BQ-REL2-Construção de Uma Reta Padrão

8/19/2019 BQ-REL2-Construção de Uma Reta Padrão

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CONSTRUÇÃO DE UMA RETA -PADRÃO DE PROTEÍNAS

Relatório 2 Turno: P4 Grupo: 2

Autores: Letícia Vitorio !"#"$#%2&'( Liliaa )o*e+ !"#"$#'( Mara Pitre,!"#"$#%4&'( Maria .+ Oli/eira !"#"$#%01'

Data de entrega: "4#%2#"$

3 tro567o teórica e o89eti/o+

O tra8al:o la8oratorial ;er*iti5-o+ a co+tr567o e 5*a reta-

;ar7o ;ara ;roteía+ 8e* co*o aali+ar a i<ere6a etre 5*a retae+te ti;o e c5r/a e cali8ra67o3

A reta-;ar7o =-o+ o iter/alo e lieariae e* >5e o o++o

e+t5o ? /=lio( e>5ato >5e 5*a c5r/a e cali8ra67o ? a 5i7o e

/=rio+ ;oto+ co+ierao toa+ a+ /aria6@e+3

A ;re;ara67o a+ +ol56@e+-;ar7o ? >5e o+ /ai ;er*itir a

co+tr567o e+ta reta( +eo >5e 5*a +ol567o-;ar7o ? a>5ela c59a

cocetra67o ? co:ecia e co*o tal ;er*ite a co+tr567o e 5*

r=Bco e a8+or/cia ;or cocetra67o o >5al acee*o+ reta e

+5a re+;eti/a e>5a67o3

O *?too 5tli,ao <oi o/a*ete o *?too a

e+;ectro<oto*etria3 O e+;ectro<oto*etro ? 5* i+tr5*eto e

a=li+e( ca;a, e *eir a >5atiae e l5, a8+or/ia ;or

eter*iaa a*o+tra3 O re+5ltao e+te *?too ? 5* r=Bco(co:ecio e e+;ectro( c59o+ /alore+ ;er*itira*-o+ a a5la aterior

retirar >5e $$ * ? o co*;ri*eto e oa óti*o e a8+or/cia a

;roteía FSA( +eo ;or i+to( o co*;ri*eto e oa >5e /a*o+ 5+ar

e+te tra8al:o la8oratorial3

O+ co*;oete+ ;rici;ai+ o e+;ectro<o*etro +7oG



- Hote e l5,G o e+;ectro<otó*etro ;oe +er co*;o+to ;or 5*a

o5 5a+ l*;aa+ >5e ;oe* +er e e5ret?rio e*itio raia67o UV

e a o5tra e t5+t?io e e*itir= l5, /i+í/el3

- Moocro*aorG o+ a;arel:o+ *ai+ atio+ ;oe* ;o++5ir 5*

;ri+*a *oocro*aor( *a+ o+ *ai+ *oero+ ;o++5e* i+;o+iti/o+

>5e tra+<or*a* a l5, iciia e* /=rio+ co*;ri*eto+ e oa 5*

+ó( a l5, *oocro*=tica3

- C5/eteG reci;iete >5e cot?* a a*o+tra e* a=li+e >5e

e/er= e +er e >5art,o >5ao :o5/er a ece++iae e tra8al:ar

co* UV3

- DetetorG i+;o+iti/o >5e eteta a <ra67o e l5, >5e ;a++o5

;ela c5/ete e tra+<ere e++e /alor ;ara o ecr7 o a;arel:o3

A e+;ectro<oto*etria e+t= <5a*etal*ete liaa Lei e

La*8ert-FeerG

AI Jcl( oeG A ? a a8+or/ciaK J ? o coe<iciete e eti67o

*olarK l ? o co*;ri*eto a c5/ete3

Fa+eao-o+ e+ta lei( ;oe*o+ cocl5ir >5e a a8+or/cia ?

ireta*ete ;ro;orcioal cocetra67o a +ol567o o>5e i*;lica

ta*8?* >5e ;ara 5*a +ol567o *ai+ cocetraa :a9a *aiore+

/alore+ e a8+or/cia e e <or*a +e*el:ate( >5ato *aior a

i+tcia ta*8?* *aior +er= a a8+or/cia3

3 Re+5ltao+

Fraco Par7o " Par7o 2 Par7o % Par7o 4

Cocetra67o !µg/ µL' # #(#" #(#2 #(#4 #(#1

A8+or/cia !A' # #(411 #(&%4 "(211 "($4



Dao+G

<!' I 2"310 #32%R I #3"

