LEUCÓCITOS leukos = branco

Valores de referência em Hematologia (Williams Hematology, 7th Ed., 2006)

Valores de referência em Hematologia (Williams Hematology, 7th Ed., 2006)

Valores de referência em Hematologia (Wintrobe Hematologia Clínica, 9ª Ed., 1998)

HEMATOPOESE

Compartimentos dos leucócitos

• Medula óssea

• Sangue periférico

• Tecidos

Leucograma avalia os leucócitos do sangue periférico

Compartimentos dos leucócitos

Fonte: Hoffbrand et al, 2004 – Fundamentos de Hematologia

Leucograma

• Contagem dos leucócitos totais

Câmara de contagem de células

Automação

• Contagem diferencial relativa

Contagem de no mínimo 100 leucócitos diferenciando pelo tipo de leucócito (um a um).

• Contagem diferencial absoluta

Com o número de leucócitos totais e as porcentagens de cada célula obtidas na contagem diferencial é possível calcular o número absoluto de cada um dos leucócitos

Leucograma

Contagem diferencial relativa • Contagem de no mínimo 100 leucócitos diferenciando pelo tipo de células • Se houver leucocitose (contagem global de leucócitos > 10 . 103/uL) deve-se contar na

contagem diferencial maior número de células (200 ou 500).

Para identificar cada um dos leucócito, utilize os seguintes

critérios morfológicos:

Tamanho da célula

Razão núcleo/citoplasma

Características do citoplasma (cor, presença ou ausência de grânulos, cor e tamanho dos grânulos)

Características do núcleo

(forma, cor, padrão de cromatina, presença e ausência de nucléolo)

Os leucócitos podem ser classificados

Granulações no citoplasma • Granulócitos (neutrófilos, eosinófilos e basófilos)

• Agranulócitos (monócitos e linfócitos)

Segmentação do núcleo • Polimorfonucleares (neutrófilos, eosinófilos e basófilos)

• Mononucleares (monócitos e linfócitos)

De acordo com a função

• Fagócitos (neutrófilos, eosinófilos, basófilos e monócitos)

• Imunócitos (linfócitos)

Granulócitos

Agranulócitos

LEUCÓCITOS

NEUTRÓFILOS

EOSINÓFILOS

BASÓFILOS

LINFÓCITOS

MONÓCITOS

Contagem relativa dos leucócitos

• É realizada através da análise morfológica dos leucócitos, contando no mínimo 100 leucócitos, diferenciando célula a célula.

Campo muito grosso Campo adequado Campo muito fino

Contagem relativa dos leucócitos • É realizada através da análise morfológica dos leucócitos, contando no

mínimo 100 leucócitos, diferenciando célula a célula.

Campo muito

grosso Campo adequado Campo muito fino

Contagem relativa dos leucócitos • É realizada através da análise morfológica dos leucócitos, contando no

mínimo 100 leucócitos, diferenciando célula a célula.

A

A

B

A – Cerca de 25 células

B- Cerca de 50 células

Contagem relativa dos leucócitos As células não tem distribuição uniforme na extensão sanguínea

Cabeça Corpo Cauda

Os linfócitos predominam no meio da extensão

Neutrófilos e monócitos predominam nas margens e na cauda

LEUCÓCITOS

Linfócito

Monócito

Neutrófilo Eosinófilo

Basófilo

LEUCOGRAMA

Avalia alterações quantitativas e morfológicas dos leucócitos

Contagem dos leucócitos totais

Valores de referência: 5,0 a 11,0 x 103/uL (ou 109/L)

ou

4,0 a 11,0 x 103/uL

- Leucocitose = leucócitos totais > 11,0 x 103/uL

- Leucopenia = leucócitos totais < 4,0 x 103/uL

Exemplo Contagem de leucócitos totais: 9,0 x 103/L

Células % Número absoluto

( /L)

