes com CHC (Janeiro 2010 - Dezembro 2012) de 2 centros do Brasil
71% - relacionados à DHGNA e 29% - CC
Idade média: 66 anos
Sexo masculino: 62%
Síndrome Metabólica: 81%
Cirrose estava presente em 83.3% dos casos; (16.7%) 3 pacientes eram F2 e 2 pacientes eram F3
American Journal of Clinical Oncology, 2014
CONCLUSIONS:
The BCLC system is applied in most cases of NAFLD-related HCC cases. Deviation of BCLC is found
more frequently in BCLC C stage patients
Características clínicas dos pacientes CHC/ NASH (n=110)
Diagnóstico histológico dos pacientes CHC/ NASH (n=52) Diagnóstico baseado em exames de imagem dos pacientes CHC/ NASH (n=58)
CLINICS 2016;71(5):281-284
Principais e mais recentes estudos sobre a associação entre DHGNA/ NASH e CHC
Younes & Bugianesi; Journal of Hepatology; 2018
Obesidade Diabetes
Resistência Insulínica
IGF-1 Ativação de IRS-1
(por fosforilação de JNK-1)
Hiperinsulinemia
Ácidos Graxos
Proliferação Celular Apoptose
Esteatose Inflamação
Cirrose - TNF- - IL-6 - NFkB - Leptina - Resistina
Adiponectina
Supressão de p53 Mutações em Nrf-1 Ativação de JNK-1
EROS
CHC
Adaptado de Starley BQ, Calcagno CJ , Harrison SA; Hepatology, 2010
Mecanismos Moleculares que Associam a DHGNA ao Desenvolvimento do CHC
Mecanismos Moleculares que Associam a DHGNA ao Desenvolvimento do CHC
Stickel F & Hellerbrand C, Gut, 2010
OBJETIVOS: Avaliar o papel da via do mTOR na cirrose secundária à NASH, na tentativa
de caracterizar o envolvimento desta via na fisiopatogênese da doença.
CONCLUSÕES:
1. Estes dados corroboram a participação da via mTOR na cirrose secundária à NASH;
2. Sugere-se que avaliação da proteína mTOR fosforilada pode ser de útil na prática clínica como um potencial
marcador na identificação da NASH em casos considerados equivocadamente como cirrose criptogênica,
devido à escassez de dados clínicos.
phospho 4E-BP1 phospho mTOR
Kubrusly et al., Histol & Histopathol., 2010
IDENTIFICATION OF COMMON GENE MARKERS IN THE WHOLE SPECTRUM OF
NONALCOHOLIC FATTY LIVER DISEASE (NAFLD) PATIENTS: SINCE SIMPLE STEATOSIS TO
NASH-RELATED HEPATOCELLULAR CARCINOMA (HCC)
STEFANO JT1, OLIVEIRA CPMS1, CORREA-GIANNELLA ML, KUBRUSLY MS1, BELLODI-PRIVATO M1,
LIMA VMR1, ALVES VAF3, CARRILHO FJ1
1. Department of Gastroenterology LIM-07 - University of Sao Paulo School of Medicine, Sao Paulo, Brazil
2. Laboratory for Cellular and Molecular Endocrinology LIM-25 - University of Sao Paulo School of Medicine, Sao Paulo, Brazil
3. Department of Pathology LIM-14, University of Sao Paulo School of Medicine, Sao Paulo, Brazil
EASL, 2008 and ILCA, 2008
UniGene Symbol Gene NameFold change
ST x CTRL
Fold change
NASH x CTRL
Fold change
CIR x CTRL
Fold change
HCC x CTRL
metabolic process
Hs.551747 NEU4 Sialidase 4 -2,800 -3,127 -3,234 -3,715
cell cycle
Hs.93002 UBE2C Ubiquitin-conjugating enzyme E2C -4,004 -3,006 -2,027 -2,096
apoptosis
Hs.514527 BIRC5 Baculoviral IAP repeat-containing 5 (survivin) -3,287 -2,701 -2,658 -2,507
lipid transport
Hs.513075 STARD5 StAR-related lipid transfer (START) domain containing 5 -3,228 -4,285 -2,553 -3,586
protein folding
Hs.507080 APCS Amyloid P component, serum -3,960 -3,982 -2,538 -5,562
lipid catabolic process
Hs.170904 GRTP1 Growth hormone regulated TBC protein 1 -2,608 -2,679 -2,003 -3,936
vesicle-mediated transport
Hs.508958 STXBP6 Syntaxin binding protein 6 (amisyn) -4,310 -3,548 -3,080 -3,726
DNA replication
Hs.515122 TK1 Thymidine kinase 1, soluble -3,178 -3,754 -2,771 -3,290
RNA processing
Hs.416755 LARP6 La ribonucleoprotein domain family, member 6 -3,490 -3,740 -2,418 -4,070
small GTPase mediated signal transduction
Hs.379414 MFHAS1 Malignant fibrous histiocytoma amplified sequence 1 -3,746 -3,699 -2,001 -3,163
transport
Hs.546482 NHEDC2 Na+/H+ exchanger domain containing 2 -4,195 -3,961 -2,292 -4,670
Genes Comuns com Expressão Diminuída nas Fases de Evolução da DHGNA
EASL, 2008 and ILCA, 2008
UniGene Symbol Gene NameFold change
ST x CTRL
Fold change
NASH x CTRL
Fold change
CIR x CTRL
Fold change
HCC x CTRL
protein amino acid phosphorylation
Hs.474596 LIMK2 LIM domain kinase 2 3,733 5,083 3,871 4,247
Hs.524625 GRK5 G protein-coupled receptor kinase 5 2,825 3,079 2,485 3,995
Hs.123074 GUCY2F Guanylate cyclase 2F, retinal 2,612 2,918 2,165 3,856
nervous system development
Hs.502182 BDNF Brain-derived neurotrophic factor 2,465 3,351 2,604 2,603
MAPKKK cascade
Hs.143674 RASGRP3 RAS guanyl releasing protein 3 2,053 2,164 2,220 2,299
Hs.269059 JARID2 jumonji, AT rich interactive domain 2 2,979 2,958 2,360 3,850
Hs.407636 FIGLA Folliculogenesis specific basic helix-loop-helix 2,979 2,958 2,360 3,850
regulation of transcription, DNA-dependent
Hs.128279 L3MBTL4 l(3)mbt-like 4 (Drosophila) 3,140 3,777 2,100 3,560
muscle development
Hs.133135 UTRN utrophin 2,710 3,492 2,301 3,888
metabolic process
Hs.175905 AUH AU RNA binding protein/enoyl-Coenzyme A hydratase 2,632 2,710 2,334 2,919
Genes Comuns com Expressão Aumentada nas Fases de Evolução da DHGNA
EASL, 2008 and ILCA, 2008
CONCLUSÃO:
A modulação de genes relacionados à carcinogênese nas fases iniciais do espectro DHGNA sugere
uma predisposição a estados hiperproliferativos na progressão da DHGNA.
