Post on 02-Nov-2014
description
UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA INSTITUTO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE – ICS
DEPARTAMENTO DE BIOINTERAÇÃODISCIPLINA: IMUNOLOGIA I – ICS 045
REAÇÕES DE AGLUTINAÇÃO
Trabalho realizado pelo Acadêmico de Medicina Veterinária da UFBA José Tadeu Raynal, sob orientação dos Professores Robert Schaer, Roberto Meyer, Claudia
Brodskin e Ricardo Portela. Atualizado em Fevereiro de 2010.
CARACTERÍSTICAS BÁSICAS
• As reações de aglutinação decorrem da ligação entre o Ac e Ag particulado.
• É o agrupamento de partículas, usualmente por moléculas de Ac, que se ligam a Ag na superfície de partículas adjacentes.
• Agregação visível de partículasEritrócitosBactériasFungosLátex
CARACTERÍSTICAS BÁSICAS
o Fatores que influenciam a formação dos agregados
• Classe do anticorpo envolvido.• Concentração iônica e pH do meio.• Presença de macromoléculas, íons, enzimas e
conservantes.• Tempo e temperatura.• Padronização adequada da suspensão de micropartículas
ou células.• Concentração ótima de antígeno ou Ac a ser fixado nas
micropartículas ou células.• Estabilidade da ligação do Ag/Ac e acessibilidade dessa
molécula nas micropartículas ou células.
CARACTERÍSTICAS BÁSICAS
o Vantagens:• Baixo custo.• Boa especificidade. • Leitura visual.• Facilidade de execução.
o Desvantagens:• Baixa sensibilidade. • Reprodutibilidade dos lotes de reagentes.• Acessibilidade molecular para interação Ag-Ac.• Estabilidade da ligação do Ag/Ac no suporte.
CARACTERÍSTICAS BÁSICAS
TIPOS DE REAÇÃO
• Neste teste, o antígeno faz parte naturalmente da célula, e haverá aglutinação dessas células promovida por anticorpo contra esses antígenos (antígeno é naturalmente insolúvel).
Anticorpo Antígeno Complexo precipitado
Ex: Identificação de antígenos eritrocitários na tipagem sanguínea, reação de Widal (febre tifóide).
AGLUTINAÇÃO DIRETA
• Na reação de aglutinação direta utilizam-se partículas antigênicas insolúveis em sua forma íntegra ou fragmentada. Hemácias, bactérias, fungos, protozoários podem ser aglutinados diretamente por anticorpo. Os testes para detectar anticorpos específicos são realizados empregando-se diluições em série do anticorpo, frente a uma quantidade constante de antígeno. Após um período de incubação, a aglutinação se completa e o resultado é geralmente expresso como o título do anti-soro, isto é, a máxima diluição em que ocorre a aglutinação.
Tipagem ABOTestes confirmatórios para sífilisAglutinação bacteriana
Presença de infecção Diferenciação de espécies
Salmonelose aviária Coriza infecciosa das galinhasMicoplasmoseBrucelose
AGLUTINAÇÃO DIRETA
• Tipagem ABO
AGLUTINAÇÃO DIRETA
• Esse método emprega a adsorção de anticorpos ou antígenos protéicos solúveis na superfície de micropartículas inertes (suporte).
• Para o teste, as hemácias e as partículas inertes (látex, leveduras, etc.) podem ser sensibilizadas por adsorção passiva, devida ao contato direto com os antígenos solúveis, por adsorção via agentes químicos, como ácido tânico, cloreto de cromo e por conjugação do antígeno, por meio de ligações químicas covalentes, fornecendo reagentes estáveis. Devido à grande diversidade de antígenos que podem se ligar às células ou partículas, a aplicação dos testes de aglutinação passiva é muito variada.
+
AGLUTINAÇÃO INDIRETA (PASSIVA)
• Teste de gravidez
+
Incubados e colocados em
placa
Particulas revestidas com hCG
Ac
Positivo não aglutina, pois os Ac se ligaram ao hCG da urina na incubação
UrinaSoro anti hCG
+
POSITIVO
hCG
+Soro anti hCG
NEGATIVO
Urina
+Incubados e
colocados em placa
Ac
Negativo aglutina
INIBIÇÃO DA AGLUTINAÇÃO
• Ac antiimunoglobulinas (Robert Coombs).
• Doença Hemolítica do Recém Nato – mãe produz IgG anti-Rh (DHRN)
• Não aglutinam os eritrócitos.• Direto: Ac ligados aos
eritrócitos fetais.• Indireto: Ac anti-Rh não
aglutinantes no soro materno. • Permite detectar
incompatibilidades Rh, prevenindo contra DHRN.
TESTE DE COOMBS
O efeito PRÓ-ZONA ocorredevido ao excesso de anticorposna amostra, que ocorre nossoros fortemente reagentes.Pode ocasionar resultadosFALSO-NEGATIVOS.Para evitar o efeito pró-zona,emprega-se soro diluído.
Ocorre FALSO-POSITIVOS
RELAÇÃO ANTÍGENO X ANTICORPO