Neutrófilos bastonetes 02

Neutrófilos segmentados

57

Eosinófilos 03

Basófilos 01

Linfócitos 31

Monócitos 06

total 100

Contagem de leucócitos totais: 9,0 x 103/L

Neutrófilos bastonetes

9.000 -------------------------- 100%

x -------------------------- 2%

X= 180 neutrófilos bastonetes/ L

Neutrófilos segmentados

9.000 -------------------------- 100%

x -------------------------- 57%

X= 5.130 neutrófilos segmentados/ L

Fórmula leucocitária relativa e absoluta

Células % Número absoluto

/L de sangue

Neutrófilos bastonetes 02 180

Neutrófilos segmentados

57 5.130

Eosinófilos 03 270

Basófilos 01 90

Linfócitos 31 2.790

Monócitos 06 540

total 100 9.000

Neutrófilos

Disciplina de Fisiologia do Sistema Hematopoético 2011

Neutrófilos

• É o leucócito mais frequente no sangue periférico do adulto

• Apresenta vários estágios de maturação (mieloblastos, promielócitos, mielócitos, metamielócitos, neutrófilos

bastonetes e neutrófilos segmentados)

A meia vida dos neutrófilos desde a fase de mieloblasto até a morte é de 9 a 10 dias

• No sangue periférico são encontrados, fisiologicamente, poucos neutrófilos bastonetes ( 2 a 5%) e grande frequência ( 50 a 60%) são neutrófilos segmentados

• No sangue do adulto é o leucócito mais predominante

(40-70%)

• Alto poder de fagocitose

• Primeira linha de defesa contra microorganismos

• Vida-média curta na circulação sanguínea (6 horas)

• Pool de neutrófilos: Medula Óssea, Circulação Sanguínea e Tecidos

NEUTRÓFILOS - características

Williams 7ª ed.

• Núcleo

- polimórfico

- 2-5 lóbulos

- cromatina condensada de coloração púrpura

• Citoplasma

- ligeiramente acidófilo

- granulações abundantes, finas e de coloração rósea

• Tamanho: 12-15 µm

NEUTRÓFILOS - morfologia

Williams 7ª ed.

Constituintes dos grânulos dos neutrófilos

Grânulos específicos

Lactoferrina Lizozima Fosfatase alcalina Colagenase tipo IV

Grânulos Azurófilos

MPO (mieloperoxidase) Lizozimas Elastase Colagenase Catepsina G

GRÂNULOS PRIMÁRIOS

ou

GRÂNULOS SECUNDÁRIOS

ou

Amulic et al. Annu. Rev. Immunol. 2012.30:459-489.

NEUTRÓFILOS – maturação e morfologia

NEUTRÓFILOS – maturação e morfologia

IL-3 Atua em fases precoses da hematopoese, afetando as células pluripotentes.

GM-CSF Estímulo de granulócitos-monócitos

G-CSF Estímulo de granulócitos

Stem Cell factor Estímulo para células progenitoras

Regulam a produção, sobrevivência e atividade

funcional

NEUTRÓFILOS – maturação

Granulação Início Conteúdo

Grânulos azurófilos Promielócito Hidrolases Fosfatase ácida Β-glicuronidase Mieloperoxidase Elastase Arilsulfatase Proteínas cationicas

Grânulos específicos Mielócito Lisozima Lactoferrina Colagenase Ativador de plasminogênio Aminopeptidase

Grânulos terciários Mielócito Gelatinase

Organelas citoplasmáticas

Fosfatase alcalina

NEUTRÓFILOS – grânulos

• Quimiotaxia

Citocinas

Monocinas

Toxinas bacterianas

Células e tecidos necrosados

• Diapedese

Selectinas e integrinas

Moléculas de adesão intercelular (ICAM)

• Comunicação com outras células

Recrutamento de células para o local da infecção

NEUTRÓFILOS – funções

Fagocitose

Degranulação ou ação

enzimática;

Geração de radicais oxidantes

Queda do pH no interior do fagossoma.