RNA cDNA cRNA
Cy5 biotina
IVT
18 Esteatoses
21 NASH
10 Cirroses secundárias à NASH
6 CHC secundários à NASH
71 CHC relacionados a outras causas
12 Tecidos Hepáticos livres de doença
Imunohistoquímica
(Tissue Microarray – TMA)
Casuística e Métodos
*
A
B A B
Stefano et al., Liver Int., 2011
Eslam, Valenti, Romeo, Journal of Hepatology 2018
Variantes Genéticas Associadas ao Desenvolvimento e/ou Progressão da DHGNA
miRNAs Específicos Associados ao Desenvolvimento e Progressão da DHGNA
HYPERINSULINEMIA
CELLULAR MECHANISMS
GENETIC POLYMORPHISM
HEPATOCELLULAR CARCINOMA
Mecanismos Propostos de Hepatocarcinogênese na DHGNA
Wong, Nguyen, Lim, World J Gastroenterol 2016
Zucman-Rossi et al; Gastroenterology, 2015
ClassificaçãoMolecular
do CHC
21 PACIENTES CHC/ NASH
35 NÓDULOS DE CHC
423 Pacientes com CHC
EASL 2016
Steatohepatitis HCC subtype
Intratumoral ballooning
Mallory Denk bodies
Intratumoral fibrosis
Intratumoral inflammation
35 nodules 25 HCC nodules (70%)
EASL 2016
Focal or extensive
Salomão et al, 2011
A B
C D
A - HCC, grade 2, NASH subtype [microvacuolar steatosis, ballooning, Mallory bodies) (HE, x200) B,C - HCC, grade 1, NASH subtype [ballooning and Mallory bodies, intratumoral fibrosis and moderate inflammation] (HE, x100) (C. HEx200) D - HCC, grade 2, NASH subtype. Mallory bodies (HE, x400).
EASL 2016
Steatohepatitis HCC subtype
Edmondson & Steiner Classification 35 NASH HCC nodules
EASL 2016
Avaliação IHQ dos Marcadores de Proliferação/ Propriedades de Células Progenitoras
EASL 2016
Expressão de marcadores Ck19 e Ki67
15% apenas CK19 +
15% apenas Ki67 +
6 % CK19+ e Ki67+ambospositivos
64% marcadores negativos
Reações de IHQ Representativas de Ck19 e Ki67
A) Expressão < 1% de K19 (x200). B) Expressão <1% K19 (x400). C). Expressão 70% de K19 em CHC
esteatohepatitico (x100) D). Expressão 70% em CHC esteatohepatitico (x200). E) Expressão 3% de Ki67
(x200) F) Expressão 3% de Ki67 (x400) G) Expressão 74% de Ki67 (x200) H). Expressão 74% de Ki67 (x400)
EASL 2016
Ck19 Ki-67
• Promotor TERT (60%) - Estabilidade telômero
• TP53 (20-30%) - Integridade genômica
• CTNNB1 (15-25%) - Via WNT
• ARIDIA (10-16%) - Remodelamento cromatina
• JAK1 (0-9%) - Via JAK/STAT
Oncogenes frequentementemutados no CHC
• IDH1 e 2
• EGFR
• KRAS
• PIK3CA
• PTEN
Oncogenes raramente
mutados no CHC
• FGF19 (5-10%) - Via do Fator de Crescimento de Fibroblasto
• CCND1 (5-10%) - Ciclo celular
• VEGFA (7-10%) - Angiogênese
Oncogenes com carga alta de
amplificação no CHC
Zoller H & Tilg H, 2016 Bruix J, 2015
Mesmo com sequenciamento do exoma tumoral não foi possível identificar
um padrão molecular distinto para CHC secundário a DHGNA pela
heterogeneidade dos resultados.
OBRIGADO!
José Tadeu Stefano
jose.tadeu@fm.usp.br