Reta- ;ar7o e ;roteía+

)r=BcoG

C=lc5lo a+ cocetra6@e+G

Gráfco 1 - reta - padrão de proteínas



[Solução padrão ]inicial=0,5µg /µL

Vf ( Solução padrão )=1150µL

Padrão 1

C i ×V i=C f × V f

C f (Solução padrão)=0,5×25

1150=0,01 µg/ µL

Padrão 2



1150=0,02µg /µL

Padrão 3



1150=0,04 µg /µL

Padrão 4



1150=0,07 µg /µL

3 Di+c5++7o e co+iera6@e+ Bai+

O ;rici;al o89eti/o e+ta ati/iae la8oratorial <oi a co+tr567o

e 5*a reta ;ar7o ;ara ;roteía FSA !Fo/ie +er5* al85*i'3 Para

a +5a co+tr567o 5tili,=*o+ /=rio+ *?too+( *ai+ e+;eciBca*ete o

*?too e e+;ectro<oto*etria e o *?too e Fra<or !9= <alao o

relatório aterior'3



A e+;etro<oto*etria ? 5*a t?cica e a=li+e >5í*ica >5e

e+t5a a itera67o etre a eeria raiate e a *at?ria3 E+te *?too

? >5alitati/o e ta*8?* >5atitati/o( 5*a /e, >5e ;er*ite a

+58+tcia ;re+ete 5*a aa +ol567o e ta*8?* a >5atiaee+ta3 E+te *?too 8a+eia-+e a a8+or67o o5 e*i++7o e eeria ;or

;arte a +58+tcia e* e+t5o3 5ao a raia67o *oocro*=tica e

eter*iao co*;ri*eto e oa atra/e++a 5*a +ol567o( a eeria

e*itia ;ela +ol567o( /ai +er *eor o >5e a>5ela >5e icii5 +o8re

e+ta3 A e+ta ite+iae e raia67o c:a*a*o+ e a8+or/cia( >5e

? 5*a caracterí+tica >5e e+ta ireta*ete relacioaa co* a

at5re,a a a*o+tra( a +5a ca;aciae e a8+or/er raia67o a++i*

co*o co* a +5a cocetra67o a +ol567o e a e+;e++5ra o reci;iete

oe e+t= cotia !l'3 E+ta+ rela6@e+ +7o tra5,ia+ ;ela lei e

La*8ert-Feer3 Co* 8a+e e+ta lei( te*o+ >5eG A I E c( e* >5e A ? a

a8+or/cia( E ? o coeBciete e eti67o !co+tate caracterí+tica

e caa e+;?cie >5í*ica'( ? o tra9eto ótico a l5, e( ;or B*( c ? a

cocetra67o3

O coeBciete e eti67o E( ? 5*a caracterí+tica e caa+58+tcia e e;ee ta*8?* o +ol/ete e* >5e e+t= i++ol/io( a

te*;erat5ra e o co*;ri*eto e oa 5tili,ao3 De/io a +5a

rae e+;eciBciae( ;or /e,e+( 7o ? ;o++í/el /eriBcar o+ /alore+

ta8lao+ ;ara e+ta rae,a( o >5e i*;ee e 5tili,ar a lei e

La*8ert-Feer ireta*ete ;ara o8ter a cocetra67o a +5+tcia3

Por co+e5ite recorre*o+ a ela8ora67o e 5*a reta-;ar7o( o

o89eti/o e+ta ati/iae ;r=tica3 E+ta reta /ai re;re+etar /aire;re+etar a lei e La*8ert-Feer a ;artir o+ /alore+ e a8+or/cia

o8tio+ e +ol56@e+ -;ar7o a ;roteía e* e+t5o3 O r=Bco

re+5ltate ter= o eio a+ oreaa+ o+ /alore+ e A8+or/cia

o8tio+ e o eio a+ a8ci++a+ a cocetra67o3 O ecli/e e+ta reta

corre+;oe co+tate e ;ro;orcioaliae3

O5tro o89eti/o e+ta ati/iae la8oratorial <oi /eriBcar >5e a

a8+or/cia e 5*a +ol567o ? ireta*ete ;ro;orcioal



cocetra67o o +ol5to( +e5o a Lei e La*8ert-Feer3 e

+alietar >5e a a8+or/cia ? tato *aior >5ato *aior <or a

i+tcia ;ercorria( o o++o ca+o a i+tcia ;ercorria <oi i5al a "