NEUTRÓFILOS – Funções

Fagocitose

Fagocitose

1) Reconhecimento e fixação da partícula 2) Engolfamento 3) Destruição ou degradação

Mecanismos dependentes de O2 (O2- e MPO)

Lizozima, lactoferrina, proteína básica principal

NEUTRÓFILOS – quimiotaxia e diapedese

Amulic et al. Annu. Rev. Immunol. 2012.30:459-489.

Borregaard, 2010. Immunity, 33.

NEUTRÓFILOS – quimiotaxia e diapedese

Amulic et al. Annu. Rev. Immunol. 2012.30:459-489.

NEUTRÓFILOS – mecanismos de ação

Amulic et al. Annu. Rev. Immunol. 2012.30:459-489.

NEUTRÓFILOS – comunicação com outras células

Amulic et al. Annu. Rev. Immunol. 2012.30:459-489.

NEUTRÓFILOS – inflamação

Produção de neutrófilos, eosinófilos e basófilos

Granulopoese

Neutrófilos

Fonte: Hoffbrand et al, 2004 – Fundamentos de Hematologia

Mieloblastos (mais imaturo)

Promielócitos

Mielocítos

Metamielócitos

Neutrófilos bastonetes

Neutrófilos segmentados

TECIDOS

Borregaard, 2010. Immunity, 33.

GRANULOPOESE

Cinética dos neutrófilos

MEDULA ÓSSEA

Pool mitótico (2 a 3 dias) Maturação e estoque (5 a 7 dias)

Stem cell, mieloblastos,

promielócitos e mielócitos Metamielócitos, bastonetes e

neutrófilos segmentados)

Pool mitótico

Quatro ou cinco

divisões

Cinética dos neutrófilos

SANGUE PERIFÉRICO

Medula óssea

Sangue

(margem)

Tecidos

Sangue

(pool circulante)

Tempo médio de vida: 5-10 dias

Maturação

Reserva

NEUTRÓFILOS – compartimentos

Cinética dos neutrófilos

Em condições de estresse e em processos reacionais

O tempo de maturação pode ser diminuído

O número de divisões podem ser abolidas

As células podem ser liberadas no sangue periférico precocemente

Em processo infecciosos

O tempo decorrido do estágio de mielócito a neutrófilo segmentado no sangue periférico pode ser reduzido a 48 horas.

Cinética dos neutrófilos

Os neutrófilos circulam no sangue periférico cerca de 6 a 10 horas

Aproximadamente a metade da quantidade de neutrófilos presentes

no sangue periférico estão marginados

Mudanças na posição de marginados para circulantes podem ocorrer

em condições de estresse, exercícios físicos ou após a

administração de adrenalina, levando a leucocitose transitória

A taxa de produção de neutrófilos é de 1,63 x 109 células/ kg de

peso corpóreo

Esta produção pode aumentar dramaticamente frente a um

estímulo inflamatório

Neutrofilia

Número de neutrófilos > 8.000 /uL

(contagem absoluta desta célula no hemograma)

NEUTROPENIA

Número de neutrófilos < 2.000/ul

Intensidade da neutropenia:

• Discreta: 1.000 a 2.000 neutrófilos/uL de sangue

• Moderada: 500 a 1.000 neutrófilos/uL de sangue

• Grave: < 500 neutrófilos/uL de sangue

EOSINÓFILOS

Eosinófilos

célula de 10-15µm

granular, com afinidade por eosina

originada a partir de cél. hematopoética CD34+

IL3, IL5 e GM-CSF são críticas para a estimulação da MO para a sua produção

essas citocinas também são produzidas por linfócitos T, CD4 e CD 8+

Citoplasma com granulação grosseira alaranjada

Núcleo polimórfico (normalmente bilobulado)

Tamanho: 10-15 µm;

Frequência relativa: até 4%

EOSINÓFILOS - morfologia

Grânulos contém proteína básica tóxica para parasitas e células

Também contém hidrolases ácidas, peroxidases, fosfolipases e catepsinas

Neutraliza a heparina e induz liberação dos basófilos

Os eosinófilos secretam IL-1, IL-3, IL-6, IL-8, TNF-α e GM-CSF

EOSINÓFILOS - grânulos

• Grânulos ricos em enzimas

• Vida média na circulação = 14-18h

• Migram para os tecidos permanecendo por aproximadamente 12 dias

• Eosinófilos maduros expressam CD16 e CD32.

EOSINÓFILOS - características

• Combate a parasitas multicelulares

Degranulação

“Fagocitose frustrada”

Citotóxico para parasitas e células hospedeiras

Através dos receptores Fc, os eosinófilos se conjugam com os parasitos recobertos com anticorpos, degranulam e liberam o seu conteúdo granular sobre a cutícula dos parasitos

• Fagocitose de complexos Ag-Ac

• Resposta alérgica

EOSINÓFILOS - funções

• Liberação de mediadores pró-inflamatórios

Estimula liberação de histamina pelos basófilos

• Apresentação de Ag à linfócitos T

• Redução de respostas inflamatórias

EOSINÓFILOS - FUNÇÕES

Valores da normalidade no sangue periférico

• 50-500/µL

• Eosinofilia:

• Leve: 500-1500/µL

• Moderada: 1500-5000/µL

• Severa: > 5000/µL

VALORES DE REFERÊNCIA PARA EOSINÓFILOS

BASÓFILOS

Citoplasma com granulação grosseira preta ou roxa

Núcleo polimórfico

Tamanho: 12-14 µm

Frequência relativa: 0-1%

BASÓFILOS - morfologia

• Participam de reações alérgicas – reações de

hipersensibilidade imediata

•Promovem atração de eosinófilos

•Produzem mediadores químicos importantes

BASÓFILOS - FUNÇÕES

• Histamina – participa reação inflamatória

• Prostaglandinas – dor e broncoconstrição

• IL-3 – atração de eosinófilos

BASÓFILOS - Mediadores químicos principais

BASOFILIA (> 0,3/ L )

• reações de hipersensibilidade

• leucemia mielóide crônica

• policitemia vera, metaplasia mieloide

MONÓCITOS

Citoplasma azul acinzentado (vacúolos)

Núcleo irregular (reniforme)

Maior leucócito circulante

Vida na circulação: 1-3 dias

Tamanho: 12-20 µm

Frequência relativa: 1 a 10%

MONÓCITOS - morfologia

Fagocitose – bactérias, debris celulares, células senescentes, partículas

Processamento de antígenos

Imunidade celular - citotoxicidade celular dependente de anticorpos

Produção de citocinas

Macrófagos

MONÓCITOS - funções

Tamanho maior que o monócito

Grânulos no citoplasma

Formas heterogêneas

Vacúolos

Modula respostas à citocinas

Secreção de moléculas bioativas

MACRÓFAGOS - tecidos

Macrófagos alveolares Células de Kupffer Foam cell

MACRÓFAGOS

Localizações comuns:

• Intestino

• Trato Genitourinário

• Pele

• Pulmões

• Medula óssea (histiócito)

MACRÓFAGOS

Ingersoll et al. Trends in Immunology 32(10). 2011.

MACRÓFAGOS

Ingersoll et al. Trends in Immunology 32(10). 2011.

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LINFÓCITOS

LINFÓCITOS

Tipos de linfócitos

Linfócitos T

Linfócitos B

Natural killer - NK

Não é possivel identificar cada um dos

tipos de linfócitos através da análise

morfológica (corantes de Romanovsky)

Identificação é feita através dos antígenos

de diferenciação (citometria de fluxo)

CD “cluster differentiation”

Citoplasma azul acinzentado

Núcleo pleomórfico

Alta relação N/C

Tamanho: 8-10 µm

Meia vida na circulação: dias, meses ou anos

Frequência relativa sangue adulto: 25 a 35%

Frequência diferente em crianças e adultos

LINFÓCITOS - morfologia

LINFÓCITOS

Tipos de linfócitos

Linfócitos T (resposta imune celular)

Linfócitos B (resposta imune humoral)

Natural killer – NK (resposta imune

inespecífica)