c*3

Para cali8rar !,erar' o e+;ectro<otó*etro <oi ece++=rio

5tili,ar 5*a +ol567o a5+ete e ;roteía !/ari=/el e;eete e*

e+t5o' >5e +e e+ia e 8raco3 E+ta +ol567o cot?* a;ea+

reaete e Fra<or e =5a e+tilaa3

Procee*o+ a;ea+ reali,a67o e 5* 8raco a>5ao o

*o*eto iicial /i+to >5e o co*;ri*eto e oa 5tili,ao <oi o

*e+*o ;ara toa+ a+ +ol56@e+3

Para *el:orar +iiBcati/a*ete o+ re+5ltao+ +eria <a/or=/el

<a,er 5* *íi*o e & +ol56@e+-;ar7o( o etato ;or ó+ <ora*

a;ea+ ela8oraa+ 4 +ol56@e+-;ar7o !toa+ co* cocetra6@e+ e

;roteía FSA i<erete+'3 E+ta+ +ol56@e+ <ora* ;re;araa+ co*

*icro;i;eta+ o >5e ;er*iti5 o rior a+ +5a+ ;re;ara6@e+3 O+

reaete+ 5tili,ao+ <ora*G =5a e+tilaa( corate a,5l e Co*a++iee ;roteía FSA3

Co*o re<erio o relatório aterior o corate e A,5l e

Co*a++ie <or*a co*;leo+ co* a ;roteía FSA e* +ol567o(

a;re+etao 5*a cor aca+ta:aa3 E+ta ;ro;rieae e;lica o

era. >5e +e /eriBco5 a+ i<erete+ +ol56@e+-;ar7o( co*o

;oe*o+ /eriBcar a i*ae* >5e +e ecotra o+ re+5ltao+3 U*a

*aior cocetra67o e ;roteía FSA e* +ol567o ;er*ite ta*8?* a

<or*a67o e 5*a >5atiae *aior e co*;leo+ >5e +e <ora* etre

a ;roteía e o corate3 Poe*o+ cocl5ir ;ortato >5e >5ato *aior

<or a >5atiae e ;roteía e* +ol567o( *ai+ a;arete +er= a

colora67o a,5laa a +ol567o3

No >5e toca 5tili,a67o o 5+o o e+;ectro<otó*etro( e/e*o+

ter al5+ c5iao+ ;ara a++i* e/itar o *=i*o e erro+ e leit5ra>5e co*e6a a cali8ra67o e+te +e5io a+ i+tr56@e+



reco*eaa+( a certiBca67o +e o e>5i;a*eto e+t= <ec:ao o5 7o

a>5ao a leit5ra( ;oi+ a l5, a*8iete iter<ere co* o+ re+5ltao+3

Co* 8a+e o+ ao+ o8tio+ a ati/iae la8oratorial aterior(

co+tata*o+ >5e o co*;ri*eto e oa ieal ;ara a +58+tcia

aali+aa !FSA' ? e $$*( ;or e+ta ra,7o( e+te <oi o /alor e+col:io

e+ta e;eri.cia3

Mei*o+ et7o a a8+or/cia( o e+;ectro<otó*etro( ;ara caa

+ol567o ;ar7o3 Co* o+ re+5ltao+ o8tio+ cotr5í*o+ a reta-;ar7o

;ara a ;roteía FSAG 2"(1$& #(2212 e* >5e 2"(1$& ? o ecli/e a

reta e ;ortato a cotate e ;ro;orcioaliae a ;roteía FSA3

i*;ortate re<erir >5e teorica*ete e+ta reta e/ia ;a++ar a orie*

5*a /e, >5e 5tili,=*o+ o 8raco co*o +ol567o-;ar7o3

Po++i/el*ete( e/io a+ coi6@e+ e* >5e ocorrera* a ;re;ara67o

a+ +ol56@e+ ;oeria :a/er erro+ e leit5ra 5*a /e, >5e o

e+;etro<otó*etro ? 8a+tate +e+í/el3

Atra/?+ a reta-;ar7o o8tia o8ti/e*o+ ta*8?* o coeBciete

e correla67oG #("%"3 O coeBciete e correla67o ;er*ite-o+/eriBcar +e o *oelo 5tili,ao ? eBca, o5 7o e e/e /ariar etre # e

"3 Co* 8a+e o+ o++o+ re+5ltao+ /eriBca*o+ >5e o *oelo a

o++a reta-;ar7o co+e5e tra5,ir eBca,*ete o+ re+5ltao+

o8tio+3

Poe*o+ cocl5ir >5e o o89eti/o e+ta ati/iae ;r=tica <oi 8e*

+5ceio 5*a /e, >5e o coeBciete e correla67o <oi ;rói*o e "3

E+te tra8al:o ;er*iti5 ta*8?* a <a*iliari,a67o co* a t?cica

a e+;ectro<oto*etria e 5* o+ *?too+ colori*?trico+ *ai+

5tili,ao+ Qo *?too e Fra<or3

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