LINFÓCITOS

Tanto os linfócitos T como os B são capazes de

recircular do vaso para tecido e vice versa

Ativação da resposta imune depende:

Interação entre linfócitos T, B e células dendríticas

Moléculas de adesão presentes nas membranas

celulares

Os linfócitos T podem ser ativados

Estas células que apresentam morfologia de

células maduras, após a ativação readquire

a aparência de blastos e entra em divisão

LINFÓCITOS LINFÓCITOS T

A maioria dos linfócitos circulantes são

linfócitos T (~ 80%)

Função

Imunidade mediada por células

(reconhecimento de antígenos)

Inclui a hipersensibilidade tardia, rejeição

de enxertos, reações enxerto-hospedeiro,

defesa contra organismos intracelulares

(como os bacilos da tuberculose e

brucelose) e provavelmente defesa contra

células neoplásicas.

• Imunidade celular

• Produção de citocinas

• Regulação dos linfócitos B

• Tipos: T helper e T citotóxico.

Funções do Linfócito T

Disciplina de Fisiologia do Sistema Hematopoético 2011

SUB-TIPOS DE LINFÓCITOS T

(Classificados quanto a função)

Linfócitos T auxiliares (Helper) – CD4

São aqueles que induzem a síntese de

imunoglobulinas pelos linfócitos B.

Ativam LT CD8 e Macrófagos (MØ).

São sub-divididos em:

CD4 tipo 1 ou Th1: secretam IL2 e interferon

gama, mas não secretam IL 4,5 e 6 – predomínio de

resposta celular (LT e MØ).

CD 4 tipo 2 ou Th2: secretam IL 4,5 e 6 e não

secretam IL2 e interferon gama – predomínio de

resposta humoral (LB)

LINFÓCITO

Linfócitos ATIPICOS (reativos)

SUB-TIPOS DE LINFÓCITOS T

(Classificados quanto a função)

Linfócitos T citotóxicos – CD8

-Células infectadas

-Células neoplásicas

-Células alogênicas

Disciplina de Fisiologia do Sistema Hematopoético 2011

LINFÓCITOS

LINFÓCITOS B (~10-15%)

atuam na imunidade humoral, ou seja, na

produção e secreção de anticorpos, após

a transformação em plasmócito (Ag-

específico).

Marcadores de linfócitos B

CD34+

CD38+

CD10+

CD19+

Imunidade humoral

Produção de anticorpos

Apresenta Ag para o Linfócito T

Plasmócito

Funções do Linfócito B

Medula óssea

Linfócito

LINFÓCITOS

NK “natural killer”

São desprovidos de marcadores de

células T e de células B, são chamados

de células “null”

Cerca de 5 % do total da população de

linfócitos

Sua função é destruir as células

infectadas e células neoplásicas.

Tem receptor para Fc de IgG

Marcadores: CD16+ e CD56+

Funções das células NK

• Imuno-regulatórias - potente capacidade de produção de citocinas

• Função citotóxica – destruição de células infectadas e células tumorais

LINFOCITOSE

O aumento de células em divisão nos linfonodos e no baço é responsável pela linfocitose no sangue periférico

Linfocitose = aumento do número absoluto de linfócitos no sangue periférico

Número de linfócitos > 4,5 .103/uL no adulto

Número de linfócitos > 9,0 . 103/uL na criança

fase aguda das infecções

corticoterapia, quimioterapia, radioterapia

lupus eritematoso sistêmico

infecções por vírus, AIDS, sarampo, polio, varicela

estresse e desnutrição protéico calórica

LINFOCITOPENIA ( < 1.000/ L ) Cecil linfopenia < 1.500 linfócitos/ L

Martini. Fundamentals of Anatomy & Physiology. 6ed. Cap22, 2004.

Maturação e distribuição dos linfócitos

NK CELLS

Viv

ier

et a

l. N

at Im

mu

no

l. 9

(5).

20

08

Williams 7ª ed.

NK cell functions. The known and suspected biological roles of NK cells are indicated in red and blue, respectively.

Viv

ier

et a

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Células NK